负载氢化镁的微针及其在伤口愈合中的应用 专利技术说明

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术1.本发明涉及一种由生物材料制造的医疗器械，尤其涉及一种具有微针的贴片，其上负载氢化镁，用于促进伤口，尤其是糖尿病患者伤口的愈合。背景技术：2.在过去的几十年里，被诊断为糖尿病的人群的发病率越来越高，与糖尿病有关的死亡率和致残率正经历着惊人的增长。糖尿病足溃疡(dfu)是糖尿病最常见的并发症之一，约占糖尿病患者的15～25％。糖尿病导致的m1巨噬细胞(促炎)持续性极化、血管恶化、ros积聚等高血糖微环境会延缓伤口愈合，甚至导致坏疽性截肢。尽管近年来降糖药、血糖监测技术和胰岛素泵的发展，但目前只有有限的方法来治疗糖尿病伤口，并调节其高血糖微环境。因此，在高血糖微环境下，能实现增强促愈合m2巨噬细胞极化和血管生成、减少ros生成的新治疗方法是加快糖尿病创面愈合的迫切需要。3.氢(h2)已证明为有治疗效果和无细胞毒性。h2作为一种抗氧化剂，可以通过中和最强的氧化剂(·oh)来抵抗组织和细胞的氧化应激，而不会干扰正常的代谢氧化或中断细胞信号系统中其他ros功能。h2具有减少ros产生的作用，有望成为改变糖尿病炎性微环境的治疗药物。此前，吸入h2已被用于治疗脑损伤、血管疾病、肿瘤等抗氧化治疗。然而，h2具有高扩散率、低水溶性和剂量依赖性的特点，导致吸入疗法的疗效有限。为了克服这些困难，已开发出刺激响应型纳米材料，如光活化纳米催化剂和酸响应型h2药物前体，其主要通过皮下或静脉注射的方式实现h2的位点特异性释放和释放，提高治疗效果。然而，实现h2的长期释放以获得最佳治疗效果仍然是困难的。4.mg及其合金作为生物可降解植入物，已广泛用于临床组织修复、再生治疗。例如，将含有mg粉的聚乳酸-羟基乙酸(plga)微颗粒在骨性关节炎膝关节附近肌肉内，但是mg粉本身易燃，在制样过程中存在安全隐患。技术实现要素：5.本发明的一个目的在于提供一种微针贴片，以生物可降解材料为基材，负载氢化镁，用于伤口，促进愈合。6.本发明的另一个目的在于提供一种微针贴片，以plga为基材负载氢化镁，用于伤口，促进愈合。7.本发明的再一个目的在于提供一种微针贴片，以plga为基材负载氢化镁，延缓镁离子和氢气的释放，减低活性氧的产生，促进细胞增殖和迁移，增强血管生成。8.本发明的又一个目的在于提供一种微针贴片，作为医疗器械用于糖尿病足溃疡，促进愈合。9.本发明提供一种微针贴片，含有生物可降解材料，并负载化合物，具有促进细胞增殖和迁移，促进m2极化，增强血管生成，促进组织深层创面愈合作用，作为医疗器械用于糖尿病足溃疡，促进愈合。10.一种微针贴片，包括支撑层和微针，微针一端与支撑层连接。微针的针体由生物可降解材料制成，比如：plga。在微针的针尖处含有mgh2。支撑层的材料与制成微针整体的材料相同或不同，亦或采用非生物可降解材料。11.分布于生物可降解材料内的mgh2为平均直径8.1μm颗粒，纯度为98％～99.9％。12.一种具体的微针贴片实施方式，其为10×10的微针阵列，每根微针的规格为200μm×200μm×500μm(宽×长×高)的矩形锥体。13.另一种具体的微针贴片实施方式，包括若干微针贴片单元，各个单元为10×10的微针阵列，每根针的规格为200μm×200μm×500μm(宽×长×高)的矩形锥体。14.与mg粉相比，mgh2可以储存并生成更多的h2，在室温下也更稳定。然而，mgh2在h2治疗中的应用还很少。此外，mg2+可促进巨噬细胞表型改变为促愈合的m2巨噬细胞，增强血管生成，减轻高血糖微环境引起的微血管病变。因此，mgh2是一种很有前景的糖尿病创面治疗的化合物。15.本发明的微针贴片，用于经皮递送和缓释h2及mg离子(mg2+)，以微创的方式治疗糖尿病创面。同时，基于plga的微针保持mgh2经皮输送具有最小的侵入性，保护mgh2不接触水，延长其使用寿命，并允许mgh2持续释放到生理微环境中。因此，经体外和体内验证，负载mgh2的微针贴片(mn-mgh2)均可促进伤口愈合过程，促进m2极化，增强细胞增殖和迁移，改善血管生成和减少ros产生。16.mn-mgh2结合了mg2+和h2的治疗作用，具有促进组织深层创面愈合作用，具体体现在：a)mn-mgh2贴片通过持续高效释放mg2+和h2优化治疗效果；b)h2治疗可使ros减少；c)mg2+促进细胞增殖和迁移，增强血管生成；d)mg2+使m2巨噬细胞表型极化增强。经验证，mn-mgh2具有多种功能，证明其在体内外均有效。这种集多种治疗功能于一体的mn-mgh2为改善糖尿病创面愈合提供了一种新的途径。附图说明17.图1为mn-plga、mn-mgh2和mgh2的合成与表征图；其中，a为mn-mgh2制备方法示意图，b为mgh2的sem图像及其粒径分析，c为mgh2的xrd结果从，d为mgh2的tg和dsc，e为mgh2照片，f为mn-mgh2不同角度、不同放大倍率的sem图像及sem尺寸测量结果，g为mgh2和mn-mgh2原位和体内释放mg2+和h2的测试方法示意图，h为mgh2和mn-mgh2在模拟体液中mg2+的释放曲线图，i为mgh2和mn-mgh2在浸入模拟体液中h2的释放曲线图；18.图2为mn-mgh2的体外免疫调节表征结果图；其中，a为mn-plga浸提液、mn-mgh2浸提液和mgh2溶液处理24h后raw264.7细胞极化的sem图像，b为raw264.7细胞经不同材料处理和不经不同材料处理24h后的活性氧含量测定，c为不同处理下raw264.7细胞ros荧光染色的流式分析结果图，d为各个处理组ros生成的统计结果图，e为孵育24h后il-6、il-1β、inos和arg-1表达量的pcr检测统计图；各个统计图中，n＝3，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001；19.图3为mn-mgh2的体外细胞毒性、细胞再生和血管生成作用结果图，其中，a为与mn-plga、mn-mgh2浸提液或正常细胞培养基共培养72h的成纤维细胞活力统计图，b为与不同浓度mgh2共培养72h的成纤维细胞活力统计图，c为不同条件孵育24h后迁移huvecs的共聚焦图像，d为与mn-plga浸提液、mn-mgh2浸提液、mgh2溶液(1μg/ml)或正常细胞培养基24h细胞迁移能力变化统计图，e为与不同材料(mn-plga浸提液、mn-mgh2浸提液和mgh2溶液)或正常细胞培养基(对照组)共培养后，成纤维细胞迁移能力的差异检测图，f为不同组间间隙闭合率的量化统计图，g为huvecs与不同材料或正常细胞培养液共培养4h后的图像，h为各组血管节点定量，管长量化统计图；各个统计图中，n＝3，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001；20.图4为mn-mgh2体内创面愈合疗效试验，其中，a为体内治疗方案示意图，b为分别在0、3、5、7、10、12和14天给予mgh2或mn-mgh2治疗或未治疗的糖尿病损伤小鼠的代表性摄影图像，c为不同组别伤区愈合率的量化，n＝3，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001；21.图5为第3天和第7天各组小鼠ros染色及染色定量结果图；其中，a为第3天，第7天对照组、mgh2组和mn-mgh2组小鼠ros染色代表性图像，b为测定各组第3天和第7天ros强度统计图，n＝3，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001；22.图6为体内研究免疫调节作用对mn-mgh2细胞形态改变的结果图；其中，a为对照组、mgh2组和mn-mgh2组小鼠治疗3，7和14天后cd68、inos双染代表性图像，b为cd68+inos+细胞在第3、7和14天强度的定量统计图，n＝3，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001；23.图7为体内研究免疫调节作用对mn-mgh2细胞形态改变的结果图；其中，a为对照组、mgh2组和mn-mgh2组小鼠治疗3，7和14天后cd68、cd206双染代表性图像，b为cd68+cd206+细胞在第3、7和14天强度的定量统计图，n＝3，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001；24.图8为治疗后组织再生及胶原纤维修复的组织学切片染色，各个处理组第14天h&e及masson’s三色染色图，白线表示脂肪空化；25.图9为mn-mgh2对细胞增殖和血管生成作用的体内验证结果图，其中，a为cd31免疫荧光染色图，b为ki67免疫荧光染色图，c为各组皮肤组织毛细血管密度统计图，d为各组表皮皮肤组织细胞增殖率统计图，e为各组真皮皮肤组织细胞增殖率统计图，各个统计图中，n＝3，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001。具体实施方式26.以下结合附图详细描述本发明的技术方案。本发明实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。27.本发明以下实施例所用的各项试验方法具体说明如下：28.1)实验材料29.材料与细胞培养：plga购自sigma-aldrich公司。由上海交通大学氢科学中心制备mgh2。微针贴片(mn)模具由聚二甲基硅氧烷(pdms)制成，购自新加坡micropoint技术有限公司。每个mn都有一个10×10的阵列，阵列尺寸为200μm×200μm×500μm(宽×长×高)，高糖dmem细胞培养基和胎牛血清购自英国gibco公司。将成纤维细胞、huvecs和raw264.7细胞用完全培养基(含10％胎牛血清的高糖dmem细胞培养基)在培养箱(37℃，5％co2)中培养。30.2)mn-plga和mn-mgh2的制备31.10％的plga溶液，将100mg plga溶解在1ml 1，4-二恶烷中，搅拌30分钟。将10mg mgh2均匀分布到上述plga溶液中，得到plga-mgh2溶液。将mgh2悬浮液加入微针模型中，3000rpm离心5min，确保溶液完全充满微针模型尖端。每个微针模型含有300μl plga-mgh2溶液，然后放入40℃的干燥器中。12小时后，微针达到一定硬度，脱模得到含有mgh2的微针贴片(mn-mgh2)。32.用纯plga溶液制成的微针(mn-plga)采用前述相同的工艺流程。33.3)mgh2和mn-mgh2的mg2+和h2的体外释放34.为测试mgh2粉末和mn-mgh2的体外释放谱，在试管底部放置3mg mgh2粉末或mn-mgh2，然后加入15ml模拟体液(ph＝7.0)。采用氢电极检测氢的释放。mgh2和mn-mgh2在纯水(ph＝7.0)和模拟体液(ph＝7.0)中释放mg2+。每3mg mgh2和1片mn-mgh2浸泡在15ml模拟体液中，然后放置在透析袋中。在不同的时间点(30分钟、1小时、6小时、1天、2天、4天)采集样本进行icp检测。35.4)cck-8实验36.用于检测plga和mgh2的细胞毒性。将每片mn-plga或mn-mgh2浸泡在5ml pbs中3d得到提取液。将成纤维细胞以每孔3000个细胞接种于96孔板中，分成对照组、mn-plga组和mn-mgh2组。用100μl高糖dmem饥饿成纤维细胞12小时后，不同组成纤维细胞与90μl完全培养基混合10μl pbs(对照组)，mn-plga或mn-mgh2提取物共培养3天。第三天，在每孔中加入10％cck8溶液的完全培养基，与活细胞相互作用。在培养箱中放置2小时后，96孔板用酶标仪(spectramax id3，molecular devices.llc.，usa)进行分析。在确定mgh2促进细胞生长的最佳浓度方面。将成纤维细胞分为不同组，用高糖dmem饥饿12小时，然后与不同浓度的mgh2溶液(0、0.5、1、2、3、4、5μg/ml)共培养3天，最后一天测定其od值，方法与上述相同。37.5)活细胞、死细胞双染色38.huvecs分为三组，共聚焦培养皿，每个培养皿种40×104个细胞。不同组分别与mn-plga、mn-mgh2共培养或仅与细胞培养液(对照组)共培养1天或3天。在指定的时间点，去除培养基，在每个培养皿中加入300μl calcein-am/pi试验(染料试剂按照厂家的说明配置)。37℃，5％co2孵育15分钟后，用共聚焦显微镜(leica sp5，leica camera ag，germany)对不同组细胞拍照，记录代表性图像。39.6)成管实验40.首先，根据制造商的方案，96孔板每孔加入50μl materigel。将huvecs分散到dmem中，种入96孔板，密度为2×104/孔。将huvecs分为3组，分别与正常细胞培养液(对照组)、mgh2溶液或mn-mgh2浸提液孵育4小时，取各组代表性图像。41.7)体外迁移和创面愈合分析42.24孔板每孔放置750μl完全培养基。每个2×104huvecs被悬浮在200μl高糖dmem中，然后种入24孔transwell板一孔。transwell板24孔根据不同的组有不同的处理因素，包括与100μl mn-plga、mn-mgh2、mgh2溶液(1μg/ml)或正常的细胞培养基相互作用。共培养24小时后，细胞首先用多聚甲醛固定15分钟，然后用hoechst染色。擦拭移植孔内的细胞后，用共聚焦显微镜拍摄迁移细胞。成纤维细胞分为四组，在每孔中央划痕，与mn-plga、mn-mgh2浸提液，或mgh2溶液(1μg/ml)或正常细胞培养基共培养。共培养0、6、12和20小时后，在光学显微镜下记录细胞迁移规律。43.8)体外巨噬细胞极化分析44.每5×104raw264.7细胞接种于含无菌硅片的24孔板的1个孔中进行sem分析。与mn-plga、mn-mgh2浸提液和mgh2溶液提取液或正常细胞培养液共培养24h后，从平板上取raw264.7细胞的硅片，2.5％戊二醛固定30min，按酒精浓度梯度脱水(30％5min、50％5min、70％10min、80％10min、95％15min、100％15min)。随后，拍摄sem图片。rt-pcr分析时，将raw264.7细胞与上述不同材料共培养24h。然后，完全分离rna，以gapdh作为内参，定量检测il-6、il-1、inos和arg-1的rna表达。45.9)ros产生的体外流式分析46.首先将raw264.7细胞接种于每孔含2μg lps的6孔板中进行流动分析，分成4组，与1ml mn-plga、mn-mgh2浸提液和mgh2溶液或正常细胞培养基(2ml正常细胞培养基，对照组)共培养。共培养24h后，raw264.7细胞按照说明书使用ros检测试剂盒进行染色。染色细胞首先用荧光显微镜拍摄，然后用流式细胞术收集和分析。47.10)糖尿病创面模型的体内建立及mgh2粉末和mn-mgh2创面愈合疗效试验48.采用糖尿病(db/db)小鼠(周龄)建立慢性创面模型。将小鼠麻醉并剃毛后，在小鼠背部制造直径6mm的圆形创口。随后将12只小鼠随机分为3组(对照组、mn-mgh2组、mgh2粉末组)。对照组不给药，mn-mgh2组每只小鼠用一片mn-mgh2贴片治疗，直到自然脱落，mgh2粉末组给3mg mgh2粉末。每只老鼠饲养于单独的笼子里，有足够的食物和水。分别于治疗后0、3、5、7、10、12和14天拍摄创面图像。49.11)体内创面愈合、ros减少、巨噬细胞极化分析50.治疗后第14天，用过量4％水合氯醛处死小鼠。首先取出创面皮肤，在4％多聚甲醛中浸泡24小时。样本嵌入蜡块后，切片，厚度为5μm，用于后续染色。采用苏木精-伊红染色(h&e)、masson’s三色染色及抗cd31(1∶500)抗体和抗ki67(1∶500)抗体免疫荧光染色，检测创伤愈合过程。使用针对ros的抗体检测不同组ros的降低率。本部分使用cd68、cd206和inos的抗体检测巨噬细胞极化。51.实施例1 mn-mgh2表征52.只含plga的微针命名为mn-plga(图1a)。icp-ms检测mgh2粉末纯度，证明其中mg元素含量达到99.9％。sem图像显示mgh2为相对均匀的球形形貌，平均直径为8.1μm(图1b)。利用xrd进一步验证了mgh2具有较高的结晶度，其中mg单体的比例很小(图1c)。此外，还对mgh2的化学稳定性进行了热重(tg)和差示扫描量热(dsc)表征。tg和dsc结果均表明，mgh2在403℃以上仍保持稳定(图1d)，这保证了mn-mgh2的制备工艺(40℃)不会改变mgh2的特性。53.每个mn-mgh2贴片都拥有10×10阵列(图1e)。每根针的形状是大小为200μm×200μm×500μm(w×l×h)的矩形锥体(图1f)。54.成功制备mn-mgh2后，研究了mg和h2从mgh2和mn-mgh2的原位和体内释放分布(图1g)。mgh2和mn-mgh2浸泡在模拟体液中。首先，在模拟体液中测试mgh2和mn-mgh2中mg2+的释放(图1h)。随着时间的推移，mgh2和mn-mgh2都释放mg2+，但mn-mgh2能够产生mg2+是mgh2的1.46倍。这一结果与我们之前的假设一致，即plga的酸降解产物会促进mg2+的释放。接下来，用氢电极测量mgh2和mn-mgh2在模拟体液中释放的h2(图1i)。mn-mgh2的释放曲线显示，h2在数天后(＞30h)持续释放，而mgh2粉末的释放h2曲线则快得多，其在0.15小时达到释放峰值。由此，经验证，将mgh2加载到以水凝胶为基材的mn中，mg2+的释放量显著增加，h2的释放时间显著延长，mn-mgh2具有显著的缓释h2的优势。55.实施例2 mn-mgh2体外免疫调节56.mn-mgh2体外降低ros生成的验证57.首先，在每孔raw264.7细胞中加入脂多糖(lps)诱导ros过量产生，将细胞接种于24孔板中，与mn-plga提取物、mn-mgh2提取物、mgh2溶液或正常细胞培养基(对照组)共培养。共培养24h后，采用ros染色法对raw264.7细胞进行染色，并在荧光显微镜下成像。各组的代表性图像显示，mgh2或mn-mgh2的应用明显降低了ros的产生(图2a)。为了量化ros生成的减少，收集染色的raw264.7细胞进行流式细胞术分析(图2b)。流式细胞术结果表明(图2c)，mgh2和mn-mgh2分别使活性氧的产生减少到70.77％和50.24％，实现ros的产量减低，证实了它们降低活性氧水平的能力。58.mn-mgh2体外诱导m2极化表征59.在验证了mn-mgh2通过h2治疗降低ros的优势后，进一步验证其通过释放mg2+诱导巨噬细胞表型改变的功能。与对照(未处理)或mn-plga提取物处理的raw264.7细胞相比，sem图像显示，mgh2或mn-mgh2提取物处理的细胞形态改变，表明mg2+诱导巨噬细胞极化(图2d)。为了更详细的研究，我们用mn-mgh2提取物或mgh2溶液(1μg/ml)处理24h的raw264.7细胞进行rt-pcr实验。未处理的细胞作为对照组。rt-pcr检测m1巨噬细胞生物标志物(il-6，il-1和inos)和m2巨噬细胞生物标志物(arg-1)在mrna水平的表达(图2e)。结果显示，mgh2组和mn-mgh2组il-6、il-1和inos表达均有统计学意义的下降，说明治疗后m1极化得到抑制。而mgh2和mn-mgh2组的arg-1表达明显增加，说明处理后m2复极化同时增加。综上所述，mn-mgh2促进了促炎症m1巨噬细胞向促愈合m2巨噬细胞极化。60.实施例3 mn-mgh2能促进细胞体外增殖和迁移61.cck-8法研究mgh2和mn-mgh2对细胞活力和增殖的影响。共培养72h后，mn-plga组与对照组的成纤维细胞活力之间无显著差异，而mn-mgh2组细胞活力有统计学意义的增加，说明mn-plga对成纤维细胞没有明显的细胞毒性作用，而mn-mgh2会进一步促进成纤维细胞的增殖(图3a)。同时，证明了mgh2促进成纤维细胞增殖的最佳浓度为1μg/ml(图3b)。因此，除另有说明外，后续实验均采用1μg/ml mgh2溶液。此外，活、死染色实验也证实了这一结果，得到了类似的结论。62.然后，研究mn-mgh2对细胞迁移能力的影响。迁移的huvecs细胞核用hoechst染色(图3c)。定量分析发现，mgh2溶液或mn-mgh2提取物处理后的huvecs迁移量显著增加(图3d)。此外，纤维母细胞的细胞迁移能力也通过体外伤口愈合划痕试验进行了评估。使用mgh2溶液或mn-mgh2浸提液观察促进伤口愈合(图3e)。定量分析结果显示，mgh2溶液组和mn-mgh2浸提液组的间隙闭合率分别比对照组高1.28倍和1.94倍(图3f)。此外，还进行了成管实验。huvecs分别与正常细胞培养液(对照组)、mgh2溶液或mn-mgh2浸提液孵育4h(图3g)。对不同组的节点和管长进行定量。mn-mgh2处理使节点和管长分别提高了3.54倍和2.22倍(图3h)。63.因此，在体外验证了mn-mgh2促进细胞增殖和迁移的能力，因此有望在体内促进血管生成和组织再生。64.实施例4 mn-mgh2在体内促进创面愈合65.进一步评估了mn-mgh2在糖尿病皮肤损伤小鼠体内的创面愈合效果。如图4a所示，基本方法是在糖尿病(db/db)小鼠背部制造6mm圆形创面，建立小鼠模型。术后小鼠随机分为三组，分别给予pbs(对照组)、mgh2粉末或mn-mgh2。记录mn-mgh2插入皮肤后随时间迁移的形态变化。结果如图4b所示，随着h2气体的释放，mn-mgh2贴片开始变白，然后出现越来越多的小气泡。同时，在第0天、3天、5天、7天、10天、12天、14天对不同处理组的小鼠创面拍照。第10天，mn-mgh2组小鼠损伤部位已明显愈合，其余各组未愈合。对不同时间的创面百分比进行量化，如图4c所示，与对照组和mgh2粉末组相比，mn-mgh2组在第14天显示出创面面积的显著减少。66.实施例5mn-mgh2降低体内ros生成67.通过ros染色检测mgh2在体内对ros的还原作用。分别于第3、7取各组糖尿病小鼠皮肤标本，ros染色并拍摄代表性图像(图5a)。第3天的定量结果显示，与对照组相比，mgh2和mn-mgh2组的ros生成分别减少了1.65倍和1.95倍。同时，在第7天，mgh2和mn-mgh2处理后，活性氧产量仍分别统计下降了1.32倍和1.64倍(图5b)。由此可见，mn-mgh2处理可显著减少ros的产生，从而促进创面愈合。68.实施例6 mn-mgh2在体内诱导m2极化69.为了验证mn-mgh2在m2极化中的作用，在不同组的组织上进行巨噬细胞标记物(cd68，红色)、m1巨噬细胞标记物(inos，绿色)和m2巨噬细胞标记物(cd206，绿色)的体内免疫荧光染色。正常情况下，m1型巨噬细胞在损伤后第1～3天是主要的巨噬细胞表型，而m2型巨噬细胞通常在损伤后第7天达到峰值。第3天cd68/inos双染色代表图和荧光强度定量图显示(图6a)，与对照组相比，mgh2粉末和mn-mgh2处理分别使m1极化降低了1.90倍和2.63倍(图6b)。在第7天，mn-mgh2组m1巨噬细胞的数量比对照组减少了2.03倍，而mgh2组只减少了1.28倍(图6b)。第14天，mn-mgh2仍然使m1极化降低了1.69倍，而mgh2组与对照组差异不显著(图6b)。70.cd68/cd206双染色分析显示，mgh2和mn-mgh2处理后第3天m2复极分别增加2.37倍和3.50倍(图7a，7b)。第7天，与对照组相比，mgh2组和mn-mgh2组的m2复极分别增加了1.44倍和1.77倍(图7b)。第14天，与对照组相比，mgh2和mn-mgh2处理后复极化持续增强1.32倍和1.54倍(图7b)。与mgh2粉末组相比，mn-mgh2组在第7天和第14天m2复极分别增加了1.23倍和1.16倍，表明mn-mgh2对mg2+的释放增强。71.由此，经验证，mgh2和mn-mgh2的应用降低了体内m1浓度，促进了m2的复极，mn-mgh2的治疗效果优于mgh2。72.实施例7mn-mgh2在体内可促进组织再生、胶原纤维修复和血管生成73.h&e染色用于观察肉芽组织形成，测量组织水平中上皮形成过程(图8，第一列)。结果显示，mn-mgh2组在治疗10天后上皮组织完全形成。相比之下，对照组和mgh2粉末组的上皮组织仍有多个脂肪腔，反映愈合不完全。此外，利用masson’s三色染色法，通过将胶原纤维染色为蓝色(或绿色)，将肌纤维染色为红色，将细胞核染色为蓝色，来检测和区分动物组织中的胶原纤维和肌肉纤维(图8，第二列)。mn-mgh2组组织胶原沉积和定向排列最佳，创面愈合和组织重塑效果较好。74.接下来，利用抗cd31和抗ki67免疫荧光染色来评估不同处理后体内细胞增殖和毛细血管形成情况(图9a，9b)。再生毛细血管定量证明，mn-mgh2组毛细血管密度较对照组增加2.48倍(图9c)，较mgh2组增加了1.48倍。75.同时对表皮层和真皮层的增殖细胞分别进行定量。虽然mgh2和mn-mgh2处理都能促进表皮细胞的增殖(图9d)，但mn-mgh2组在真皮层的增殖是对照组的5.2倍，且是mgh2组的1.5倍(图9e)。综上所述，对照组和mgh2组主要在组织表面观察到毛细血管形成和细胞增殖，而mn-mgh2组由于微针给药的优点，可在真皮组织层形成更多的再生毛细血管和细胞。









图片声明：本站部分配图来自人工智能系统AI生成,觅知网授权图片,PxHere摄影无版权图库。本站只作为美观性配图使用,无任何非法侵犯第三方意图,一切解释权归图片著作权方,本站不承担任何责任。如有恶意碰瓷者,必当奉陪到底严惩不贷!




内容声明：本文中引用的各种信息及资料（包括但不限于文字、数据、图表及超链接等）均来源于该信息及资料的相关主体（包括但不限于公司、媒体、协会等机构）的官方网站或公开发表的信息。部分内容参考包括:(百度百科,百度知道,头条百科,中国民法典,刑法,牛津词典,新华词典,汉语词典,国家院校,科普平台)等数据,内容仅供参考使用,不准确地方联系删除处理！本站为非盈利性质站点,发布内容不收取任何费用也不接任何广告!




免责声明：我们致力于保护作者版权，注重分享，被刊用文章因无法核实真实出处，未能及时与作者取得联系，或有版权异议的，请联系管理员，我们会立即处理，本文部分文字与图片资源来自于网络，部分文章是来自自研大数据AI进行生成,内容摘自(百度百科,百度知道,头条百科,中国民法典,刑法,牛津词典,新华词典,汉语词典,国家院校,科普平台)等数据,内容仅供学习参考,不准确地方联系删除处理!的,若有来源标注错误或侵犯了您的合法权益，请立即通知我们，情况属实，我们会第一时间予以删除，并同时向您表示歉意,谢谢!