噻吩并吡啶酮衍生物在治疗肾上腺脑白质营养不良或肾上腺脊髓神经病中的用途的制作方法

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术1.本发明涉及噻吩并吡啶酮衍生物在治疗选自肾上腺脑白质营养不良(ald)和肾上腺脊髓神经病(amn)的遗传性神经变性疾病中的用途。背景技术：2.肾上腺脑白质营养不良和肾上腺脊髓神经病是神经变性遗传疾病。x连锁肾上腺脑白质营养不良(ald)是一种与x染色体关联的遗传疾病。在受影响的男性中观察到三种主要表型。儿童脑型通常在4和8岁之间出现。它最初类似于注意力缺陷障碍或多动症。在最初的症状之后出现进行性中枢脱髓鞘，伴随着认知、行为、视力、听力和运动机能受损，经常在2年内导致完全残疾。3.第二种表型，肾上腺脊髓神经病(amn)，是ald的成人型，在近二十年最常见表现为进行性下肢轻瘫、括约肌障碍、性功能障碍，并且经常表现为肾上腺皮质功能受损。此外，amn患者普遍存在脊髓功能障碍，这导致包括行走困难或行走方式改变在内的最初症状。所有症状都是在数十年中渐进性的。具体地，amn可以分为两种一般临床形式：脊髓和脑均受影响的脑受累型amn和仅脊髓受影响的脑不受累型amn。第三种表型是阿狄森氏病(addison’s disease)，在2岁和成年期之间、最常见在七岁半时出现原发性肾上腺皮质功能不全，没有神经系统异常的迹象。4.x连锁肾上腺脑白质营养不良(ald)是由abcd1基因中的突变引起的。abcd1基因提供了产生肾上腺脑白质营养不良蛋白(aldp)的指令。aldp位于被称为过氧化物酶体的细胞结构的膜中。过氧化物酶体是细胞内处理多种类型的分子的小囊。aldp将一群被称为极长链脂肪酸(vlcfa)的脂肪带入过氧化物酶体，将它们在其中分解。导致肾上腺脑白质营养不良的突变阻止了大约75％患有这种病症的人产生任何aldp。由于功能性aldp很少或没有，vlcfa不会被分解，它们在体内积聚。这引起极长链脂肪酸(vlcfa)水平升高和过氧化物酶体中vlcfa氧化减少。含有vlcfa的脂质在所有组织中积聚；然而，脑、脊髓、肾上腺皮质和睾丸间质细胞的vlcfa增加最多。这些脂肪的积聚可能对肾上腺和对包围体内许多神经的脂肪隔离层(髓磷脂)有毒性。在儿童脑型ald中，不仅细胞会经历脱髓鞘，而且还会有炎症反应，所有这些都破坏脑。该炎症过程破坏髓磷脂，无情地导致进行性恶化至植物人状态或死亡，通常在五年内。5.肾上腺脊髓神经病(amn)是肾上腺脑白质营养不良(ald)的成人发病。与ald一样，amn的特征是abcd1基因突变，导致过氧化物酶体功能受损与vlcfa积累和脱髓鞘。与快速进展的儿童早期致死性疾病ald不同，amn是一种缓慢进展的成年期疾病，导致肾上腺、脊髓(脊髓病)和周围神经(神经病)功能障碍。6.x-ald没有有效的治疗；如果在神经系统症状首次出现时进行造血干细胞骨髓移植(hsct)，可减缓某些患者的ald进展。然而，hsct也与显著的致病率和致死率相关。7.目前治疗这些疾病的方式基本上是针对减轻患者的症状。例如，amn患者可能的症状之一是肾上腺功能不全，因此重点将放在用类固醇替代疗法治疗这种肾上腺功能不全上。8.最近，一些作者报道了ald患者中ampkα1的丢失，并提出二甲双胍可以通过激活ampk而对治疗这些患者有用(j.singh等，journal of neurochemistry，138，86-100，2016)。然而，已知二甲双胍作为副作用会引起乳酸性酸中毒。另外，在培养的成纤维细胞中以至少100μm的剂量以及在abcd2 ko小鼠中当以100mg/kg口服施用时才能观察到其功效。9.因此，仍然需要将会以较低的剂量和/或减少的副作用对治疗ald和amn有用的替代化合物。10.发明人已经表明特定的噻吩并吡啶酮衍生物可以满足这种需要。这些化合物在wo 2014/001554中被宽泛地公开为ampk激活剂，但迄今尚未有建议将它们用于治疗ald和amn。它们已被证明是各种包含β1亚基的ampk同种型的直接激活剂，这使得它们在治疗这些病症中的功效越发令人惊讶，因为已知直接ampk激活剂提供的代谢效应不同于用间接ampk激活剂例如二甲双胍得到的效应。11.更具体地，本发明人发现这些噻吩并吡啶酮衍生物可以恢复健康表型或改善这些疾病的表型。12.这些噻吩并吡啶酮衍生物发挥作用减少极长链脂肪酸(vlcfa)的积聚。还发现当在式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物存在下培养细胞时，诱导了与aldp相关(序列与aldp非常接近)的替代蛋白(abcd2)的表达。由于aldp在ald和amn中缺失，相关蛋白的诱导似乎是式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物可以改善该模型系统中疾病表型的潜在机制。因此，这些噻吩并吡啶酮衍生物通过这种蛋白质的过表达，允许减少脂肪酸积聚。技术实现要素：13.本发明涉及用噻吩并吡啶酮衍生物治疗肾上腺脑白质营养不良和/或肾上腺脊髓神经病。14.更具体地，本发明涉及一种式(i)所示的噻吩并吡啶酮衍生物：[0015][0016]其中：[0017]r1表示氢原子或卤素原子，[0018]r2表示茚满基或四氢化萘基基团，所述基团被一个或多个(例如2、3、4、5、6或7个)选自卤素原子、烷基基团、羟基、烷氧基基团、氨基、单或二烷基氨基基团、羧基基团、烷氧基羰基基团、单或二烷基氨基羰基基团、甲酰胺、氰基、烷基磺酰基和三氟甲基基团中的基团取代或不被取代，[0019]r3表示芳基基团，所述基团被一个或多个(例如2、3、4或5个)选自卤素原子、烷基基团、羟基、烷氧基基团、芳烷氧基基团、氨基、单或二烷基氨基基团、羧基基团、烷氧基羰基基团、单或二烷基氨基羰基基团、甲酰胺、氰基、烷基磺酰基和三氟甲基基团中的原子或基团取代或不被取代，[0020]或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物，[0021]或包含它们的药物组合物，[0022]在治疗ald和amn中的用途。[0023]本发明还涉及一种治疗ald和/或amn的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用有效量的如上所述的噻吩并吡啶酮衍生物、或向有此需要的对象施用包含有效量的如上所述的噻吩并吡啶酮衍生物和药学上可接受的支撑体的药物组合物。[0024]本发明还涉及如上所述的噻吩并吡啶酮衍生物或包含它的药物组合物在制造用于治疗ald和/或amn的药物中的用途。附图说明[0025]图1显示了amn患者来源的成纤维细胞(图1.a)和淋巴细胞(图1.b)在用或未用pxl770处理时的二十六烷酸水平。[0026]研究了六种情况：健康对照/未经处理的amn/amn+pxl770(5μm)/amn+pxl770(10μm)/amn+pxl770(25μm)/amn+pxl770(50μm)。[0027]图2显示了amn成纤维细胞在存在或不存在pxl770的情况下培养时的abcd2表达水平。[0028]图3显示了amn小鼠混合神经胶质细胞在用或未用pxl770处理时的二十六烷酸水平。[0029]研究了三种情况：野生型/ald-ko/ald-ko+pxl770(25μm)。[0030]图4显示了ald-ko小鼠脑皮层混合神经胶质细胞在存在或不存在pxl770的情况下培养时的abcd2表达水平。[0031]图5显示了ald患者来源的成纤维细胞(图5.a)和淋巴细胞(图5.b)在用或不用pxl770处理时的二十六烷酸水平。[0032]研究了六种情况：健康对照/未经处理的amn/amn+pxl770(5μm)/amn+pxl770(10μm)/amn+pxl770(25μm)/amn+pxl770(50μm)。[0033]图6显示了ald成纤维细胞在存在或不存在pxl770的情况下培养时的abcd2表达水平。[0034]图7显示了与未处理的x-ald小鼠和野生型小鼠相比，用pxl770处理的x-ald小鼠的脑皮质中的二十六烷酸水平。[0035]图8显示了与未处理的x-ald小鼠和野生型小鼠相比，用pxl770处理的x-ald小鼠的血浆中的二十六烷酸水平。[0036]图9显示了amn患者来源的成纤维细胞和淋巴细胞在用或不用二甲双胍处理时的二十六烷酸水平。[0037]图10显示了pxl770和二甲双胍之间对amn患者来源的成纤维细胞中二十六烷酸水平的头对头比较(head-to-head comparison)。[0038]图11显示了amn和ald成纤维细胞在存在或不存在二甲双胍的情况下培养时的abcd2表达水平。[0039]图12显示了ald-ko小鼠脑皮质混合神经胶质细胞在存在或不存在二甲双胍的情况下培养时的abcd2表达水平。[0040]图13显示了与未处理的x-ald小鼠和野生型小鼠相比，用pxl770处理的x-ald小鼠的脊髓中的二十六烷酸水平。[0041]图14显示了amn患者来源的成纤维细胞在用各种剂量的本发明化合物处理时的二十六烷酸水平。[0042]图15显示了amn患者来源的成纤维细胞在用各种剂量的本发明化合物处理时的二十六烷酸水平与用二甲双胍处理时的比较。具体实施方式[0043]定义[0044]如本文所用的以下术语，除非另有明确说明，否则具有以下含义。[0045]术语“卤素原子”是指选自氟、氯、溴和碘原子的原子。[0046]术语“烷基基团”是指1至5个碳原子的直链或支链饱和链，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。优选地，烷基基团是1至3个碳原子的直链或支链饱和链，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基基团。[0047]术语“芳基基团”是指c6-c18芳族基团，例如苯基或萘基基团，所述基团任选被一个或多个选自卤素原子、烷基基团、羟基(oh)、烷氧基基团、氨基(nh2)、单或二烷基氨基基团、羧基(cooh)、烷氧基羰基基团、单或二烷基氨基羰基基团、甲酰胺(conh2)、氰基(cn)、烷基磺酰基基团和三氟甲基(cf3)中的原子或基团取代。更具体地，所述芳基基团可以被氟、氯、溴原子、羟基、甲氧基、乙氧基、氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、羧基、甲氧羰基、乙氧羰基、甲酰胺、二甲基氨基羰基、甲基氨基羰基、氰基、甲磺酰基或三氟甲基基团取代或不被取代。[0048]术语“芳烷基基团”是指如上定义的烷基基团，其氢原子被如上定义的芳基基团代替。芳烷基的实例是苄基基团。[0049]术语“烷氧基”基团是指通过氧原子与分子的其余部分连接的如上定义的烷基基团。在烷氧基基团之中可以提及的是甲氧基和乙氧基基团。[0050]术语“芳烷氧基”基团是指通过氧原子与分子的其余部分连接的如上定义的芳烷基基团。在芳烷氧基基团之中可以提及的是苄氧基基团。[0051]术语“烷基氨基基团”是指通过氮原子与分子的其余部分连接的如上定义的烷基基团。在烷基氨基之中，可以提及的是二甲基氨基和二乙基氨基基团。[0052]术语“烷氧基羰基基团”是指通过羰基基团与分子的其余部分连接的如上定义的烷氧基基团。[0053]术语“烷基氨基羰基基团”是指通过羰基基团与分子的其余部分连接的如上定义的烷基氨基基团。[0054]术语“烷基磺酰基”是指通过so2基团与分子的其余部分连接的如上定义的烷基。在烷基磺酰基基团之中，可以提及的是甲基磺酰基和乙基磺酰基基团。[0055]化合物的“溶剂合物”在本发明中是指惰性溶剂分子在化合物上由于它们相互的吸引力而形成的加合物。例如，溶剂合物是水合物或醇合物。[0056]本发明涉及式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物或其药学上可接受的盐和/或溶剂合物的具体用途：[0057][0058]其中：[0059]r1表示氢原子或卤素原子，[0060]r2表示茚满基或四氢化萘基基团，所述基团被一个或多个(例如2、3、4、5、6或7个)选自卤素原子、烷基基团、羟基、烷氧基基团、氨基、单或二烷基氨基基团、羧基基团、烷氧基羰基基团、单或二烷基氨基羰基基团、甲酰胺、氰基、烷基磺酰基和三氟甲基基团中的基团取代或不被取代，[0061]r3表示芳基基团，所述基团被一个或多个(例如2、3、4或5个)选自卤素原子、烷基基团、羟基、烷氧基基团、芳烷氧基基团、氨基、单或二烷基氨基基团、羧基基团、烷氧基羰基基团、单或二烷基氨基羰基基团、甲酰胺、氰基、烷基磺酰基和三氟甲基基团中的原子或基团取代或不被取代。[0062]在一个特定的实施方式中，以下条件满足至少一个，优选满足全部：[0063]·r1表示卤素原子，特别是氯原子，[0064]·r2未被取代或被1或2个包含至少一个羟基基团的取代基取代，[0065]·r2是四氢化萘基基团，[0066]·r3表示未被取代或被1或2个取代基取代的苯基基团，[0067]·所述式(i)的化合物是盐的形式，优选是钠盐或钾盐、更优选钾盐，[0068]·所述式(i)的化合物是溶剂合物的形式，优选是水合物、更优选一水合物。[0069]更优选地，以下条件满足至少一个，优选满足全部：[0070]·r1表示卤素原子，特别是氯原子，[0071]·r2被1或2个包含至少一个羟基基团的取代基取代，[0072]·r2是四氢化萘基基团，[0073]·r3表示未被取代的苯基基团，[0074]·所述式(i)的化合物是盐的形式，优选是钠盐或钾盐、更优选钾盐，[0075]·所述式(i)的化合物是溶剂合物的形式，优选是水合物、更优选一水合物。[0076]在另一个实施方式中，以下条件满足至少一个，优选满足全部：[0077]·r1表示卤素原子，特别是氯原子，[0078]·r2被1或2个包含至少一个羟基基团的取代基取代，[0079]·r2是茚满基基团，[0080]·r3表示未被取代或被1或2个取代基取代的苯基基团。[0081]式(1)的化合物的实例如下：[0082]2-氯-4-羟基-3-茚满-5-基-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0083]2-氯-5-(4-氟苯基)-4-羟基-3-茚满-5-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0084]2-氯-4-羟基-3-茚满-5-基-5-(3-甲氧基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0085]2-氯-4-羟基-3-茚满-5-基-5-(4-甲氧基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0086]3-(2-氯-4-羟基-3-茚满-5-基-6-氧代-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲腈[0087]2-氯-4-羟基-3-茚满-5-基-5-(3-甲基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0088]2-氯-5-(4-氟苯基)-4-羟基-3-(4-羟基茚满-5-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0089]2-氯-5-(3-氟苯基)-4-羟基-3-(4-羟基茚满-5-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0090]2-氯-4-羟基-3-(4-羟基茚满-5-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0091]2-氯-5-(2-氟苯基)-4-羟基-3-(4-羟基茚满-5-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0092]2-氯-4-羟基-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0093]3-(2-氯-4-羟基-6-氧代-3-四氢化萘-6-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲腈[0094]2-氯-3-(5-氧四氢化萘-6-基)-5-苯基-噻吩并[2,3-b]-4,6-二羟基吡啶三钠[0095]2-氯-4-羟基-5-苯基-3-四氢化萘-6-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0096]2-氯-5-(4-氟苯基)-4-羟基-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0097]2-氯-3-(5-氧四氢化萘-6-基)-6-氧代-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]-4-羟基吡啶二钠[0098]2-氯-4-羟基-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-5-(3-甲基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0099]2-氯-4-羟基-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-5-(4-甲基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0100]2-氯-5-(3-氟苯基)-4-羟基-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮[0101]2-氯-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-6-氧代-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]-4-羟基吡啶钠[0102]2-氯-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-6-氧代-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]-4-羟基吡啶钾。[0103]所述式(i)的化合物通常可以如wo 2014/001554中所公开的那样制备。[0104]这样的化合物的实例包括：[0105]pxl770，其是2-氯-4-羟基-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮的一水合钾盐，对应于下面式(ia)的结构：[0106][0107]2-氯-5-(4-氟苯基)-4-羟基-3-茚满-5-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮，具有式(ib)：[0108][0109]2-氯-4-羟基-3-茚满-5-基-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮，具有式(ic)：[0110][0111]pxl770可根据包括以下步骤的方法制备：[0112](a)使式(ii)的化合物与碳酸钾在包含水和选自乙酸正丁酯和异丙醇的溶剂的溶液中反应：[0113][0114](b)形成沉淀；和[0115](c)回收步骤(b)中获得的沉淀，优选通过过滤回收。[0116]所述式(ii)的化合物及其制备方法已在专利申请wo 2014/001554中公开。[0117]或者，所述式(ii)的化合物可通过包括以下步骤的改进的方法获得：[0118](a)在碱存在下，使6-乙酰基-5-羟基四氢化萘与亲电子苄基源、优选苄基溴反应；[0119](b)在六甲基二硅氮烷和乙酸存在下，使步骤(a)中获得的化合物与氰基乙酸乙酯反应；[0120](c)在碱存在下，使步骤(b)中获得的化合物与硫反应；[0121](d)任选形成步骤(c)中获得的化合物的盐，优选盐酸盐；[0122](e)使步骤(c)或(d)中获得的化合物与亲电子氯源、优选n-氯代琥珀酰亚胺反应；[0123](f)使步骤(e)中获得的化合物与苯乙酰氯反应；[0124](g)使步骤(f)中获得的化合物与碱反应；[0125](h)使步骤(g)中获得的化合物与三溴化硼或三氯化硼、优选三氯化硼反应；和[0126](i)任选回收步骤(h)中获得的化合物。[0127]通常，步骤(b)可以包括加热步骤(a)中获得的混合物、优选在接近所述混合物回流的温度下加热的子步骤(b1)，随后是冷却所得混合物、例如在-15℃和35℃之间的温度下冷却的子步骤(b2)。表述“接近所述混合物回流”通常是指在步骤(a)中的溶剂体系(例如，水/异丙醇或水/乙酸正丁酯)沸点的90％至100％之间的温度。[0128]在所述加热子步骤和子步骤(b2)之间可以进行蒸馏步骤，优选在减压下进行。[0129]步骤(b)允许形成晶形沉淀，通过向步骤(b2)添加晶种可有利于或触发该形成。[0130]在一个优选的实施方式中，在步骤(c)中通过过滤回收所述沉淀。然后可相继用一种或多种溶剂，优选水、乙酸正丁酯和/或叔丁基甲基醚，对其进行洗涤。[0131]由此获得固体形式、例如粉末形式的式(ia)的化合物，即pxl770，通过衍射仪使用cu k(α)辐射测量，其具有以下xrpd(x射线粉末衍射)峰：[0132][0133][0134]本发明的一个目的是一种治疗选自肾上腺脑白质营养不良和肾上腺脊髓神经病的疾病的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用有效量的式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物或包含有效量的式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物以及药学上可接受的支撑体的药物组合物。[0135]本发明还涉及式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物或包含它的组合物在制造用于治疗肾上腺脑白质营养不良和/或肾上腺脊髓神经病的药物中的用途。[0136]所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物似乎通过减少vlcfa的积聚来治疗ald和/或amn。事实上，文献已经表明，vlcfa负荷随着疾病的严重程度而增加，而降低vlcfa可以消除炎症反应。因此，降低vlcfa超负荷，尤其是在中枢神经系统中，有可能停止或逆转ald和/或amn的疾病进展。[0137]本发明人发现，所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物大幅降低ald和amn患者来源的成纤维细胞和淋巴细胞以及小鼠混合神经胶质细胞中的vlcfa水平。所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物通过诱导与aldp具有显著序列相似性的abcd2、又称aldrp的过表达而作用于aldp(abcd1)功能的恢复。发明人发现，所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物诱导abcd2的过表达，这补偿了abcd1的缺乏，从而允许减少vlcfa积聚。[0138]根据本发明使用的药物组合物可通过任何常规方法制备。所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物可以在此与至少一种固体、液体和/或半液体赋形剂或佐剂一起、并且如果需要的话与一种或多种其它活性成分组合，转化为合适的剂型。[0139]术语“药学上可接受的支撑体”是指从药理学/毒理学角度为对象可接受、以及从物理/化学角度关于组成、配制、稳定性、对象接受度和生物利用度方面为制药化学家可接受的载体、佐剂或赋形剂。[0140]术语“载体”、“佐剂”或“赋形剂”是指添加到药物组合物中用作载体、佐剂和/或稀释剂以向对象递送治疗剂的任何物质，其本身不是治疗剂，而是为了改善治疗剂的处理或储存性质、或为了实现或便于将所述组合物的剂量单位形成为分立的制品。本发明的药物组合物，单独地或组合地，可以包含一种或几种选自分散剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂等的试剂或介质。[0141]术语“治疗”是指选自肾上腺脑白质营养不良(ald)和肾上腺脊髓神经病(amn)的病症的治疗、预防(prevention)和预防(prophylaxis)。如本文所公开的术语“治疗”是指预防疾病或其至少一种症状。这也意指改善、预防至少一个与正在治疗的疾病相关的可测量的身体参数，该参数在对象中是可觉察的或觉察不出的。术语“治疗”还指抑制或减缓身体上疾病的进展，稳定生理上可觉察的症状，例如稳定身体参数，或二者兼而有之。术语“治疗”还指延迟疾病或病症的发作。在一些特定的实施方式中，本发明的化合物作为预防措施施用。在本上下文中，“预防”是指降低与疾病相关的至少一种症状发生的风险。[0142]术语“治疗”可以包括用式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物或包含它的药物组合物作用于极长链脂肪酸(vlcfa)的积聚。更具体地，所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物减少vlcfa积聚，从而可以消除或减轻炎症反应。如本文所用，“治疗”还涵盖了对中枢脱髓鞘、肾上腺皮质功能不全或肾上腺功能障碍的任何治疗。因此，术语“治疗”包括与ald和/或amn相关的症状的治疗。[0143]所述治疗包括将本发明的式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物或药物组合物施用于患有所宣布的病症的对象以治愈、延迟或减缓进展，从而改善患者的状况。[0144]在本发明的上下文内，术语“对象”是指哺乳动物，更特别是人类。本发明的待治疗对象可以基于与所述疾病相关的若干标准，例如先前药物治疗、相关病理、基因型、对风险因素的暴露、病毒感染、以及任何其它可以通过免疫学、生物化学、酶学、化学或核酸检测方法进行评估的相关生物标志物，来适当地选择。[0145]在ald的情况下，所述治疗更特别适合2至10岁的患者。由于amn是ald的成人形式，因此所述治疗更特别适合20至39岁之间的患者。[0146]药物组合物可以按剂量单位形式施用，每剂量单位包含预定有效量的活性成分。[0147]药物组合物可以适于通过任何所需的合适方法施用，例如通过口服(包括口颊或舌下)、直肠、鼻、局部(包括口颊、舌下或经皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)方法。这样的组合物可以使用制药领域中已知的所有方法通过例如将活性成分与赋形剂或佐剂合并来制备。优选地，本发明的药物组合物适于口服施用。[0148]适于口服施用的药物组合物可以作为独立的单位，例如胶囊或片剂；粉剂或颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食用泡沫或泡沫食品；或乳液，例如水包油液体乳液或油包水液体乳液，进行施用。[0149]因此，例如，在以片剂或胶囊形式口服施用的情况下，活性成分组分可以与口服的无毒且药学上可接受的惰性赋形剂相结合。粉剂是通过将化合物粉碎至合适的细小尺寸并将其与以类似方式粉碎的药用赋形剂混合而制备的，所述赋形剂例如可食用碳水化合物，如淀粉或甘露糖醇。也可以存在调味剂、防腐剂、分散剂和染料。[0150]胶囊可通过制备如上所述的粉末混合物并用其填充成形的明胶壳来生产。在填充操作之前，可以向所述粉末混合物添加助流剂和润滑剂，例如高度分散的硅酸、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体形式的聚乙二醇。也可以添加崩解剂或增溶剂，例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以改善胶囊服用后药物的利用度。[0151]另外，如果需要或必要，也可以将合适的粘合剂、润滑剂和崩解剂以及染料并入所述混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖例如葡萄糖或β-乳糖、由玉米制成的甜味剂、天然和合成橡胶例如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。这些剂型中所用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂是例如如下所述配制的：制备粉末混合物，将所述混合物制粒或干压，添加润滑剂和崩解剂，以及压制整个混合物以产生片剂。粉末混合物是如下所述制备的：将以合适的方式粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或碱混合，并任选与粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮、溶解延迟剂例如石蜡、吸收促进剂例如季盐、和/或吸收剂例如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合。所述粉末混合物可以通过将其用粘合剂例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶、或纤维素或聚合物材料溶液润湿并将其压过筛子来制粒。作为制粒的替代方法，所述粉末混合物可以通过压片机，产生形状不均匀的块，将其破碎以形成颗粒。所述颗粒可以通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油进行润滑，以防粘在片剂铸模上。然后压制所述经润滑的混合物以产生片剂。本发明的化合物也可以与自由流动的惰性赋形剂合并，然后不进行所述制粒或干压步骤，直接压制以产生片剂。可以存在由虫胶密封层、糖或聚合物材料层和蜡光泽层组成的透明或不透明保护层。可以将染料添加到这些包衣中，以便能够区分不同的剂量单位。[0152]适于口服施用的药物组合物也可以通过固体或液体分散体的喷雾干燥来配制。[0153]口服的液体，例如溶液、糖浆和酏剂，可以制备成剂量单位的形式，使得给定的量包含预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解在具有合适调味剂的水溶液中来制备，而酏剂则使用无毒醇类介质来制备。悬浮液可以通过将化合物分散在无毒介质中来配制。也可以添加增溶剂和乳化剂例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、风味添加剂例如薄荷油或天然甜味剂或糖精、或其它人造甜味剂等。[0154]如果需要，可以将用于口服施用的剂量单位制剂封装在微胶囊中。所述制剂也可以按延长或延迟释放的方式制备，例如通过在聚合物、蜡等中包被或包埋颗粒材料。[0155]根据本发明使用的噻吩并吡啶酮衍生物也可以按脂质体递送系统例如小单层脂囊、大单层脂囊和多层脂囊的形式施用。脂质体可以由各种磷脂例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。[0156]“有效量”是指如上定义的化合物预防、消除或减少所治疗的疾病在人类中的有害效应的量。应理解，本领域技术人员可根据患者、病理、施用方式等来调整施用剂量。例如，所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物可每天施用一次或两次，对人类患者的日剂量为0.5mg至3000mg，优选20mg至1000mg，更优选60mg至500mg。它可以作为长期药物每周施用4、5、6或7天。[0157]在本发明的一个特定实施方式中，所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物以包含0.5mg至1500mg、优选20mg至1000mg、更优选60mg至500mg所述式(i)的噻吩并吡啶酮衍生物的剂量单位施用。[0158]本发明还将在以下实施例中更详细地描述，这些实施例并不意图限制本发明的范围，本发明的范围由权利要求书限定。[0159]实施例[0160]实施例1：pxl770的合成[0161]缩写[0162]a/a：光谱或色谱图上的给定化合物的峰面积与总峰面积之比。eq[0163]分析方法[0164]xrpd[0165]使用配备有cu(kα辐射)x射线管和pixcel检测器系统的panalytical xpert pro衍射仪进行x射线粉末衍射(xrpd)分析。样品以透射模式并夹在低密度聚乙烯薄膜之间进行分析。xrpd图谱使用highscore plus 2.2c软件进行分类、操作和索引。[0166]tg/dta[0167]在perkin elmer diamond热重/差温分析仪(tg/dta)上进行热重(tg)分析。校准标准是铟和锡。样品放在铝样品盘中，插入tg炉中并精确称重。样品在氮气流中以10℃/分钟的速率从30℃加热到300℃。在分析样品之前，将炉温在30℃平衡。[0168]1a)1-(5-苄氧基四氢化萘-6-基)乙酮(1)的合成[0169][0170]将6-乙酰基-5-羟基四氢化萘(100g，1eq.)溶于乙腈(300ml)。添加k2co3(1.1eq.)和苄基溴(1.05eq.)后，加热该悬浮液(76℃)。48小时后，添加苄基溴(0.1eq)。总共74小时后，滤出固体并用乙腈(200ml)洗涤，并将合并的滤液蒸发。[0171]获得作为浆状物的化合物1：m＝148.6g，定量产率，纯度96.6％a/a。[0172]1b)2-氨基-4-(5-苄氧基四氢化萘-6-基)噻吩-3-甲酸乙酯(2)的合成[0173][0174]将乙酸(70ml)加热至t＝65℃。用10分钟添加hmds(1.5eq.)。然后，添加化合物1(69.5g，1eq.)和氰基乙酸乙酯(1.5eq.)在乙酸(140ml)中的溶液。将所得的混合物在t＝65℃下搅拌24小时。[0175]冷却至室温后，添加naoh水溶液(1m，140ml)和tbme(210ml)。进行层分离。有机层用naoh水溶液(1m，4×140ml)洗涤，直到水相的ph为碱性(ph＝13)。将该有机层用hcl水溶液(1m，140ml)和h2o(2×140ml)洗涤。[0176]添加etoh(240ml)、nahco3(1.3eq.)和硫(1.0原子当量)。加热至回流180分钟后，将该反应混合物浓缩至210ml并与tbme(3×140ml)一起共蒸发。冷却至室温后，将该悬浮液过滤并用tbme(70ml)洗涤固体。合并的滤液浓缩至210ml，并在室温下滴加hcl的二烷溶液(1.1eq.)。接种后观察到沉淀。在室温下滴加庚烷(350ml)。搅拌14小时后，过滤该悬浮液。用庚烷(3×70ml)洗涤并干燥后，回收作为固体的化合物2。m＝83.2g，产率71％，纯度93.7％a/a。[0177]1c)4-(5-苄氧基四氢化萘-6-基)-5-氯-2-[(2-苯基乙酰基)氨基]噻吩-3-甲酸乙酯(3)的合成[0178][0179]将化合物2(17.69g，1eq.)溶于二氯甲烷(140ml)。所得溶液用冰/水冷却。在搅拌下，添加n-氯代琥珀酰亚胺(1.05eq.)。该混合物在几分钟内变黑。1小时后，添加苯乙酰氯(1.25eq.)。[0180]在0℃下1小时和在室温下2小时后，将该混合物蒸发至约35ml，添加etoh(2×70ml)，并再次蒸发。将该混合物用etoh(35ml)稀释并用冰/水冷却。产物沉淀。过滤出固体并用冷etoh(3x18ml)洗涤。[0181]获得作为固体的化合物3：m＝20.99g，产率94.2％，纯度99.3％a/a。[0182]1d)3-(5-苄氧基四氢化萘-6-基)-2-氯-4-羟基-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮(4)的合成[0183][0184]将化合物3(19.88g，1eq.)溶于甲基四氢呋喃(120ml)，并将反应混合物冷却至-16℃和-10℃之间的温度(nacl/冰)。分四份添加叔丁醇钾(5eq.)。然后，将该反应混合物升温至室温，并在室温下搅拌65分钟。在t＝0-5℃(水/冰)下进行2n hcl(5eq.)的滴加，并剧烈搅拌所得混合物。用nacl(水溶液)(11％，1×50ml)和水(2×50ml)洗涤有机相。将有机相浓缩至～50％溶液。添加甲基四氢呋喃(80ml)，将所得溶液浓缩至～50％溶液。添加tbme(100ml)，并将所得溶液浓缩至～50％溶液(该步骤重复3次)。然后，添加tbme(25ml)、化合物4的晶种和正庚烷(20ml)，所得溶液在室温下搅拌过夜。将该混合物浓缩至约50ml，过滤，用母液漂洗、用正庚烷(2×40ml)洗涤、并干燥。获得作为粒状固体的化合物4。产率88％，纯度99.5％a/a。[0185]1e)2-氯-4-羟基-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮(i)的合成[0186][0187]将化合物4(15g，1eq.)溶于75ml二氯甲烷并冷却至t＝-10℃/-15℃(用冰/nacl)。滴加bcl3(1.5eq.，溶液：1mol/l的二氯甲烷溶液)并将所得混合物在室温下搅拌15小时。用冰/水冷却所得混合物，并添加水(75ml)。剧烈搅拌所得混合物并用水/meoh(9:1v/v，5×45ml)提取有机相。浓缩有机相，用甲苯(3×90ml)进行溶剂交换并用甲苯稀释至达到90ml甲苯的最终体积。将所得混合物加热至回流并添加15ml甲醇。获得有少许粒子的淡褐色溶液。在t＝40℃添加晶种，升温至t＝52℃并冷却至室温。将所得混合物搅拌过夜，然后用冰/nacl(t＝-10℃/-15℃)冷却100分钟。过滤出沉淀的产物，用甲苯/庚烷1:2v/v(15ml)和庚烷(15ml)洗涤并干燥。得到化合物(i)的晶体：产率87％，纯度99.0％a/a。[0188]1f)2-氯-4-羟基-3-(5-羟基四氢化萘-6-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮的一水合钾盐(ia)的合成[0189]将化合物(i)悬浮在水/异丙醇混合物(1/1，每种溶剂各5份)中，然后添加0.50至0.55eq的碳酸钾。添加碳酸钾结束时ph为约12(ph试纸)。在50℃搅拌3小时后，该悬浮液变稠，ph为约8(ph试纸)。将温度升至80℃，直至获得溶液(10-15分钟)。如果需要，可以在所述过程的此刻进行澄清。添加7份水，然后将反应混合物冷却至40℃(观察到混浊溶液)。在40℃减压蒸馏(从180毫巴到40毫巴)溶剂，直到反应器中留下7份溶剂。此时可发生钾盐一水合物的结晶。添加4.2份水，并用化合物(i)接种该混合物(1至2％的晶种)。然后将该悬浮液在7小时内从40℃冷却至5℃(5℃/小时)，并在5℃保持数小时。过滤该悬浮液。将滤饼用1.42份水洗涤两次。收集的固体在40℃真空干燥，得到所要求的化学纯度(即98％+)的最低80％产率的化合物(ia)。[0190]实施例2：pxl770的表征[0191]a)化合物(ia)的x射线粉末衍射(xrpd)数据表明它由结晶材料组成。化合物(ia)的xrpd描述如表1所示。[0192]表1：[0193][0194][0195]b)tg/dta分析显示，从30-100℃的初始重量损失为1.1％，随后由于结合水的损失，从117-160℃的重量损失较大，为3％。第二次重量损失伴随着大量吸热，4％的合并重量损失接近一水合物的理论重量损失(3.75％w/w)。该化合物在超过240℃时分解。[0196]实施例3：用pxl770处理的amn患者来源淋巴细胞中的极长链脂肪酸(vlcfa)水平降低[0197]极长链脂肪酸(vlcfa)在血浆和组织(包括脑和脊髓)中的积聚是amn病的标志。文献已经表明，vlcfa负荷随着疾病的严重程度而增加，而降低vlcfa可以消除炎症反应。因此，降低vlcfa超负荷，尤其是在中枢神经系统中，有可能停止或逆转amn的疾病进展。[0198]为了显示pxl770在体外降低极长链脂肪酸(vlcfa)的功效，本研究重点在于评估健康对照细胞和amn人类患者来源的原代淋巴细胞中最普遍的vlcfa——二十六烷酸的水平。所述细胞系获自科里尔细胞库(coriell cell repositories)。淋巴细胞在有10％胎牛血清(fbs)的rpmi-1640中培养。将培养物以1:5的比率分割。来自健康患者的淋巴细胞用作对照。所有处理均在含有胎牛血清(fbs，15％)的完全培养基中进行。所有培养的细胞都维持在37℃下5％co2中。[0199]然后如下测量vlcfa含量。用lc-ms级水将样本调节至0.5–1ml的最终体积，并掺入10ng的木蜡酸-d4作为内标。将样本用稀盐酸酸化至ph 3-4，用异辛烷-乙酸乙酯(9:1)等体积提取3次。提取物在氮气下干燥，残余物在甲醇-水-乙酸铵(75:25:10mm)中重构。[0200]总脂肪酸：在如上所述制备用于游离脂肪酸的含内标样品后，添加氢氧化钠水溶液至终浓度为1m。将该混合物在氮气下37℃避光温育3小时。然后如上所述对样本进行酸化、提取和重构。[0201]脂肪酸的lc-ms分析：使用甲醇-乙酸铵水溶液(10mm)溶剂混合物，将重构的脂肪酸提取物在targa c8柱(2×10mm)上进行hplc。将柱子用梯度甲醇(75％至90％)以0.25ml/min的流速用8分钟进行洗脱。将柱洗脱液直接引入质量分析仪(qtrap5500)并使用已发表的伪mrm方法(pseudo mrm method)监测脂肪酸。在这些条件下，vlcfa在5和8分钟之间洗脱。每种脂肪酸都依靠添加的内标进行定量。[0202]首先，在健康对照细胞和amn人类患者来源的原代淋巴细胞中监测淋巴细胞中二十六烷酸的演变；其次，将pxl770处理以不同浓度(5μm，10μm，25μm，50μm)分配给培养中的amn人类患者来源的原代淋巴细胞，为期一周，并测量二十六烷酸的水平。[0203]该研究的结果如图1所示。该图表明，当用不同剂量的pxl770处理amn患者的淋巴细胞时，该细胞中的二十六烷酸水平(以ng/106个细胞表示)降低。所有测试剂量的pxl770都大幅降低了二十六烷酸的水平，并在5和50μm的剂量下达到与在健康对照的淋巴细胞中存在的相同的水平。[0204]总之，可以确认，pxl770大幅降低了amn患者来源的淋巴细胞中的二十六烷酸、更宽泛地说最普遍的vlcfa的水平。[0205]实施例4：在pxl770存在下培养的amn成纤维细胞中abcd2的过表达[0206]对amn的治疗研究还集中在功能冗余的过氧化物酶体转运蛋白肾上腺脑白质营养不良相关蛋白(abcd2，也称为aldrp)的诱导上。abcd2与在amn中突变/缺失的基因abcd1(也称为aldp)具有显著的序列相似性，因此在过表达时可以补偿abcd1的损失。[0207]为了表明在amn成纤维细胞培养物中pxl770的存在增加了abcd2表达，进行了western印迹以比较在不存在和存在pxl770的情况下amn成纤维细胞中的abcd2水平。更具体地，如下进行蛋白质提取。[0208]将所述细胞用冷的tris缓冲盐水(20mm trizma碱和137mm nacl，ph 7.5)洗涤并在1x sds上样缓冲液(62.5mm trizma碱，2％[w/v]sds，10％甘油)中裂解，超声处理和以15,000g离心5分钟后，将上清液用于免疫印迹测定。使用bsa为标准，用去污剂相容性蛋白质测定试剂(bio-rad)确定样本的蛋白质浓度。将样本与0.1体积的10％β-巯基乙醇和0.5％溴酚蓝混合物一起煮沸3分钟。然后，将40μg总细胞蛋白通过8％或12％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、电转移并用有5％脱脂乳的含tween 20的tris缓冲盐水(tbst；10mm trizma碱，ph7.4，1％tween 20，和150mm nacl)进行封闭。与抗abcd2、abcd3和β-肌动蛋白的抗体一起在4℃温育过夜后，然后用tbst洗涤膜，并与辣根过氧化物酶偶联的抗兔或小鼠igg一起在室温下温育1小时。将膜用tbst缓冲液洗涤后，使用ecl-plus(amersham biosciences)通过放射自显影进行检测。[0209]western印迹分析的结果如图2所示。该图使我们确定，当用浓度为5、10、25μm的pxl770处理amn成纤维细胞时，所述细胞中的abcd2蛋白与其在对照成纤维细胞中的水平相比、更有趣的是与未用pxl770处理的amn成纤维细胞相比，存在过表达。[0210]文献中已知，abcd2的过表达引起来自amn患者的培养成纤维细胞中的vlcfa积聚减少(kemp s.，wei h.m.，lu j.f.，braiterman l.t.，mcguinness m.c.，moser a.b.，watkins p.a.和smith k.d.(1998)基因冗余和药物基因疗法：对x连锁肾上腺脑白质营养不良的影响(gene redundancy and pharmacological gene therapy:implications for x-linked adrenoleukodystrophy).nat.med.4，1261–1268)。[0211]因此，pxl770诱导abcd2过表达，从而可以补偿abcd1的缺乏，并从而使这两种替代蛋白中的一种或两种有助于减少vlcfa积聚。[0212]实施例5：amn小鼠混合神经胶质细胞中的极长链脂肪酸(vlcfa)水平降低[0213]发明人进行了一项研究，测量amn小鼠混合神经胶质细胞在未接受任何处理时和在用不同剂量的pxl770处理时的vlcfa积聚。[0214]c57bl6小鼠繁殖对购自杰克逊实验室(jackson laboratory)(bar harbor，me)并在亨利福特健康系统(henry ford health system)(hfhs)动物设施中养护。所有动物程序均经hfhs动物审查委员会(hfhs animal review committee)批准，所有动物均按照hfhs实验准则和国家研究委员会(national research council)的人道护理标准(实验动物护理和使用指导(guide for care and use of laboratory animals))受到人道护理。饲养abcd1基因敲除小鼠并用于提取混合神经胶质细胞。从1日龄c57bl/6小鼠的全皮质制备富含原代星形胶质细胞的培养物。简而言之，如前所述，在ph 7.4的冰冷的无钙/镁hbss中快速解剖出皮质。将组织切碎，在含有胰蛋白酶(2mg/ml)的hbss中温育20分钟，并在含有10％fbs和10μg/ml庆大霉素的平板培养基中洗涤两次，然后通过巴斯德吸管(pasteur pipette)吹打使其破碎，之后该细胞被接种在75-cm2培养瓶(falcon，franklin，nj)中。在37℃下5％co2中温育1天后，将该培养基完全更换为培养用培养基(含10％fbs和10μg/ml庆大霉素的dmem)。培养物每周两次授受用新鲜培养基进行一半更换。所有培养细胞维持在37℃下5％co2中。10天后，将汇合的混合神经胶质培养物用于所概述的实验。[0215]测量六组混合神经胶质细胞中的二十六烷酸水平。这六个组包括野生型混合神经胶质细胞、ald-ko混合神经胶质细胞(对应于amn小鼠来源的神经胶质细胞，ald是abcd1的另一个名称)、以及不同浓度pxl770(5μm，10μm，25μm，50μm)处理的ald-ko混合神经胶质细胞。[0216]结果如图3所示。当在pxl770(25μm)存在下培养ald-ko小鼠混合神经胶质细胞时，这些细胞中的二十六烷酸积聚降低。[0217]总之，pxl770在减少二十六烷酸和通常更广泛的vlcfa的积聚方面发挥作用。[0218]实施例6：在pxl770存在下ald-ko小鼠脑皮质混合神经胶质细胞中的abcd2过表达[0219]对ald-ko小鼠脑皮质混合神经胶质细胞进行与实施例4相同的实验方案。该模型主要是用于amn的模型。[0220]图4显示，与实施例4的amn患者来源的成纤维细胞一样，与未处理的ald-ko小鼠脑皮质混合神经胶质细胞(ctl)相比，用pxl770处理ald-ko小鼠脑皮质混合神经胶质细胞时，abcd2过表达。[0221]总之，pxl770上调ald-ko小鼠脑皮质混合神经胶质细胞中的abcd2水平。[0222]实施例7：用pxl770处理的ald患者来源的淋巴细胞中的极长链脂肪酸(vlcfa)水平降低[0223]在对来自最重型ald(amn)患者的细胞进行研究后，本发明人重复了与实施例1相同的研究方法来分析pxl770对来自x-ald患者(严重炎症表型)的细胞的效果。[0224]图5所示的结果表明，当用浓度递增的pxl770处理ald患者的淋巴细胞时，该细胞中的二十六烷酸水平降低，达到与健康对照淋巴细胞中所存在的相同的水平。[0225]pxl770大幅降低ald患者来源的淋巴细胞中的vlcfa水平。[0226]实施例8：在pxl770存在下培养的ald成纤维细胞中abcd2的过表达[0227]以与实施例4相同的方式，为了表明在ald患者成纤维细胞培养物中pxl770的存在增加了abcd2的表达，进行了western印迹以比较在不存在和存在pxl770的情况下ald患者成纤维细胞中的abcd2水平。[0228]western印迹的结果如图6所示。这些结果表明，用pxl770、尤其是用低浓度(5μm)的pxl770处理ald成纤维细胞时，该细胞中存在蛋白abcd2的过表达。[0229]总之，pxl770可以补偿abcd1的缺乏，从而有助于减少vlcfa积聚。[0230]实施例9：x-ald小鼠体内实验[0231]雄性abcd1-ko小鼠(n＝15)每天2次用经口管饲pxl770(75mg/kg)进行处理，连续60天。未处理的abcd1-ko小鼠(n＝15)和野生型(wt)小鼠(n＝12)作为对照。将处理后的小鼠处死并收集脑皮质和血浆用于vlcfa分析。所述分析根据脂质组学核心机构(lipidomics core facility)的标准化方案进行，数据表示为vlcfaμg/ml水平。选择二十六烷酸(c26:0)作为vlcfa的代表。[0232]进行单因素方差分析与dunnett多重比较检验以评估pxl770对脑vlcfa的效果(****p《0.0001，***p《0.001)。进行kruskal-wallis检验伴dunn多重比较检验以评估pxl770对血浆vlcfa的效果(****p《0.0001，***p《0.01)。[0233]如图7和8所示，pxl770分别显著降低了x-ald小鼠的脑皮质和血浆中的vlcfa积聚。[0234]实施例10：用二甲双胍处理的amn和ald患者来源的淋巴细胞中的极长链脂肪酸(vlcfa)水平降低[0235]实施例3和7中描述的实验由同一实验室用二甲双胍进行，并由singh等在journal of neurochemistry，2016；138，86-100中描述。[0236]这些实验的结果示于图9。[0237]观察到5mm二甲双胍在7天处理后使amn和ald患者来源的淋巴细胞中的vlcfa含量分别降低了-29％和-42％，如图9所示，这不足以提供正常化效果(vlcfa含量仍高于对照)。[0238]相反，pxl770在以低得多的浓度(5μm)施用时，在amn患者(参见实施例3)和ald患者(参见实施例7)中均提供了正常化效果。[0239]因此，本实施例证明pxl770以比二甲双胍更高的功效和更高的效力降低amn和ald患者来源的细胞中的vlcfa含量。[0240]实施例11：pxl770和二甲双胍之间的头对头比较[0241]为了比较pxl770和二甲双胍在体外降低极长链脂肪酸(vlcfa)的功效，本研究重点在于评估健康对照细胞和amn人类患者来源的原代淋巴细胞中最普遍的vlcfa—二十六烷酸的水平。所述细胞系获自科里尔细胞库(coriell cell repositories)。成纤维细胞在有15％fbs的dmem中培养。将培养物以1:5的比率分割。来自健康患者的成纤维细胞用作对照。所有处理均在含有胎牛血清(fbs，15％)的完全培养基中进行。所有培养的细胞都维持在37℃下5％co2中。[0242]然后如下测量vlcfa含量。用lc-ms级水将样本调节至0.5–1ml的最终体积，并掺入10ng的木蜡酸-d4作为内标。将样本用稀盐酸酸化至ph 3-4，用异辛烷-乙酸乙酯(9:1)等体积提取3次。提取物在氮气下干燥，残余物在甲醇-水-乙酸铵(75:25:10mm)中重构。[0243]总脂肪酸：在如上所述制备含内标样品用于游离脂肪酸后，添加氢氧化钠水溶液至终浓度为1m。将该混合物在氮气下37℃避光温育3小时。然后如上所述对样本进行酸化、提取和重构。[0244]脂肪酸的lc-ms分析：使用甲醇-乙酸铵水溶液(10mm)溶剂混合物，将重构的脂肪酸提取物在targa c8柱(2×10mm)上进行hplc。将柱子用梯度甲醇(75％至90％)以0.25ml/min的流速用8分钟进行洗脱。将柱洗脱液直接引入质量分析仪(qtrap5500)并使用已发表的伪mrm方法监测脂肪酸。在这些条件下，vlcfa在5和8分钟之间洗脱。每种脂肪酸都依靠添加的内标进行定量。[0245]该研究计划了不同的患者组。首先，在健康对照细胞和amn人类患者来源的原代淋巴细胞中监测成纤维细胞中二十六烷酸的演变；其次，将pxl770处理以不同剂量(pxl770：0.1、0.5、1、2、3.5和5μm；二甲双胍：100、200、300和400μm)分配给培养中的amn人类患者来源的原代成纤维细胞，为期一周，并测量二十六烷酸的水平。[0246]该研究的结果如图10所示。该图显示，当用递增剂量的pxl770处理amn患者的成纤维细胞时，该细胞中的二十六烷酸水平(以ng/106个细胞表示)降低。另外，与二甲双胍相比，用pxl770达到的效力和功效高得多。[0247]实施例12：在二甲双胍存在下培养的amn和ald患者的成纤维细胞中的abcd2过表达[0248]实施例4和6中描述的实验由同一实验室用二甲双胍进行，并由singh等在journal of neurochemistry，2016；138，86-100中描述。[0249]这些实验的结果示于图11。[0250]观察到5mm的非常高浓度的二甲双胍仅轻度增加amn和ald患者来源的成纤维细胞中的abcd2蛋白表达。[0251]相反，pxl770在以低得多的浓度(5μm)施用时提供的效果大得多。因此，pxl770具有比二甲双胍更高的功效和效力。[0252]实施例13：在二甲双胍存在下amn-ko小鼠脑皮质混合神经胶质细胞中的abcd2过表达[0253]与实施例6中描述的相同实验方案由同一实验室用二甲双胍进行，并由singh等在journal of neurochemistry，2016；138，86-100中描述。[0254]这些实验的结果示于图12。[0255]观察到100μm的二甲双胍在abcd1-ko小鼠神经胶质细胞中诱导abcd2蛋白水平的有限增加。[0256]相反，pxl770在以低得多的浓度(5μm)施用时提供的效果大得多。因此，pxl770具有比二甲双胍更高的功效和效力。[0257]实施例14：x-ald小鼠体内实验[0258]雄性abcd1-ko小鼠(n＝8)每天2次用经口管饲pxl770(75mg/kg)进行处理，连续90天。未处理的abcd1-ko小鼠(n＝8)和野生型(wt)小鼠(n＝8)作为对照。将处理后的小鼠处死并收集脊髓用于vlcfa分析。所述分析根据脂质组学核心机构的标准化方案进行，数据表示为vlcfaμg/ml水平。选择二十六烷酸(c26:0)作为vlcfa的代表。[0259]如图13所示，pxl770显著降低x-ald小鼠脊髓中的vlcfa积聚。[0260]实施例15：用各种噻吩并吡啶酮处理的amn患者来源的成纤维细胞中的极长链脂肪酸(vlcfa)水平降低[0261]用各种噻吩并吡啶酮化合物重复实施例3中描述的实验，所述化合物即：[0262]pxl770：2-氯-3-(5-羟基四氢萘-6-基)-6-氧代-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]4-羟基吡啶钾，[0263]pxl700：2-氯-4-羟基-3-茚满-5-基-5-(3-吡啶基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮，[0264]pxl702：2-氯-4-羟基-3-茚满-5-基-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮，[0265]pxl695：2-氯-5-(4-氟苯基)-4-羟基-3-茚满-5-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮，[0266]各自以0.1至5μm的浓度进行测试。[0267]pxl700具有下式：[0268][0269]进行单因素方差分析伴dunnett多重比较检验以评估pxl770对脑vlcfa的效果(****p《0.0001，***p《0.001)。进行kruskal-wallis检验伴dunn多重比较检验以评估pxl770对血浆vlcfa的效果(****p《0.0001，***p《0.01)。[0270]如图14所示，pxl770、pxl695和pxl702在vlcfa水平方面表现出可比的降低，而pxl700(不包括在本发明的噻吩并吡啶酮内)表现出没有效果或非常有限的效果。[0271]这些化合物以5μm的浓度与400μm的二甲双胍进一步比较。如图15所示，二甲双胍也表现出没有效果或非常有限的效果。









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