一种益生菌和蛋白质的组合物及其抗幽门螺旋杆菌的应用的制作方法

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术1.本发明属于微生物制剂技术领域，具体涉及一种益生菌和蛋白质的组合物及其抗幽门螺旋杆菌的应用。背景技术：2.幽门螺旋杆菌属于革兰氏阴性菌，长约2.5-4.0μm，宽约0.5-1.0μm，菌体呈螺旋形、s形或海鸥状，耐酸、嗜二氧化碳。warren和marshall在1983年首次从慢性胃炎患者的胃组织中发现并分离出幽门螺旋杆菌。现有研究表明，胃黏膜上幽门螺旋杆菌的定植刺激强烈的局部和全身炎症和免疫应答，其与由细菌产生的有毒物质一起引起10％至20％感染个体的消化性溃疡和1％至3％感染个体的胃癌(suerbaum s,michetti p)。3.幽门螺旋杆菌可传染，一般经消化道进行传播，主要包括粪-口途径和口-口途径，其中，粪-口途径指感染者含菌的粪便直接或间接污染了饮食，饮食者被感染，口-口途径指感染者含菌的唾液污染了食物或餐具，食用食物或使用餐具后被感染。此外，还有一类特殊的途径，即医源性感染，主要是感染者进行消化内镜检查后，未彻底灭菌，从而导致他人检查时被传染幽门螺杆菌。4.现如今，针对幽门螺旋杆菌的常用疗法是“三联疗法”，进一步发展为“四联疗法”。两种抗生素搭配使用并且结合一种质子泵抑制剂或枸橼酸铋两者取其一，是现在医学上“三联”疗法的主流配方(连续服用一周半至两周)。而“四联疗法”则是在两种抗菌药和质子泵的基础上再加一剂枸橼酸铋连续服用10-14天。在体外实验中，许多抗生素对幽门螺旋杆菌都有一定的抑制作用，但只有少数抗生素可用于体内治疗。而幽门螺旋杆菌常用疗法的不彻底性以及反复复发，加上有限的抗生素选择，导致了幽门螺旋杆菌菌株易产生突变以及耐药性，治疗不良的情况下还会导致超级细菌的出现。这在很大程度上削弱了相关疗法抑制幽门螺旋杆菌的有效性与持续性，耽误相关疾病的治疗(gerrits et al.2006)。实际上，在临床治疗疾病时，过量使用抗生素不但不会对人体有益，还会对人体造成一系列的潜在危害，滥用抗生素会影响人体内部正常菌群分布及数量，可能抑制益生菌生长，更有甚者会引发一系列由微生物群紊乱而引发的内源性疾病，例如艰难梭菌感染或代谢性疾病(ianiro et al.2016)。相比于抗生素，益生菌在幽门螺旋杆菌治疗中具有明显优势，例如，益生菌具有加强胃黏膜生物屏障、释放细胞毒素及产生短链脂肪酸来抵御幽门螺旋杆菌感染、竞争抑制幽门螺旋杆菌定植、平衡多种细胞因子水平等功能。专利cn201910101339.3公开了一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物，所述组合物包括植物乳杆菌(cctccno：m2018268)菌粉体以及所述植物乳杆菌代谢物粉体为活性成分，将所述植物乳杆菌通过扩大菌种培养、一级种子培养、种子罐培养以及发酵培养获得植物乳杆菌发酵菌液，可有效抑制幽门螺旋杆菌，直至清除人体内幽门螺杆菌，减少胃癌的发生，而且对人体无伤害。专利cn202010574273.2则提供了一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物及其应用，所述复合益生菌组合物包含罗伊氏乳杆菌活菌数1-2×1010cfu/g、约氏乳杆菌活菌数3-4×1010cfu/g，其他组分按重量份计为：低聚果糖80-160份、抗性糊精400-600份、低聚半乳糖200-400份、甘草提取物8-12份、草莓提取物4-6份、麦芽糊精余量、组合物总量为2000份，其抑制幽门螺旋杆菌能力强，各添加的组分有助于益生菌的定植和提高其活力，能显著改善胃部环境，因此能有效根除幽门螺旋杆菌，在治疗幽门螺旋杆菌所致疾病方面具有较大的应用潜力。5.因此，亟需提供一种抗幽门螺旋杆菌效果更好的益生菌产品。技术实现要素：6.针对以上问题，本发明提供了一种益生菌和蛋白质的组合物及其抗幽门螺旋杆菌的应用。本发明所述的组合物包括动物双歧杆菌bb-12、嗜酸乳杆菌ncfm、蛋黄球蛋白粉及白藜芦醇，所述的组合物具有较好的抑制幽门螺旋杆菌的能力，能够显著地清除人体内的幽门螺旋杆菌，减少胃癌的发生。7.为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：8.一方面，本发明提供了一种组合物，所述的组合物包括：动物双歧杆菌bb-12、嗜酸乳杆菌ncfm和蛋黄球蛋白粉。9.具体地，所述的组合物还包括白藜芦醇。10.具体地，所述的动物双歧杆菌bb-12的活菌数为106-1010cfu/ml。11.具体地，所述的嗜酸乳杆菌ncfm的活菌数为105-109cfu/ml。12.具体地，所述的蛋黄球蛋白粉的浓度为0.1-10mg/l，优选为1mg/l。13.具体地，所述的白藜芦醇的浓度为5-20mg/l，优选为10-15mg/l。14.又一方面，本发明提供了上述组合物在制备抗幽门螺旋杆菌产品中的应用。15.进一步具体地，所述的产品为保健品、食品或药物。16.进一步具体地，所述保健品的类型包括但不限于：药酒、胶囊、片剂、冲剂、茶制品、果汁、水果醋、口服液、软胶囊、颗粒、发酵奶制品、发酵谷制品、发酵豆制品、蜜膏、露剂、散剂、鲜汁、代餐粉等。17.所述保健品还包括保健品添加剂。18.所述保健品添加剂包括但不限于：香精香料、着色剂、甜味剂、酸味剂、增鲜剂、乳化剂、增稠剂、防腐剂、抗氧剂、营养强化剂等。19.进一步具体地，所述的食品的类型包括但不限于：饼干、乳制品、代餐品、肉制品、酱汁、烘焙食品、酸奶、冰淇淋、发酵谷类基产品、果汁、米酒、糖果、糖浆、罐头食品、腌制品、调味品、豆制品、巧克力、馅料、茶制品、膨化食品等。20.所述的食品还包括食品添加剂。21.所述的食品添加剂包括但不限于防腐剂、酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、胶基糖果中基础剂物质、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定剂和凝固剂、甜味剂、增稠剂、食品用天然香料、食品用合成香料等。22.进一步具体地，所述的药物的剂型根据给药方式包括但不限于：经胃肠道给药剂型或非经胃肠道给药剂型。23.所述的经胃肠道给药剂型包括但不限于散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、油剂。24.所述的非经胃肠道给药剂型包括但不限于：注射给药剂型、呼吸道给药剂型、皮肤给药剂型、粘膜给药剂型、腔道给药剂型。25.所述的注射给药剂型包括但不限于：静脉注射剂、肌内注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂、腔内注射剂。26.所述的呼吸道给药剂型包括但不限于喷雾剂、气雾剂、粉雾剂。27.所述的皮肤给药剂型包括但不限于外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂。28.所述的粘膜给药剂型包括但不限于滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片及贴膜剂。29.所述的腔道给药剂型包括但不限于栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂及滴丸剂。30.所述的药物还包括药学上可接受的辅料。31.所述的药学上可接受的辅料包括但不限于溶剂、乳化剂、崩解剂、增溶剂、抗氧剂、ph调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂、稀释剂、润湿剂、粘合剂、成膜剂等。32.又一方面，本发明提供了一种抗幽门螺旋杆菌产品，所述的产品包括上述组合物。33.具体地，所述的产品为保健品、食品或药物。34.进一步具体地，所述保健品的类型包括但不限于：药酒、胶囊、片剂、冲剂、茶制品、果汁、水果醋、口服液、软胶囊、颗粒、发酵奶制品、发酵谷制品、发酵豆制品、蜜膏、露剂、散剂、鲜汁、代餐粉等。35.所述保健品还包括保健品添加剂。36.所述保健品添加剂包括但不限于：香精香料、着色剂、甜味剂、酸味剂、增鲜剂、乳化剂、增稠剂、防腐剂、抗氧剂、营养强化剂等。37.进一步具体地，所述的食品的类型包括但不限于：饼干、乳制品、代餐品、肉制品、酱汁、烘焙食品、酸奶、冰淇淋、发酵谷类基产品、果汁、米酒、糖果、糖浆、罐头食品、腌制品、调味品、豆制品、巧克力、馅料、茶制品、膨化食品等。38.所述的食品还包括食品添加剂。39.所述的食品添加剂包括但不限于防腐剂、酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、胶基糖果中基础剂物质、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定剂和凝固剂、甜味剂、增稠剂、食品用天然香料、食品用合成香料等。40.进一步具体地，所述的药物的剂型根据给药方式包括但不限于：经胃肠道给药剂型或非经胃肠道给药剂型。41.所述的经胃肠道给药剂型包括但不限于散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、油剂。42.所述的非经胃肠道给药剂型包括但不限于：注射给药剂型、呼吸道给药剂型、皮肤给药剂型、粘膜给药剂型、腔道给药剂型。43.所述的注射给药剂型包括但不限于：静脉注射剂、肌内注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂、腔内注射剂。44.所述的呼吸道给药剂型包括但不限于喷雾剂、气雾剂、粉雾剂。45.所述的皮肤给药剂型包括但不限于外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂。46.所述的粘膜给药剂型包括但不限于滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片及贴膜剂。47.所述的腔道给药剂型包括但不限于栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂及滴丸剂。48.所述的药物还包括药学上可接受的辅料。49.所述的药学上可接受的辅料包括但不限于溶剂、乳化剂、崩解剂、增溶剂、抗氧剂、ph调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂、稀释剂、润湿剂、粘合剂、成膜剂等。50.本发明中所述的药物、食品、保健品的制备方法可采用本领域目前现有的以及未来研发出的相关制备方法。应当明确的是采用何种具体制备方法并不能作为对本技术保护范围的限定。无论采用目前已有的还是未来研发的制备方法，只要包含上述微生物和白藜芦醇，均在本技术要求保护的范围内。51.与现有技术相比，本发明的积极和有益效果在于：52.本发明所述的组合物包括动物双歧杆菌bb-12、嗜酸乳杆菌ncfm、蛋黄球蛋白粉及白藜芦醇，所述的组合物具有较好的抑制幽门螺旋杆菌的能力，能够显著地清除人体内的幽门螺旋杆菌，减少胃癌的发生。具体实施方式53.下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。54.实验材料55.1.动物双歧杆菌bb-12，购自科汉森公司。56.2.嗜酸乳杆菌ncfm，购自丹尼斯克公司。57.3.蛋黄球蛋白粉：取蛋黄加入去离子水得到蛋黄稀释液，将蛋黄稀释液静置1-2h取上清液；向上清液中加入絮凝剂搅拌均匀；分离得到沉淀物和透过液，取透过液进行超滤，得到粗igy溶液，进行微孔过滤，得到浓缩igy溶液，冷冻干燥后制备得蛋黄球蛋白粉。58.3.白藜芦醇：购自南京合谷生命生物科技有限公司。59.4.胃幽门螺旋杆菌(atcc43504)：购自北京百欧博伟生物技术有限公司。60.5.balb/c小鼠：spf级，雄性，6-8周龄，购自凯学生物科技(上海)有限公司。61.6.胰酪大豆胨液体培养基(tsb)：购自海博生物。62.实施例1.一种抗幽门螺旋杆菌组合物63.动物双歧杆菌bb-12活菌数为108cfu/ml，嗜酸乳杆菌ncfm活菌数为107cfu/ml，蛋黄球蛋白粉浓度为1mg/l，白藜芦醇的浓度为12mg/l。64.实施例2.一种抗幽门螺旋杆菌组合物65.动物双歧杆菌bb-12活菌数为108cfu/ml，嗜酸乳杆菌ncfm活菌数为107cfu/ml，蛋黄球蛋白粉浓度为1mg/l。66.实施例3.一种抗幽门螺旋杆菌组合物67.动物双歧杆菌bb-12活菌数为1012cfu/ml，嗜酸乳杆菌ncfm活菌数为1010cfu/ml，蛋黄球蛋白粉浓度为1mg/l，白藜芦醇的浓度为30mg/l。68.对比例1.一种抗幽门螺旋杆菌产品69.白藜芦醇的浓度为12mg/l。70.实验例1.幽门螺旋杆菌抑菌检测71.(1)菌液准备：将幽门螺旋杆菌培养至对数期，取5ml菌液，5000g离心5min，用tsb培养基重悬菌体，并调整菌液浓度为1×106cfu/ml。72.(2)取96孔板，每孔加入100μl上述步骤(1)的菌液，95μl tsb培养基，并分别加入5μl上述实施例1-3、对比例1的组合物，空白对照则为加入5μldmso溶液，每个处理分别设置3个重复。将96孔板置于37℃，150rpm震荡培养48h。73.(3)以od600的值反映菌液浓度，抑菌率(％)按照如下公式计算：74.(od600对照菌液-od600处理菌液)/od600对照菌液×100％。75.检测结果如下表1所示。76.表177.组别抑菌率(％)实施例172.5实施例257.9实施例373.3对比例15.278.由上表可知，采用本技术所述的组合物，能够更好地发挥抗幽门螺旋杆菌效力。79.实验例2.80.(1)模型制备81.选取42只小鼠，给予灌胃混合抗生物溶液(氨苄青霉素10mg/ml、庆大霉素1.2mg/ml、阿奇霉素10mg/ml)，0.3ml/只，1次/d，共3d。灌胃混合抗生素7d后，对小鼠灌胃0.3ml新鲜培养的幽门螺旋杆菌(1×109cfu/ml)，隔日1次，共5次。小鼠灌胃前禁食24h，灌胃后禁食2h。于末次灌胃2周时，随机选取2只小鼠，处死，取胃窦部组织，加入rut试剂，常温下静置，12h内试剂转为红色即为阳性，反之则为阴性。同时取胃窦-胃体组织，用4％多聚甲醛固定，包埋，切片，进行he染色，判断感染是否为阳性。rut和he染色结果均显示阳性，表明造模成功。82.(2)分组及给药83.将造模成功的小鼠随机分为4个组别，分别为模型组、实施例1组、实施例2组，对比例1组，每组10只。未造模小鼠为空白对照组(10只)。各组给药方式如下：84.空白对照组：不采取干预措施。85.模型组：灌胃生理盐水，100mg/(kg·d)，连续4周。86.实施例1组：灌胃实施例1所述组合物，100mg/(kg·d)，连续4周。87.实施例2组：灌胃实施例2所述组合物，100mg/(kg·d)，连续4周。88.对比例1组：灌胃对比例1所述组合物，100mg/(kg·d)，连续4周。89.(3)幽门螺旋杆菌治疗结果90.按照上述给药4周后，处死小鼠，取胃窦部组织，加入rut试剂染色，常温下静置，12h内试剂转为红色即为阳性，反之则为阴性，阴性即为油门螺旋菌彻底根除。检测结果如下表2所示。91.表292.组别总数(只)阴性动物数(只)根除率(％)空白对照组1010-模型组100-实施例11010100实施例210880对比例1100093.由上表2内容可知，本技术所述的组合物在体内对于幽门螺旋杆菌也具有显著的抑制作用，可有效清除幽门螺旋杆菌，减少胃癌的发生。94.实验例3.人体实验95.为验证本技术所述的组合物对幽门螺旋杆菌感染患者确实有效，将实施例1所述的组合物添加草莓粉1mg/ml、岩藻多糖0.03mg/ml，糊精5mg/ml，甘露醇0.2mg/ml，淀粉0.2mg/ml，硬脂酸镁0.5mg/ml，制备成片剂后，按照2g/人/天，通过口服方式给药。实验均征得患者本人知情及同意。96.选取60例经医院尿素[14c]呼气试验检测，确诊为幽门螺旋杆菌阳性的患者。年龄在30-70之间，男女比例为34:26。将上述患者随机分成两组，其中一组为实验组，口服本技术所述的组合物片剂；另一组为安慰剂组，口服不含本技术实施例1所述的组合物，但其他成分与本技术所述片剂相同的药物。口服10-15d后，分别进行尿素[14c]呼气试验检测。[0097]实验组经口服本技术所述的组合物后，经尿素[14c]呼气试验检测均显示为阴性，而安慰组仍为阳性。表明本技术所述的组合物可用于治疗幽门螺旋杆菌感染。[0098]以下为一病例具体情况：患者：寇xx，男，40岁，于郑州市金水区豫慈门诊部经尿素[14c]呼气试验检测c＝80，诊断为阳性hp(+)，服用上述片剂10d后，经尿素[14c]呼气试验检测c＝38，诊断为阳性hp(-)。[0099]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。









图片声明：本站部分配图来自人工智能系统AI生成,觅知网授权图片,PxHere摄影无版权图库。本站只作为美观性配图使用,无任何非法侵犯第三方意图,一切解释权归图片著作权方,本站不承担任何责任。如有恶意碰瓷者,必当奉陪到底严惩不贷!




内容声明：本文中引用的各种信息及资料（包括但不限于文字、数据、图表及超链接等）均来源于该信息及资料的相关主体（包括但不限于公司、媒体、协会等机构）的官方网站或公开发表的信息。部分内容参考包括:(百度百科,百度知道,头条百科,中国民法典,刑法,牛津词典,新华词典,汉语词典,国家院校,科普平台)等数据,内容仅供参考使用,不准确地方联系删除处理！本站为非盈利性质站点,发布内容不收取任何费用也不接任何广告!




免责声明：我们致力于保护作者版权，注重分享，被刊用文章因无法核实真实出处，未能及时与作者取得联系，或有版权异议的，请联系管理员，我们会立即处理，本文部分文字与图片资源来自于网络，部分文章是来自自研大数据AI进行生成,内容摘自(百度百科,百度知道,头条百科,中国民法典,刑法,牛津词典,新华词典,汉语词典,国家院校,科普平台)等数据,内容仅供学习参考,不准确地方联系删除处理!的,若有来源标注错误或侵犯了您的合法权益，请立即通知我们，情况属实，我们会第一时间予以删除，并同时向您表示歉意,谢谢!