包含改善皮肤外观和再生的新型肽的用于局部施用的美容制剂的制作方法

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术包含改善皮肤外观和再生的新型肽的用于局部施用的美容制剂发明领域1.本发明涉及被设计用于人皮肤的美容治疗的新型天然衍生的和合成的活性肽或肽衍生试剂，以及含有它们的美容制剂和组合物。所述活性剂有效恢复、促进和维持健康的皮肤。2.特别地，本发明公开了包括干细胞因子的所述皮肤有效剂的组合或组，其触发皮肤细胞的修复和再生，从而通过协同作用或通过不希望作用的共同减轻而有效治愈和改善老化或受损皮肤的状态。根据本发明，将这些新的试剂和因子的组称为“触发因子复合物”。3.发明背景皮肤稳态和伤口愈合人的皮肤是人体对外界的主要屏障之一，并不断被暴露至破坏性损伤。为了防止皮肤状态的不断下降，生物学已经开发出各种再生机制。在稳态状态下，皮肤上皮中细胞的持续更新需要旧细胞在表面脱落和新细胞代偿性产生以替代损失的细胞。在更严重的损伤诸如外伤(创伤)、辐照、化学损伤或炎症后，皮肤中损伤信号的积累导致复杂的先天修复程序的开展。在稳态细胞更新和专门的修复程序二者中，干细胞和祖细胞都充当皮肤维护的关键执行者。在两种情况下，它们最终都会提供新的细胞来替换旧的和损失的细胞。通常，专门的修复程序遵循四个阶段：(i)止血(在开放性创伤的情况下)，(ii)炎症，(iii)增殖，和(iv)组织重塑。稳态细胞更新和专门的修复程序这两个过程(包括它们的子阶段)都必须受到严格调节。例如，由于未能在稳态和专门的修复程序两者中限制新细胞的产生而导致的细胞增殖的错误调节可导致癌症起始。相反，未能提供足够的新细胞减慢再生过程并损害皮肤的屏障功能。同样，未能限制或停止炎症可导致慢性炎性疾病、局部组织变性、干细胞库耗竭或自身免疫性疾病。相反，未能对破坏性损伤产生适当深刻的炎症应答导致无法充分发挥再生能力，这同样损害皮肤的屏障功能并面临机会性感染的风险。在组织重塑水平，未能启动此阶段会使皮肤具有功能受损的临时组织，所述功能受损诸如缺少皮肤附件和次优的细胞外基质组成。相反，未能终止组织重塑阶段同样会导致不正确的细胞外基质组成，并可能促成纤维化。因此，身体已经形成复杂的机制来协调皮肤维护和修复程序的有序执行。然而，额外的复杂性是由于以下事实，即组织再生并不总是具有一系列预定步骤的线性路径。当先天修复机制例如由于非常大的创伤、老化或持续损伤以及相关的再生能力耗竭而不堪重负时，功能性修复受到损害，并且最终导致瘢痕形成的“损伤控制”程序被启动。4.干细胞干细胞和祖细胞通过提供新细胞来促进皮肤愈合。取决于皮肤分区，不同的干细胞群产生功能性皮肤细胞。表皮是皮肤的最外层，并且在稳态和受伤后上皮再形成中的细胞更新都主要由表皮驻留干细胞介导。表皮表面的大部分被毛囊间上皮(ife)覆盖；皮肤上皮的其它上皮结构包括毛囊和汗腺。不同的干细胞和祖细胞群驻留于皮肤上皮内的自己的小生境中：在ife中的干细胞(itg2α高、itg1α高)，在ife中的祖细胞(inv+、lgr6+)，在漏斗部中的干细胞(lrig1+)，在皮脂腺导管中的干细胞(gata6+)，在峡部和皮脂腺中的干细胞(lrig1+、lgr6+、blimp1+、plet1+)，和在隆突区中的干细胞(k15+、k19+、lgr5+、cd34+、sox9+、tcf3+) (dekoninck和blanpain, 2019, nature cell biology, 21(1), 18-24.)。所有这些细胞都可有助于创伤中的临时ife上皮细胞补充。此外，皮肤驻留间充质干细胞(msc) (crigler等人, 2007, the faseb journal, 21(9), 2050-2063)和造血干细胞(hsc) (fan等人, 2006,experimental hematology, 34(5), 672-679)可以在一定程度上额外有助于上皮再生。然而，在所有这些来源中，ife干细胞和祖细胞是创伤后短期和长期修复两者最大的上皮细胞贡献者(blanpain和fuchs, 2014, science, 344(6189))。已经报道，msc驻留于毛囊的真皮乳头(dp)和结缔组织鞘(cts)的确定小生境中(lau, paus, tiede, day和bayat, 2009, experimental dermatology, 18(11), 921-933)。此外，真皮和表皮分区不是彼此隔离，而是相互交流和合作。例如，msc与角质形成细胞及其前体细胞一起参与旁分泌循环，从而刺激上皮再形成(lau等人, 2009)。5.间充质干细胞(msc)是皮肤稳态、细胞更新、ecm动力学和组织再生的关键参与者。msc补充间充质细胞池，参与ecm蛋白沉积和降解，并通过生长因子和细胞因子的分泌来调节组织动力学。msc的各种亚类存在于皮肤的不同小生境中(hu, borrelli, lorenz, longaker和wan, 2018, stem cells international, 2018, 1-13)。这些包括毛囊(hf)驻留细胞(诸如真皮鞘细胞和真皮乳头细胞)、在真皮中的毛囊间msc、脉管系统相关的周细胞和皮下组织中的脂肪衍生的msc。此外，已经报道了主要为骨髓衍生的msc从脉管系统浸润至皮肤内的贡献。干细胞通常由自我更新和分化为功能性细胞类型的能力定义。由于常规成纤维细胞在形态上与msc无法区分并且在形式上满足(多潜能)干细胞的定义标准，因此msc/成纤维细胞与干细胞状态相关的过去区别正在争论中(soundararajan和kannan, 2018, journal of cellular physiology. wiley-liss inc, 12月1日)。无论形式分类如何，成纤维细胞在皮肤稳态、ecm动力学和伤口愈合中的作用已得到充分确立(rognoni和watt, 2018, trends in cell biology, 28(9), 709-722)。尽管如此，间充质表型多样性由真皮层相关谱系诸如乳头状(上真皮)和网状(下真皮)成纤维细胞进一步详细说明(driskell等人, 2013, nature, 504(7479), 277-281)。乳头状谱系具有“促再生”表型并且是毛囊形成所必需的，而网状谱系是快速伤口闭合所必需的，但也有助于以“促瘢痕形成”方式沉积纤维化相关ecm。还已经在分子水平上研究了间充质细胞异质性(philippeos等人, 2018, journal of investigative dermatology, 138(4), 811-825; vaculik等人, 2012, journal of investigative dermatology, 132(3部分1), 563-574)，并且最近已综述更详细的谱系关联(lynch和watt, 2018)。6.此外，除了在间充质细胞中与微环境(真皮层)相关的表型多样性外，细胞固有的异质性也存在并且是再生行为的主要决定因素。一种主要因素是engrailed-1 (en-1)状态(jiang等人, 2018, nature cell biology, 20(4), 422-431；rinkevich等人, 2015, science, 348(6232))。en-1-阴性的成纤维细胞(enf)在胚胎发育过程中介导无疤痕伤口愈合。然而，enf数目在胚胎发育后下降，并且en-1-阳性的成纤维细胞(epf)成为优势谱系并促进瘢痕形成。7.老化皮肤的特性在老化皮肤中，细胞替代不断下降，屏障功能和机械保护受损，伤口愈合和免疫应答延迟，温度调节受损，并且汗液和皮脂生成减少(farage, miller和maibach, 2010, textbook of aging skin, 1-1220)。降低的细胞更新率会导致粗糙、延迟的伤口愈合和不均匀的色素沉着。与年轻、健康的个体相比，老年人更常遭受皮肤干燥。这是基于皮脂腺在角质层中产生天然保湿因子和脂质的功能降低，从而导致层状双层减少和保水能力变差。皮肤老化还伴随着真皮层中细胞外基质(ecm)的广泛重塑、皮肤成纤维细胞的衰老、基质金属蛋白酶(mmp)的显著上调和胶原蛋白生成的减少。随之而来的胶原蛋白、弹性纤维和其它ecm蛋白的普遍短缺和断裂导致拉伸强度丧失，表现为皱纹和皮肤松弛。此外，真皮乳头的变平导致水疱形成和随后感染的风险更大。8.受损皮肤再生和瘢痕形成与信号传递分子模式相关生物学过程在各种水平上受到调节，包括细胞和分子水平。包括干细胞在内的细胞整合了内部状态和外部信号用于生物决策。同样，生理性皮肤稳态和再生由在特定时间、特定地点起作用的特定信号传递分子组控制。9.通过触发因子增强皮肤再生尽管它能够在大部分情况下维持功能性皮肤，但身体的稳态和自我修复机制并不完美。这可例如通过非常大创伤的发生、慢性活化触发的修复能力耗竭、老化、表观遗传损耗或其它急性或慢性疾病或应激因素而被加重。10.然而，先天调节系统的缺点可以通过外部调节来缓解或甚至克服。当功能恢复是目标时，外部调节通常需要一种方法来克服调节僵局。反过来，这经常规定了靶向多个调节中心的多管齐下的方法。然而，常规干预经常包含“一个实体一个目标”的策略，并因此具有有限的效力。此外，短期改善经常与克服调节僵局无关，从而导致对短期调节的持续依赖。例如，抗炎药通过限制炎症而不克服调节僵局或允许功能恢复来提供良好的短期缓解。因此，一旦停药，炎症经常再次发作。11.以前试图利用干细胞的再生能力的努力(其依赖于向皮肤供应来自各种来源的外部干细胞)已经表现出有限的成功。12.当与血管舒张剂联合使用时，epor-cd131激动剂肽-脂质复合物和缀合物最初已呈现巧妙的替代(国际专利申请wo 2018/086732，美国专利10,456,346)。这些试剂被证明在短期应用中在美容制剂中是有益的，但在长期施用期间不太有利或甚至有害。13.发明概述在第一方面，本发明涉及单一的新型肽或肽衍生的试剂，其单独地或组合地有效再生和维持人的皮肤。这些试剂的特征在于由seq id no: 1ꢀ‑ꢀ19呈现的肽序列/式，其在以下部分中更详细地进行描述。14.在第二方面，本发明涉及用于局部施用至皮肤的美容制剂或组合物，其包含至少一种触发或增强或改善皮肤再生或外观的肽或肽衍生物，其中所述至少一种肽或肽衍生物选自由刺激wnt/β-连环蛋白信号传递通路的肽和肽衍生物组成的集合(a)，并且包含或具有序列/式：(i)lnpsecpktvlgaeygktldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 1)(ii)lnpsecpktvlgaststldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 2)(iii)z1-lnpsecpktvlgaeygktldasystaeaenhvrl (seq id no: 3)(iv)z1-lnpsecpktvlgaststldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 4)其中z1是共价地连接至所述肽的n-端的载体部分，其减少所述肽的组织穿透和/或跨基底膜渗透。15.在本发明的优选实施方案中，z1是具有在8ꢀ‑ꢀ60 kda、优选20ꢀ‑ꢀ40 kda范围内的分子量的聚乙二醇(peg)。16.在第三方面，本发明涉及用于局部施用至皮肤的美容制剂或组合物，其包含至少一种触发或增强或改善皮肤再生或外观的肽或肽衍生物，其中至少一种肽或肽衍生物选自由作为组织保护性异源二聚体或异源寡聚体epor/cd131 (促红细胞生成素受体/分化簇131)受体的激动剂的肽和肽衍生物组成的集合(b)，并且包含或具有序列/式：(v)ggggettnmwarewmglpcqdqꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 5)(vi) z2-ggggettnmwarewmglpcqdqꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 6)其中z2是共价地连接至所述肽的n-端的支链或无支链脂肪酸的酰基。17.在本发明的优选实施方案中，z2是5ꢀ‑ꢀ42个碳原子、优选5ꢀ‑ꢀ25个碳原子的支链或无支链脂肪酸，例如z2是肉豆蔻酰基。18.在本发明另外的优选实施方案中，由seq id no 5或6呈现的所述基于肽/肽衍生物的激动剂在应用过程中部分地或完全地失活，优选通过肽序列内甲硫氨酸残基的空气氧化。19.在本发明另外的优选实施方案中，所述美容制剂或组合物进一步包含适当量的组织保护性异源二聚体或异源寡聚体epor/cd131 (促红细胞生成素受体/分化簇131)受体的基于肽/肽衍生物的拮抗剂，其中所述拮抗剂调节或减轻或抑制由seq id no 5或6呈现的激动剂的生物活性。20.在本发明的优选实施方案中，所述拮抗剂包含或具有序列/式ggggettnmwahdwmglpradqꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 17)或z2ꢀ‑ꢀggggettnmwahdwmglpradqꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 10)其中z2是连接至所述肽的n-端的5ꢀ‑ꢀ42个碳原子的支链或无支链脂肪酸的酰基。21.在本发明另外的优选实施方案中，由seq id no 10或17呈现的所述基于肽/肽衍生物的拮抗剂在应用过程中部分地或完全地失活，优选通过肽序列内甲硫氨酸残基的空气氧化。22.通过空气氧对所述试剂的序列中的甲硫氨酸残基的氧化来调节所述epor/cd131激动剂和/或拮抗剂的活性，是本发明另外的重要发现。23.在第四方面，本发明涉及用于局部施用至皮肤的美容制剂或组合物，其包含至少一种触发或增强或改善皮肤再生或外观的肽或肽衍生物，其中至少一种肽或肽衍生物选自由作为人tgf-β3变体的肽和肽衍生物组成的集合(c)，并且包含或具有序列/式(vii) aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcsꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 7)(viii) aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtgggꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 8)(ix) aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg-z3ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 9)其中x是k或e，且z3是连接至c-端的糖聚合物。24.在本发明的优选实施方案中，z3是或包含寡聚体或多聚体或聚合物，其包含15-50个、优选18-30个含有海藻糖或海藻糖衍生物部分的单体单元。25.在此可显示，海藻糖衍生物单体单元诸如4,6-o-(4-乙烯基亚苄基)-α,α-d-海藻糖或q-6-脱氧-海藻糖(q-6doth)根据本发明优选地是合适的。z3在seq id no. 7和8的tgf‑ß3肽序列的c-端处的连接(产生seq id no: 9的肽衍生物)引起所得融合分子的更长期的稳定性，这对于美容制剂和相应的皮肤应用而言是重要的。26.因而，tgf‑ß3融合肽，aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg-[4,6-o-(4-乙烯基亚苄基)-α,α-d-海藻糖]n (seq id no: 18)，和aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg-[q-6doth]n (seq id no: 19)，其中x是k或e，且n是15ꢀ‑ꢀ50之间的整数，代表本发明的特别优选的实施方案。[0027]如由seq id no: 1ꢀ‑ꢀ19中的任一个所指定的肽或肽衍生物可以任选地包封在脂质体或神经酰胺结构中或附接至脂质体或神经酰胺结构，以在应用期间改善释放性能。[0028]应当强调的是，上面提到的每种肽可能在上文和下文更详细描述的皮肤美容治疗中单独有效。[0029]尽管如此，本发明的发明人可以表明，与仅含有各单一试剂的制剂相比，两种或三种肽的组合(每种肽选自如上文和下文所指定的不同集合(a)、(b)和(c)，形成用于美容皮肤应用的所谓的触发因子复合物)在美容制剂的皮肤治疗效果和长期稳定性方面更有效得多并且显示出协同结果。[0030]因此，在第五个且重要的关键方面，本发明提供了用于皮肤的局部美容应用的所述试剂的组或触发因子复合物，其包含至少一种上文和下文提到的集合(a)、(b)、(c)中的任一个的肽或肽衍生物以及不同集合的至少一种肽或肽衍生物。[0031]换而言之，本发明提供了(i)第一触发因子复合物，其包含集合(a)的一种或多种肽或肽衍生物和集合(b)的一种或多种肽或肽衍生物；(ii)第二触发因子复合物，其包含集合(a)的一种或多种肽或肽衍生物和集合(c)的一种或多种肽或肽衍生物；(iii)第三触发因子复合物，其包含集合(b)的一种或多种肽或肽衍生物和集合(c)的一种或多种肽或肽衍生物；和(iv)第四触发因子复合物，其包含集合(a)的一种或多种肽或肽衍生物和集合(b)的一种或多种肽或肽衍生物和集合(c)的一种或多种肽或肽衍生物。[0032]与仅包含来自集合(a)或(b)或(c)中的任一个的单一肽组分的相应美容制剂或组合物相比，每种触发因子复合物显示出改善的皮肤治疗性能。[0033]然而，根据本发明，最有效并因此优选的是触发因子复合物(iv)，其包含集合(a)的至少一种肽或肽衍生物和集合(b)的至少一种肽或肽衍生物和集合(c)的至少一种肽或肽衍生物。[0034]更详细地，触发因子复合物是优选的，其包含(i)一种或多种肽或肽衍生物，其选自由以下组成的集合(a)：lnpsecpktvlgaeygktldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 1)，lnpsecpktvlgaststldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 2)，z1-lnpsecpktvlgaeygktldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 3)，z1-lnpsecpktvlgaststldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 4)，和(ii)一种或多种肽或肽衍生物，其选自由以下组成的集合(a)：ggggettnmwarewmglpcqdqꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 5)z2-ggggettnmwarewmglpcqdqꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 6)，和(iii)一种或多种肽或肽衍生物，其选自由以下组成的集合(a)：aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcs (seq id no: 7)，aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg(seq id no: 8)，aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg-z3 (seq id no: 9)，其中z1、z2、z3和x具有如上所述的含义。[0035]此外，提及的触发因子复合物以及仅包含集合(a)、(b)或(c)中的任一个的单一肽或肽衍生物的组合物，可以包含在美容和皮肤治疗用途中有效的其它试剂和/或成分。[0036]因此，发明人已经证实，除了如上公开的具有seq id no 10和17的拮抗剂的任选存在之外，根据本发明的相应美容制剂可以进一步包含：(a)肽或肽衍生物，其引起3型胶原蛋白衍生的matrikine活性并且包含或具有选自以下的序列/式之一：lqglpgtggppgengkpgepgpkgdagapgapggkgdagapgergppgꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 11)，vkgesgkpganglsgergppgpqgꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 12)，z2-lqglpgtggppgengkpgepgpkgdagapgapggkgdagapgergppg(seq id no: 13)，z2-vkgesgkpganglsgergppgpqgꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 14)，和/或(b)肽或肽衍生物，其引起cd26/dpp4抑制并且包含或具有选自以下的序列/式之一：eihqeepiggqsgsgg-kpi,ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 15) eihqeepiggk[z2]sgsgg-kpiꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 16)，其中z2是5-42个碳原子的无支链或支链脂肪酸的酰基，诸如肉豆蔻酰基，gꢀ‑ꢀk表示g (甘氨酸)的羧基和k (赖氨酸)的ε氨基之间的异肽键，且k[z2]表示k的ε氨基官能团和脂肪酸z2的羧基官能团(诸如肉豆蔻酰基)之间的酰胺键，具有有利的和改进的性能。[0037]综上所述，并考虑到应被明确地视为对本发明的发现没有约束力的假定的一般作用模式，可以陈述以下内容：此发明不仅提供了特定的单一肽试剂，而且还提供了新型触发因子复合物，即一些新型肽和/或化学实体的组，它们使身体能够通过克服多种调节僵局来利用其先天的再生能力以发挥更大的潜力。[0038]根据本发明的触发因子复合物的第一个关键特征是适用于需要广泛应用范围的多种损伤和皮肤病症。[0039]根据本发明的触发因子复合物的第二个关键特征是它的所有组分可以在一个制剂中一起应用，而不是在时间和空间上依次应用，因为愈合过程将规定它用于单试剂调节。确实如此，因为由触发因子复合物施加的调节性调节与局部微环境协作。因此，触发因子复合物的给定子集的活性只有在及时的时候才有效。例如，在愈合过程的给定中间阶段需要触发因子复合物的给定子集的效力。当确实如此时，触发因子复合物的这个分子子集总是有活性的，即在需要其效力之前，和甚至在需要其效力之后。然而，触发因子复合物利用控制活性向效力转化的四种机制。首先，这包括细胞外和细胞内信号转导与局部时间特异性皮肤状态信号的协作和调节，所述信号包括生长因子、细胞因子、趋化因子、损伤相关分子模式、神经元释放的分子、ecm分子和matrikine。其次，这包括细胞对所应用的触发因子复合物的感受性，即接受能力，例如通过细胞表面受体表达。第三，这包括利用取决于细胞状态的对相同刺激的情境性细胞应答。这尤其涉及与干细胞和祖细胞分化状态相关的表观遗传状态，这两者反过来在空间和时间上都与微环境相关。第四，蛋白酶活性、ph和氧化电位的局部微环境调节活性成分的局部可用性和活性。[0040]触发因子复合物的第三个关键特征是在没有损伤的情况下不干扰。这意味着，对抗皮肤病症“a”的触发因子复合物的子集在应用于受病症“b”影响的皮肤或健康皮肤时不会引起不良作用。[0041]此外，根据本发明的触发因子复合物利用先天性信号传递通路来驱动细胞行为。本发明的触发因子复合物的分子引导干细胞行为朝向再生细胞程序。这通过调节通常决定细胞行为的先天性细胞信号传递通路来实现。[0042]最后，本发明涉及所述美容制剂和分离的肽或肽衍生物用于人皮肤的局部美容治疗的用途，所述局部美容治疗包括皮肤修复、皮肤回春、皮肤自然光泽、皱纹减少、皮肤抗衰老以及干燥、暗沉和易破裂皮肤的避免和改善。[0043]发明详述根据本发明，术语“肽”意指具有通过酰胺键共价连接在一起的氨基酸序列的任何肽，并且术语“肽”在表述上包括被另外命名为多肽的肽。[0044]根据本发明，术语“肽衍生物”意指包含肽部分的任何化学分子，所述肽部分包含通过酰胺键共价连接在一起的至少五个氨基酸，其中所述肽共价地连接至非肽部分。此类非肽部分在表述上包括有机化学残基，诸如但不限于脂肪族、芳族、同素环族、杂环族、寡聚或聚合部分。特别地，所述非肽部分包括脂肪酸、含有海藻糖或海藻糖衍生物的寡聚体/聚合物和常规药用载体(诸如聚乙二醇)。[0045]如本文所使用的，术语“wnt/β-连环蛋白信号传递通路”意指导致β-连环蛋白在细胞质中积累并最终易位到细胞核内以充当属于tcf/lef家族的转录因子的转录共活化剂的wnt通路。[0046]如本文所使用的术语“epor/cd131 (促红细胞生成素受体/分化簇131)受体”意指组织保护性epo受体，其包含一个或多个epo受体亚基(epor)和一个或多个分化簇131蛋白(cd131)。分化簇131蛋白也被称作细胞因子受体共同亚基β(csf2rb)或白介素-3受体共同β亚基(il3rb)。[0047]如本文所使用的，术语“matrikine”意指源自细胞外基质(ecm)蛋白的片段化并通过与特定受体相互作用来调节细胞活性的肽。在本发明的上下文中，所述matrikine包括刺激和调节皮肤组织中的组织再生和细胞外基质材料合成的肽。[0048]如本文所使用的，术语“触发因子复合物”意指一组肽、肽衍生物和/或其它化学实体，它们通过调节皮肤微环境和调节干细胞行为，使人皮肤能够更大程度地利用其先天再生能力。[0049]氨基酸代码：为了公开肽序列，本文使用常规的单字母氨基酸代码。为了清楚起见，a表示丙氨酸，c表示半胱氨酸，d表示天冬氨酸，e表示谷氨酸，f表示苯丙氨酸，g表示甘氨酸，h表示组氨酸，i表示异亮氨酸，k表示赖氨酸，l表示亮氨酸，m表示甲硫氨酸，n表示天冬酰胺，p表示脯氨酸，q表示谷氨酰胺，r表示精氨酸，s表示丝氨酸，t表示苏氨酸，v表示缬氨酸，w表示色氨酸，y表示酪氨酸。[0050]tgfβ3模块tgfβ信号传递是皮肤稳态和再生的主要调节剂(gilbert, vickaryous和viloria-petit, 2016)。所有tgfβ同工型(tgfβ1、tgfβ2、tgfβ3)在伤口愈合中起关键作用。然而简单来说，不同的同工型充当天然对应物。tgfβ1和2促进炎症细胞的迁移和活化、肉芽组织的形成和成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变，从而促进瘢痕形成。相反，tgfβ3减弱炎症性过程、损伤相关的ecm重塑并限制肌成纤维细胞表型。此外，tgfβ3的应用不限于皮肤的宏观损伤，还可以引导细胞行为朝向促进微损伤或环境应激的皮肤的再生。尽管如此，tgfβ在体内的作用是复杂的，并且施用重组tgfβ3并不提供持久的治疗益处，因为tgfβ3药物juvista的临床iii期研究的失败表明了这一点(günter和machens, 2012, european surgical research, 49(1), 16-23)。[0051]然而，本发明公开了改造的人tgfß变体，即tgfß3 t57k l68h s102e，作为用于美容应用支持健康皮肤的合适试剂。该构建体可例如从稳定表达的cho细胞重组产生，并具有以下氨基酸序列：aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcs (seq id no: 7)。[0052]蛋白稳定性是基于蛋白的产品的常见问题。包括化学反应、解折叠和聚集在内的许多降解途径导致活性丧失和潜在有害的副产物(诸如免疫原性物质，如寡聚体和更高阶组装体等)产生。蛋白在生化复杂的混合物诸如化妆品中的预期应用对确保稳定性提出了甚至更大的挑战。在化妆品中常用的化学物质(包括脂质)在热力学上偏好暴露疏水表面的未折叠蛋白状态。此外，化妆品富含蛋白聚集的种子。实际上，来自哺乳动物表达宿主的重组tgfß3 t57k l68h s012e在标准美容制剂中在商业兼容时间内不稳定。重组蛋白经常由赋形剂稳定化(kamerzell, esfandiary, joshi, middaugh和volkin, 2011, advanced drug delivery reviews, 63(13), 1118-1159)。然而，这些赋形剂中的许多在有效的蛋白稳定浓度下干扰美容制剂或与其它美容成分负面地相互作用。蛋白稳定的另一种巧妙方法是纯化后糖聚合物-缀合，其独立于或附加于表达相关的蛋白糖基化(mancini, lee和maynard, 2012, journal of the american chemical society, 134(20), 8474-8479)。[0053]然而，硫醇反应性缀合是半胱氨酸位点非特异性的，从而导致标记多态性，并且此外还导致标记诱导的非功能性tgfβ物质以及批次间变异性的高风险。这种非特异性标记可以通过利用基于蛋白标签的酶催化缀合来规避(falck和müller, 2018, antibodies, 7(1), 4.)。例如，可以采用基于分选酶a的策略。在该策略中，肽基序lpxtg(例如其中x为k或e)在c端融合至tgfβ3或任何tgfβ3变体，并具有以下序列：[tgfß3变体]-lpxtggg，或具体指tgfß3 t57k l68h s102e：aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg(seq id no: 8)可以重组地产生这种融合蛋白并将其纯化。可以通过糖聚合物增强蛋白稳定性，所述糖聚合物例如由4,6-o-(4-乙烯基亚苄基)-α,α-d-海藻糖单体制成的聚乙烯基，优选18个或更多个单体构成聚合物。在一种合成策略中，一个糖聚合物末端与ggg肽化学偶联，例如通过用氨基化学官能化聚合物末端以及与c-端甘氨酸的羧基端形成酰胺键。这种融合构建体ggg-糖聚合物可以位点特异性(lpxtg-特异性)的方式通过分选酶a经由共价键合至重组tgfβ3或tgfβ3变体的lpxtg基序而进行酶促缀合。[0054]这导致以下融合分子：[tgfβ3变体]-lpxtggg-糖聚合物，或具体指tgfβ3 t57k l68h s102e：aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg-z3(seq id no: 9)其中x是k或e，且z3是连接至c-端的糖聚合物，诸如海藻糖寡聚体。[0055]在由4,6-o-(4-乙烯基亚苄基)-α,α-d-海藻糖的n个单体制成的聚乙烯基糖聚合物的具体情况下，对于tgfβ3 t57k l68h s102e，序列如下：aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg-[4,6-o-(4-乙烯基亚苄基)-α,α-d-海藻糖]n (seq id no: 18)此外，也可能通过从与海藻糖部分缀合的氨基酸单体进行固相肽合成来生成作为(多)肽的糖聚合物(de bona等人, 2009, journal of peptide science, 15(3), 220-228.)。固相肽合成(spps)可以通过氨基酸延伸的逐步方式进行控制。这提供了远多于比化学聚合的对最终产物长度的控制，如4,6-o-(4-乙烯基亚苄基)-α,α-d-海藻糖的聚合所说明的。因此，在基于spps的策略中的产物异质性远小于在基于化学聚合的策略中。为了实施这样的基于spps的策略，必须使用与spps兼容的(例如fmoc/boc保护的)海藻糖缀合的氨基酸。本领域技术人员将认识到，有许多方法产生这样的试剂。一种可能性是经由化学酰胺化将氨基官能化的海藻糖共价键合至fmoc保护的氨基酸的侧链羧基官能团。更具体地说，6-氨基6-脱氧海藻糖(dutta等人, 2019, acs central science, acscentsci.8b00962)可被用于特异性地酰胺化α羧基保护的α氨基保护的谷氨酸的γ羧基功能。所得6-脱氧海藻糖官能化的酰胺(谷氨酰胺衍生物)，(q-6doth)部分可被用作spps的结构单元。这可能需要除去其α羧基保护基，但保留其α氨基保护基，这可以通过化学手段实现。作为结果，可以产生ggg-(q-6doth)n多肽，其中三个n-端甘氨酸残基共价结合到n个单元的6-脱氧-海藻糖官能化的谷氨酰胺。spps能够很好地控制这些6-脱氧-海藻糖官能化的谷氨酰胺的数目n。为了稳定tgfβ3衍生物，18或更大的数目n是所期望的。这种海藻糖官能化的肽可以通过分选酶a共价地连接至tgfβ3变体‑ꢀlpxtg融合体。可以重组地产生此类tgfβ3变体‑ꢀlpxtg融合蛋白并将其纯化。[0056]前述分选酶介导的缀合产生下述融合分子：[tgfβ3变体]-lpxtggg-[q-6doth] n，或具体指tgfβ3 t57k l68h s102e：aldtnycfrnleenccvrplyidfrqdlgwkwvhepkgyyanfcsgpcpylrsadtkhstvlglynthnpeasaspccvpqdlepltilyyvgrtpkveqlenmvvksckcslpxtggg-[q-6doth]n (seq id no: 19)，其中n是15至50之间的整数。[0057]与优选包含18个或更多个海藻糖变体部分的上述结构缀合的tgfβ3变体是稳定的，例如具有解折叠抗性和聚集抗性，在包括乳液在内的标准美容制剂中在30℃持续至少6个月。在此背景下，解折叠抗性被定义为如由圆二色性(cd)光谱法测量的折叠状态保持》 95%。聚集抗性被定义为如由动态光散射(dls)测量的》 4倍单体分子量或更多的寡聚体物质的低(《1%)相对丰度。为了对纯化的蛋白进行cd光谱和dls测量，通过大流量室透析从美容制剂中提取tgfβ3变体。透析膜孔大到足以允许tgfβ3变体跨膜渗透。通过亲和色谱法同时从稀溶液中浓缩tgfβ3变体蛋白。[0058]此类稳定的tgfβ3变体缀合物在最终化妆品中的优选浓度范围为80pm至500nm。[0059]干细胞稳态模块干细胞是损伤后组织发育、稳态、更新和再生的关键媒介。反过来，它们受到各种外部因素的调节，所述因素包括信号传递分子、细胞接触和细胞外基质。包括皮肤在内的各种组织中的一种关键干细胞调节剂是wnt信号传递(clevers, loh,和nusse, 2014, science, 346(6205), 1248012)。wnt信号传递作用于不同小生境中的各种干细胞群，例如ife干细胞和hf干细胞，具有部分不同的作用(choi等人, 2013, cell stem cell, 13(6), 720-733)。此外，它对于干细胞的稳态增殖至关重要，但在炎症期间可以通过其它过度增殖诱导剂而被绕过。尽管如此，wnt信号传递通常促进干细胞和祖细胞分区的扩张。例如，自分泌wnt信号传递刺激毛囊间表皮(lim等人, 2013, science, 342(6163), 1226-1230)和毛囊隆突区(jaks等人, 2008, nature genetics, 40(11), 1291-1299; lim, tan, yu, lim和nusse, 2016, proceedings of the national academy of sciences of the united states of america, 113(11), e1498-505)中axin2-阳性的基底层干细胞的自我更新。此外，持续的表皮wnt信号传递甚至可以诱导富含干细胞的异位毛囊。此外，上皮wnt/β-连环蛋白信号传递影响真皮分区并促进真皮向幼年、新生儿状态的重编程(collins, kretzschmar和watt, 2011, development, 138(23), 5189-5199；lichtenberger, mastrogiannaki和watt, 2016, nature communications, 7, 1-13)。真皮效应是增加的成纤维细胞增殖、ecm重塑、成熟和改变的脂肪生成。具体而言，表皮的wnt/β-连环蛋白信号传递驱动“促再生”乳头状成纤维细胞谱系的繁殖(driskell等人, 2013, nature, 504(7479), 277-281)。[0060]尽管如此，wnt信号传递是与上下文相关的，并可以加重病理组织状况。例如，wnt/β-连环蛋白是在包括皮肤在内的各种组织中纤维化的主要驱动因素(burgy和königshoff, 2018, matrix biology, 68-69, 67-80)。wnt/β-连环蛋白的构成性活化甚至足以在各种模型中诱导纤维化(burgy和königshoff, 2018, matrix biology, 68-69, 67-80)。这在过去已经排除了wnt信号传递的简单外部刺激用于美容目的。特别是，纤维化表现为真皮相关的成纤维细胞向肌成纤维细胞转变的干扰、异常的ecm沉积和未消退的炎症。因此，wnt通路刺激的空间分离可以减轻纤维化诱导的问题，所述空间分离需要在表皮中的wnt信号传递刺激和在真皮中不存在刺激。这类空间控制可以在允许wnt通路刺激蛋白的细胞类型特异性基因表达的实验模型系统中轻松实现(lichtenberger等人, 2016, 文献同上)。然而，这类通过改变宿主基因组进行的调节对于医疗或化妆品中的常规应用是不可能的。相比之下，wnt信号传递的药理学刺激剂可作为小分子获得。然而，它们在局部施用后在皮肤内的有效扩散和生物利用度不允许对活性的有效空间控制。因此，目前的小分子wnt刺激剂可以在表皮中发挥其活性，但也会以有效浓度在真皮中积累并在那里发挥其活性。天然受体激动剂或其衍生物的使用代表未探索的假设选择。然而，这因wnt激动剂的复杂性而复杂化，所述激动剂包括19种人wnt蛋白，它们交叉作用于至少10种fzd受体和lrp5/6共受体(janda等人, 2017, nature, 545(7653), 234-237; katoh, 2008, current drug targets, 9(7), 565-570; nusse和clevers, 2017, cell, 169(6), 985-999)。此外，wnt蛋白为了活性通常需要位点特异性的棕榈酰化，尽管这在新型人工融合构建体替代性激动剂中可以避免(janda等人, 2017, 文献同上)。[0061]本发明公开了刺激wnt/β-连环蛋白信号传递并证明可用于美容用途的新实体。这些分子的特征在于它们在常规美容制剂中的稳定性，但在原位具有短程活性，即活性变体在表皮中有足够的可用性，而在真皮中没有。[0062]这些实体包括：lnpsecpktvlgaeygktldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀ(seq id no: 1)lnpsecpktvlgaststldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 2)此外，这些肽可以通过融合载体分子z1在n端进行修饰，从而限制它们的组织穿透和跨基底膜渗透。这允许局部应用更高浓度的分子，而不会达到超出基底膜的有效浓度。[0063]z1)ꢀ‑ꢀlnpsecpktvlgaeygktldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀ(seq id no: 3)(z1)ꢀ‑ꢀlnpsecpktvlgaststldasystaeaenhvrlꢀꢀꢀ(seq id no: 4)任何大小的载体都会减少肽的组织穿透和跨基底膜渗透，从而提供益处。一种特别合适的载体(z1)是在8-60kda范围内的聚乙二醇。它可以使用nhs官能化peg与肽的n端共价偶联。无论载体类型如何，如果跨表皮渗透半衰期高于740小时，则wnt刺激实体的表现尤其有用，从而允许应用更高剂量的此类实体。[0064]通过随时间测量表皮和真皮中此类实体的浓度，可以研究此类实体的跨表皮渗透半衰期，以生成浓度时间曲线。可通过以下进行测量：随着时间的推移对皮肤穿孔活组织检查进行采样，通过手术解剖分离表皮和真皮，均质化和裂解组织样本，通过基于抗体的亲和富集手段来富集样品中的感兴趣实体，以及将富集的样品关于绝对定量进行质谱分析。[0065]具有高于740小时的跨表皮渗透半衰期的此类载体缀合的wnt激动剂在最终化妆品中的优选浓度范围为150nm至500µm。[0066]matrikine模块matrikine是皮肤中具有生物活性的天然存在的分子，其由组织重塑过程中细胞外基质的降解引起。细胞外基质在伤口愈合和瘢痕形成中的作用已被广泛研究(lo, zimmermann, nauta, longaker和lorenz, 2012, reviews, 96(3), 237-247 ; marshall等人, 2016, advances in wound care, 7(2), 29-45; xue和jackson, 2015, advances in wound care, 4(3), 119-136)。matrikine可以由基质金属蛋白酶(mmp)产生，并同样可以调节各种生物学过程，诸如炎症、免疫细胞趋化性、器官发育、伤口愈合、ecm合成和血管生成(bonnans, chou和werb, 2014, nature reviews molecular cell biology, 15(12), 786-801; bunney, p. e., zink, a. n., holm, a. a., billington, c. j.和kotz, 2017, physiology & behavior, 176(205), 139-148)。与生长因子和细胞因子一起，matrikine已成为化妆品中用于皮肤调理的活性生物制品的第三支柱(aldag, teixeira和leventhal, 2016, cosmetic and investigational dermatology, 9, 411-419)。例如，商业matrikine包括肽ghk、gekg、kttks及其酰化形式，它们已经被证实刺激一般ecm合成或特定ecm蛋白(诸如纤连蛋白或胶原蛋白)的合成。然而，已经描述了包括各种ecm蛋白的更大片段在内的更多的matrikine，并且在某种程度上也在伤口愈合中对其进行了研究(ricard-blum和salza, 2014, experimental dermatology, 23(7), 457-463)。这些包括来自聚集蛋白聚糖核心蛋白、蛋白聚糖连接蛋白、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、肌腱蛋白、多配体蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、弹性蛋白，弹性蛋白原和各种胶原蛋白的片段，包括iv型胶原α链、xiii型胶原α链、xii型胶原α链、xxiii型胶原α链、xix型胶原α链和xxv型胶原α链。胶原蛋白是一些最丰富的ecm蛋白，也是生理和病理过程中ecm状态的关键调节剂和标志。例如，已知新生儿皮肤和非瘢痕形成的伤口愈合皮肤具有高的iii型胶原与i型胶原的丰度比，而已知老化皮肤和瘢痕形成创伤皮肤具有低的iii型胶原与i型胶原的丰度比(marshall等人, 2016, advances in wound care, 7(2), 29-45)。此外，已经显示减少量的iii型胶原会促进肌成纤维细胞分化和纤维化(volk, wang, mauldin, liechty和adams, 2011, cells tissues organs, 194(1), 25-37)。iii型胶原可以被基质金属蛋白酶1、2、3、8、10、13、14、16降解(sternlicht和werb, 2001, annual review of cell and developmental biology, 463-516)。已针对各种mmp鉴定了基质金属蛋白酶切割基序，并且大多大致构成pxxl、pxxi、pxxv或pxxm基序(eckhard等人, 2016, matrix biology, 49(2016), 37-60)。[0067]本发明公开了以下衍生自3型胶原蛋白α链1的肽(与3型胶原蛋白α链1序列中两个末端的mmp切割位点一致)具有matrikine活性，并可被用于皮肤伤口愈合和美容应用：lqglpgtggppgengkpgepgpkgdagapgapggkgdagapgergppgꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 11)vkgesgkpganglsgergppgpqg (seq id no: 12)这些肽可以通过化学手段(诸如固态肽合成)或通过用基质金属蛋白酶消化重组3型胶原蛋白α1蛋白来生产。在后者的情况下，这些特定的感兴趣的肽可以借助于液相色谱法或通过电泳(诸如毛细管电泳)从水解产物中纯化。尽管如此，也可将粗水解产物用于化妆品中。[0068]此外，上述肽可以在n端进行酰化以增强组织递送：酰基-lqglpgtggppgengkpgepgpkgdagapgapggkgdagapgergppg (seq id no: 13)酰基-vkgesgkpganglsgergppgpqg (seq id no: 14)酰基可指经由脂肪酸的羧基官能团与肽n-端的氨基官能团之间的酰胺键连接至肽的具有5-42个碳原子的任何无支链脂肪酸，例如肽n-端的肉豆蔻酰化。[0069]此类酰化的3型胶原蛋白α链1衍生的肽在最终化妆品中的优选浓度范围为50pm至500nm。[0070]epor-cd131异源受体激动剂模块epor/cd131异源二聚体或异源寡聚体受体的激动剂是组织保护剂(leist, 2004, science, 305(5681), 239-242)。此受体作为包含促红细胞生成素(epo)受体和cd131蛋白(分化簇131，也在细胞因子受体共同亚基β或基因名csf2rb的名称下已知)的异源二聚体或异源寡聚体出现。然而，利用这种潜力已被证明具有挑战性。由于其副作用和其它问题，天然受体激动剂促红细胞生成素已在早期被放弃作为治疗剂。此外，当与血管舒张剂联合使用时，epor-cd131激动剂肽-脂质复合物和缀合物最初已呈现出巧妙的替代品(bader, 2017, pct/ep2017/001289)。这些试剂被证明在短期内在美容制剂中有益，但被证明在长期施用期间是有害的。这在很大程度上可以归因于对再生能力的长期过度刺激，从而导致这些能力耗竭。在分子和细胞水平上，这与部分干细胞耗竭、表观遗传变化、祖细胞向成熟细胞的分化受损以及干细胞向“再生刺激”抗性表型的转变有关。因此，必须严格控制这些试剂的使用以避免有害的继发影响。然而，这在实践中具有挑战性。首先，对这些试剂的应答性是群体中效应物信号传递通路的多种蛋白的基因型变异性的基础。其次，对不希望的长期影响的贡献及其表现取决于预先存在的组织条件。第三，自身施用/消费的个人依从性和对下降效果的潜在补偿反应显示出一个主要问题。在产品试验研究中，一些试验个体试图通过应用更多产品或以更高的应用频率来弥补产品性能的下降。然而，这甚至加剧了下降。最终，最初对产品感到满意的试验个体中的58.4%在9个月内的各个时间点经历了有益效果的下降。此外，13.3%的试验个体甚至报告了不良作用，即与试验开始前相比，皮肤状态的明显恶化。[0071]本发明公开了充当epor/cd131异源二聚体的/异源寡聚体受体的激动剂的新型触发剂，并且其不引起在以前的同类触发剂中观察到的不希望的长期效应。这是基于对先前试剂的两项改进。[0072]第一个改进是快速失活机制的并入，所述机制在原位(即当应用于皮肤时)使活性剂快速失活。当应用新产品时，这会导致触发剂活性的立即衰减的短暂峰值。活性的这种时间限制导致触发剂的即时性能的仅轻微降低，但也导致不希望的长期作用的显著降低。[0073]为了实现这样的降解机制但保持产品的可储存性，一旦施用试剂，就必须开始或急剧加速降解。通常，应用的时间点与离开储存容器的时间点一致。这可以结合应用点(例如在皮肤上)的物理、化学或生物条件相比于储存容器中存在的条件之间的差异来加以利用。这可以根据以下策略加以利用：本发明公开了对氧化敏感的新型epor/cd131受体激动剂，所述氧化以合适的方式通过环境氧化剂(包括空气中的分子氧)进行，因此在应用后需要适当快速地氧化诱导的化合物失活。由于储存容器中氧化剂的缺乏，因此在储存容器中不发生氧化诱导的失活。[0074]该肽的序列如下：ggggettnmwarewmglpcqdqꢀꢀꢀ(seq id no: 5)该肽可以在其n-端进行酰化以增加组织渗透性，从而产生以下结构：酰基‑ꢀggggettnmwarewmglpcqdqꢀꢀꢀ(seq id no: 6)酰基可指经由脂肪酸的羧基官能团与肽n-端的氨基官能团之间的酰胺键连接至肽的具有5-42个碳原子的任何无支链脂肪酸，例如肽n-端的肉豆蔻酰化。在产品与空气氧接触并随后抗氧化剂耗竭后，肽甲硫氨酸被氧化为甲硫氨酸亚砜，从而使肽失活。[0075]第二个改进是拮抗剂的并入，其也发生等效降解。在没有拮抗剂的情况下，应用更多产品需要应用更多活性剂，从而引发更强和更长的刺激。在有拮抗剂时，应用更多产品需要以恒定比例应用更多活性剂(即激动剂)和更多拮抗剂。因此，受体活化及其下游信号传递可以受到限制，并其对所应用产品的量的依赖得到减少。不是激动剂和拮抗剂的绝对量，而是它们的受体亲和力和它们的活化或抑制受体的潜力分别控制着总受体活化强度。尽管如此，拮抗剂需要经历与激动剂类似的失活。如果没有，拮抗剂将在激动剂失活后成为主导。这是不希望的，因为它也会抑制基础内源性信号传递。此外，拮抗剂会通过重复的产品应用而积累，从而进一步增加活性拮抗剂与激动剂的比例(即在这种情况下失衡)。[0076]合适的拮抗剂化合物的序列如下：ggggettnmwahdwmglpradqꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 17)该肽可以在其n-端进行酰化以增加组织渗透性，从而产生以下结构：酰基‑ꢀggggettnmwahdwmglpradqꢀꢀꢀꢀ(seq id no: 10)酰基可指经由脂肪酸的羧基官能团与肽n-端的氨基官能团之间的酰胺键连接至肽的具有5-42个碳原子的任何无支链脂肪酸，例如肽n-端的肉豆蔻酰化。[0077]此类epor/cd131激动剂和拮抗剂肽在最终化妆品中的优选浓度范围为30pm至250nm。[0078]通过cd26/dpp4抑制限制纤维化ecm重塑促纤维化epf谱系的特征在于cd26表达，并且cd26的抑制可以限制损伤后的瘢痕形成(rinkevich等人, 2015, science, 348(6232))。在细胞和分子水平上，其特征在于与纤维化相关的ecm改变减少和肌成纤维细胞分化减少。然而，由于cd26抑制损害自然瘢痕形成过程，创伤需要更长的时间才能闭合和愈合。以前已经使用低效cd26抑制剂诸如抑二肽素a，一种可缓慢水解的cd26蛋白酶底物(rinkevich等人, 2015)。高效能可口服利用的小分子cd26/dpp4抑制剂作为格列汀类存在，然而格列汀类与严重的不良作用有关(attaway, mersfelder, vaishnav和baker, 2014, journal of dermatological case reports, 8(1), 24-28; fisman和tenenbaum, 2015年9月29日, cardiovascular diabetology. biomed central ltd.; nakatani等人, 2012, diabetes therapy, 3(1), 1-5)。[0079]本发明公开了适合用于美容应用的新型cd26/dpp4抑制剂。[0080]这些包括：eihqeepiggqsgsgg-kpi (seq id no: 15)g和k之间的连接号表示g的羧基官能团和赖氨酸的ε氨基官能团之间的异肽键。因此，赖氨酸具有游离的α-氨基官能团。[0081]此外，所述肽可以被酰化以增强组织递送：eihqeepiggk[酰基]sgsgg-kpi (seq id no: 16)k[酰基]表示赖氨酸的ε氨基官能团和脂肪酸的羧基官能团之间的酰胺键。酰基可指具有5-42个碳原子的任何无支链脂肪酸，例如肉豆蔻酸。[0082]此类cd26/dpp4抑制剂肽在最终化妆品中的优选浓度范围为500nm至1mm。[0083]将信号传递模块与触发因子复合物组合本发明公开的单一皮肤再生增强模块或其特定分子可被单独用于化妆品中，其目的为改善皮肤状态。因此，这些模块可以彼此独立地提供益处。尽管如此，所期望的是将这些模块组合在一个产品中，从而释放对皮肤状态的协同积极影响。[0084]在本发明中公开的分子与常规美容成分的组合可以向美容制剂中添加其它佐剂和添加剂以拓宽或增强根据本发明的分子的所述效果。此类试剂为例如：碧萝芷、辅酶q10、人参提取物、槲皮素提取物、米糠提取物、大豆提取物、藻类提取物、单宁、茶提取物(尤其是绿茶提取物)、芥提取物、来自卡宴辣椒的生物碱提取物、ω-3和ω-6脂肪酸、肽、氨基酸、维生素(尤其是维生素e醋酸酯)、鞘脂、神经酰胺、生长因子、细胞因子、matrikine、血管舒张剂。[0085]美容制剂和分子递送这项创新的制剂可以与任何美容制剂组合，例如与任何乳膏剂、洗剂、血清等组合。[0086]效力试验数据本文公开的发明可被用于化妆品中。[0087]为了评估本发明在人体皮肤方面的效力，进行了为期一个月的受控美容皮肤改善研究。在该测定中，监测了施用含有本发明成分的美容制剂后的美容面部皮肤外观。为此目的，使用了商购可得的现有技术面部皮肤成像和数据分析平台canfield bio visia™(https://www.canfieldsci.com/imaging-systems/visia-complexion-analysis/)。该平台提供了(i)高度标准化的、(ii)高度可再现的、(iii)定量的、iv)非侵入性的和(vi)受试者或试验者无偏见的皮肤质量分析的可能性。它从不同角度记录几张面部照片，并记录吸收/反射波谱。使用这些数据，该平台量化皮肤质量的几个参数，包括“斑点”、“皱纹”、“毛孔”、“光滑度”、“紫外线斑点”和“褐斑”。内置软件通过与皮肤特征基准的大型数据库进行对比来标准化每个参数，并返回百分比值以允许受试者间的对比。健康受试者以不知情的方式(即受试者不知道所接受的美容乳膏剂的身份)接受含有或不含触发因子复合物的标准美容基础制剂。美容基础制剂包含水、辛酸甘油三酯、戊二醇、丙二醇、氢化磷脂酰胆碱、神经酰胺、醋酸生育酚、抗坏血酸钠、血管舒张剂、matrikine、氨基酸、乙醇和甘油。指示受试者每天两次涂抹乳膏剂并说明涂抹量。在应用开始前和一个月后(30±3天)，评估受试者皮肤质量。作为对照，为了考虑季节性和生活方式变化相关的皮肤质量变化，还监测了手外表面的质量。在分析中包括的任何受试者中，手外表面皮肤质量在统计学上没有显著变化，因此表明在整体皮肤质量中测定时间线与任何生活方式或季节相关变化无关。本研究得出了在“数据1：短期研究”部分中描述的结果。此外，在两项为期九个月的长期研究中研究了含有触发因子复合物的化妆品对面部皮肤的长期影响，其中产品剂量和应用频率由试验受试者自由选择以反映商业现实。美容基础制剂与为期一个月的研究中使用的制剂相同。研究参与者在研究期间在任何时间点定期报告的其皮肤状态、产品效果和副作用的主观印象，以及在注意到变化时报告。特别是，参与者报告了他们对化妆品性能在研究过程中如何保持不变或发生变化的印象。这两项研究的不同之处在于所使用的确切触发因子复合物，其与研究结果一起在下面的“数据2：长期研究1”和“数据3：长期研究2”部分中进行了详细说明。实施例[0088]公开了在为期一个月的受控研究中获得的4种触发因子复合物(tfc8-a、tfc8-b、tfc8-c、tfc8-d)的美容性能信息。在这些触发因子复合物中包含的分子列于表1-4中。tfc8-a和tfc8-c仅在干细胞稳态模块的分子上有所不同。同样，tfc8-b和tfc8-d仅在干细胞稳态模块的分子上有所不同。[0089]实施例1：下述触发因子复合物1 (tfc8-a)组成为：实施例2：下述触发因子复合物2 (tfc8-b)组成为：实施例3：下述触发因子复合物3 (tfc 8c)组成为：实施例4：下述触发因子复合物4 (tfc 8d)组成为：研究结果(如图1和2所示)：短期研究(图1)将如上文详述的触发因子复合物tfc8-a、tfc8-b、tfc8-c和tfc8-d应用于为期一个月的受控化妆品施用研究。条件和实施在上文的“效力试验数据”部分中进行描述。[0090]为期一个月的受控研究结果如图1所示，所述图描绘了归一化的“visia”评分(y轴)相对于七类皮肤外观(x轴)的百分比变化，所述皮肤外观在这里为：斑点(1)、皱纹(2)、紫外线斑点(3)、褐斑(4)、毛孔(5)、红色血管形成(6)和光滑度(7)。显示了详述的所有四种触发复合物的皮肤外观(“visia”评分试验在上文的“效力试验数据”部分中进行了描述)。变化与值的归一化差异(在应用1个月后的归一化值ꢀ‑ꢀ应用开始前的归一化值)有关。条形描绘了平均归一化变化，误差条描绘了标准差。所有变化在统计上显著地(p-值《 5%)不同于0。此外，所有变化在统计上显著地(p-值《 5%)不同于在接受不含任何触发因子复合物的媒介物对照美容基础制剂的受试者中观察到的变化。所有含有触发因子复合物的美容制剂都导致皮肤外观的改善，如通过canfield bio visia装置在30±3天的试验期内所报告的皮肤参数所测量的。[0091]长期研究研究1：将如上文“实施例”部分中详述的触发因子复合物tfc8-a、tfc8-b、tfc8-c和tfc8-d也应用于为期9个月的化妆品施用研究。条件和实施在上文的“效力试验数据”部分中进行描述。所述触发因子复合物在第一项为期9个月的长期施用研究中也表现良好，其中产品剂量和应用频率由试验受试者自由选择，表明广泛的消费者产品适用性。所有四种触发因子复合物都与干细胞再生过度刺激和随后耗竭的低风险有关。总体而言，只有7.2%的试验受试者报告产品性能下降，只有1.6%的试验受试者报告在试验期间内主观感知的皮肤状态明显恶化。没有报告显著的不良作用。[0092]研究2 (图2)：为进一步研究触发因子复合物的干细胞稳态模块分子对于长期产品施用对皮肤状态的影响的作用，进行了另一项为期9个月的长期研究。条件和实施上文的“效力试验数据”部分中描进行述。为了确保可比性以及专门研究干细胞稳态模块的四种肽(seq id no: 1、seq id no: 2、seq id no: 3、seq id no: 4)，将这四种肽与如上述“实施例”部分中触发因子复合物tfc8-d所详述的其它模块的相同分子集结合进行试验。如前所述，肽衍生物seq id no: 3和seq id no: 4中的载体是分子量为35kda的聚乙二醇。此第二项长期研究揭示，干细胞稳态模块分子与研究过程中产品性能的下降存在不同相关性。与四种肽中的每一种相关的所报告的产品性能下降的频率如图2所示。误差条代表观察频率的95%置信区间。[0093]总体而言，与seq id no: 1的序列(也包含在seq id no: 3中)相比，seq id no: 2的氨基酸序列(也包含在seq id no: 4中)与研究期间产品性能的下降更强烈相关。这些差异是统计上显著的(p-值《 5%)。其次，聚乙二醇载体在两种氨基酸序列的情况下都适度降低了产品性能下降的频率。因此，seq id no: 3的频率低于seq id no: 1的频率，且seq id no: 4的频率低于seq id no: 2的频率。









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