一种丹参酮IIAC-1位酯化衍生物及其制备方法和应用 专利技术说明

有机化合物处理,合成应用技术一种丹参酮iia c-1位酯化衍生物及其制备方法和应用技术领域1.本发明属于药物化学领域，涉及丹参酮1位衍生物，特别是指一种丹参酮iia c-1位酯化衍生物及其制备方法和应用。背景技术：2.丹参酮iia为丹参中对心血管疾病有确切疗效的重要的脂溶性活性物质。药理研究表明其主要有抗心律失常、保护心肌、改善心肌缺血缺氧、恢复血液循环等作用。虽然丹参酮iia活性确切显著，但因其脂溶性强难溶于水，临床上单体应用并不多，至今只有注射用丹参酮iia磺酸钠盐制剂。丹参酮iia磺酸钠盐虽然提高了丹参酮iia的极性、增加其水溶性从而增强了活性，但半衰期短、代谢快为其显著缺点，而且具有刺激性。所以如何合成出更好的丹参酮iia衍生物，以改善其极性、提高生物利用度、提高活性，是当前研究丹参关注的焦点之一，也是难点之一：因为丹参酮iia结构独特，其脂溶性强、活性部位对热不稳定、母核上难以引入其它基团等因素导致其衍生物合成的困难。专利201610190543.3公开了一种丹参酮iia衍生物在制备内皮细胞保护药物中的应用，该专利通过在丹参酮iia的主核第14位进行取代，发现该位置取代后对血管内皮细胞氧化损伤的通路进行缓解；本课题组前期也对丹参酮iia的15位进行酰胺化取代、17位进行酯化取代，以提高丹参的利用度和开发新药，进而发现，不同的取代基，不同的取代位点，制得的药物的药理性能会存在不小的差异，为了进一步开发提高心肌细胞活力的丹参酮iia衍生物，本课题组进行了长期的摸索。技术实现要素：3.为解决上述技术问题，本发明提出一种丹参酮iia c-1位酯化衍生物及其制备方法和应用。4.本发明的技术方案是这样实现的：5.一种丹参酮iia c-1位酯化衍生物，其具有如下式i或式ⅱ的结构式：[0006][0007]式i或式ⅱ；[0008][0009]其中，x任意选自卤素及硝酸酯基取代的任一种；[0010]r任意选自苯基、苯甲基、苯乙基及由甲氧基、硝基、甲基、卤素基团单取代的苯基。[0011]上述的丹参酮iia c-1位酯化衍生物的制备方法，步骤为：[0012]第一步：[0013]称取一定量丹参酮ⅱa溶于氯苯中，加入1.2-2倍当量的氧2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(tempo)和1.2-2倍当量的卤代乙酸，搅拌，油浴(120-130℃)，反应(3-6)小时，真空浓缩后得到固体混合物，过硅胶层析柱分离，得到化合物1，即丹参酮-1-卤代乙酸酯。[0014]第二步：[0015]在室温下，将化合物1、1-1.2倍当量的2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑，1.2-2倍当量的碘化钾、1.2-2倍当量的碳酸钾溶于有机溶剂i中，25-40℃下搅拌反应1-2小时，真空浓缩至固体，加有机溶剂ⅱ溶解，加水萃取，收集有机相，真空浓缩后，过硅胶层析柱分离，得到化合物2。[0016]第三步：[0017]将化合物2溶于有机溶剂ⅲ中，加入1-2倍当量的系列苯酰氯、1-2倍当量的三乙胺，25-40℃下搅拌反应1-4小时，加入适量稀盐酸(25％)洗涤，用有机溶剂ⅳ萃取，加入适量饱和食盐水洗涤，收集有机相，依次用适量na2co3溶液洗涤1-2次、水洗1-2次，无水硫酸镁或无水硫酸钠干燥，真空浓缩至固体，过硅胶层析柱分离，得到化合物3。[0018]上述卤代乙酸为氯乙酸或溴乙酸。[0019]上述有机溶剂i为乙腈、四氢呋喃、1,4-二氧六环、吡啶或dmf中的任一种，有机溶剂ⅱ为乙酸乙酯或二氯甲烷[0020]上述苯酰氯的衍生物为苯甲酰氯、苯乙酰氯、苯丙酰氯、2-甲氧基苯甲酰氯、3-甲氧基苯甲酰氯、4-甲氧基苯甲酰氯、2-硝基苯甲酰氯、3-硝基苯甲酰氯、4-硝基苯甲酰氯、2-甲基苯甲酰氯、3-甲基苯甲酰氯、4-甲基苯甲酰氯、2-氟苯甲酰氯、3-氟苯甲酰氯、4-氟苯甲酰氯、2-氯苯甲酰氯、3-氯苯甲酰氯、4-氯苯甲酰氯、2-溴苯甲酰氯、3-溴苯甲酰氯或4-溴苯甲酰氯中的任一种。[0021]上述有机溶剂ⅲ为二氯甲烷、乙腈或氯仿；有机溶剂ⅳ为二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯。[0022]上述的丹参酮iia c-1位酯化衍生物在制备心提高心肌细胞活力的新药中的应用。[0023]本发明具有以下有益效果：[0024]1、本技术首次通过噻二唑类杂环中间体，设计合成了一系列丹参酮ⅱa与丹参芳香酸类化合物的拼合产物，共得到25个丹参酮ⅱa衍生物，其中24个为新化合物。通过薄层层析分析和溶解性能研究，与丹参酮ⅱa相比，丹参酮iiac-1位取代的酯化衍生物的极性均变大，大部分衍生物的亲水性明显增加。[0025]2、本技术通过建立h9c2心肌细胞h2o2氧化应激模型，评价丹参酮iia衍生物的心肌保护活性。实验结果表明，相较于h2o2诱导氧化应激损伤的心肌细胞(相对心肌细胞活力为55％)，丹参酮iia在浓度为1μm时作用于受损细胞，相对心肌细胞活力约为77.8％，；衍生物t9、t10、t16在浓度为1μm时作用于受损细胞，相对心肌细胞活力分别约为80.1％、84.5％、82.2％，相较于丹参酮iia，三个衍生物的心肌保护活性均得到显著提升，具有更好的心肌保护作用。[0026]3、本技术通过大鼠离体胸主动脉血管环舒缩调控作用研究，评价丹参酮iia衍生物对l×10-6mol/l去甲肾上腺素预收缩的大鼠离体胸主动脉血管环的舒张作用。实验结果显示，与丹参酮iia相比，化合物t7，t13，t15，t19在浓度为2×10-5mol/l时对重酒石酸去甲肾上腺素引起大鼠胸主动脉血管环的收缩具有显著舒张作用。其中衍生物t15的血管舒张幅度为42.14±0.025，丹参酮iia的舒张幅度为22.02±0.0076，衍生物的血管舒张明显提高。[0027]4、本技术为丹参酮ⅱa衍生物的合成以及拼合原理在中药结构修饰中的应用提供了一定的参考价值，活性实验表明衍生物具有一定前药的潜力，为心血管新药的开发和丹参创新药物研究提供了新的可能。附图说明[0028]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。[0029]图1为本技术的丹参酮iia c-1位酯化衍生物的合成路线。[0030]图2为硝普纳对去甲肾上腺素引起的血管环收缩的舒张变化图。具体实施方式[0031]下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。[0032]本发明以传统中药丹参中分离得到的丹参酮iia为起始原料，合成通式所示的丹参酮衍生物。具体的说，丹参酮iia是用于制备该类化合物的起始原料，丹参酮iia可从传统中药丹参的乙醇提取液中分离得到。[0033]丹参酮iia的结构式为：[0034][0035]丹参酮iia(化合物diia)的制备用下述方法：[0036]丹参提取物用75％乙醇溶解，石油醚：乙酸乙酯＝3:1萃取，随后反复利用用柱层析分离得到丹参酮iia。(diia,石油醚：乙酸乙酯＝8:1，rf＝0.4；)[0037]通式(i)所示的丹参酮类化合物可通过实施例1中的反应流程由丹参酮iia经1-3步反应得到(见反应流程图，图1)。[0038]实施例1[0039]化合物t1的制备方法：[0040][0041]向化合物diia(295mg)的氯苯(10ml)溶液中，依次加入tempo(315mg)和氯乙酸(190mg)。加完后，抽换气(n2)，然后室温条件下反应3小时。反应完毕后浓缩至固体，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝6:1)，得化合物t1(274mg，71％)。[0042]化合物t1：红色针状结晶。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.75(dd,2h),7.26(d,j＝1.4hz,1h),6.63–6.39(m,1h),4.22–3.79(dd,j＝14.4hz,2h),2.26(d,j＝1.4hz,3h),2.26–2.21(m,1h),2.07–1.86(m,2h),1.65–1.53(m,1h),1.41(s,3h),1.29(s,3h).13c nmr(101mhz,chloroform-d)δ182.87,174.82,166.28,160.95,150.70,141.73,136.79,134.31,128.53,126.90,123.32,121.42,120.30,69.28,40.97,34.77,32.07,31.51,30.97,24.51,8.77.hrms:c21h20clo5 for[m+h]+,calculated 387.09993,found 388.25336.m.p.197～198℃.[0043]实施例2[0044]化合物t2的制备方法：[0045][0046]向化合物diia(295mg)的溴苯(10ml)溶液中，依次加入tempo(315mg)和氯乙酸(190mg)。加完后，抽换气(n2)，然后室温条件下反应3小时。反应完毕后浓缩至固体，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝6:1)，得化合物t2(274mg，71％)。[0047]化合物t2：红色针状晶体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.80–7.67(m,2h),6.51(t,j＝3.5hz,1h),3.85–3.76(dd,j＝12.0hz,2h),2.26(d,j＝1.3hz,3h),2.01–1.91(dd,j＝8.0hz,2h),1.58(t,j＝7.8hz,2h),1.41(s,3h),1.29(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.81,174.82,166.09,160.97,150.74,141.71,136.83,134.29,128.52,126.90,123.29,121.42,120.30,69.10,34.77,32.07,31.52,30.98,26.20,24.33,8.76.hrms:c21h20bro5 for[m+h]+,calculated 431.04941,found 431.05142.m.p.186～187℃.[0048]实施例3[0049]化合物t3的制备：[0050][0051]向化合物t1(90mg)的thf(5ml)溶液中，依次加入2-氨基-5巯基-1，3，4-噻二唑(36mg)、碳酸钾(50mg)、以及碘化钾(60mg)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应1小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:3)，得化合物t3(102mg，91％)。[0052]化合物t3的结构分析数据如下：[0053]化合物t3：红色固体。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ7.75(dd,2h),δ7.25(d,j＝1.5hz,1h),6.55(t,j＝3.4hz,1h),5.46(s,2h),3.92–3.80(dd,j＝15.6hz,2h),2.26(d,j＝1.2hz,3h),2.04(s,1h),1.95–1.87(m,2h),1.60–1.51(m,1h),1.40(s,3h),1.27(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.70,174.85,167.22,161.28,150.89,147.14,141.86,136.87,134.50,128.46,126.65,124.52,124.03,123.43,121.37,120.21,119.11,69.03,36.23,34.91,31.94,31.48,30.99,24.48,8.86.hrms:c23h22n3o5s2 for[m+h]+,calculated 484.10009,found484.09869.m.p.178～179℃.[0054]实施例4[0055]化合物t4的制备：[0056][0057]向化合物t2(42mg)的乙腈(8ml)溶液中，随后加入硝酸银(35mg)，加完后抽换气(n2)，然后80℃条件下反应8小时。反应完毕后，过滤，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后乙醇重结晶，得化合物t4(18mg，44％)。[0058]化合物t4的结构分析数据如下：[0059]化合物t4：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.80–7.68(dd,j＝5.2,5.6hz,2h),6.54(t,j＝3.6hz,1h),4.87(dd,j＝11.6,11.2hz,2h),2.26(s,3h),2.05–1.97(m,1h),1.85(td,j＝13.7,2.9hz,1h),1.59(dt,j＝14.1,3.9hz,1h),1.44(t,j＝7.3hz,1h),1.40(s,3h),1.29(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.96,174.78,164.76,160.89,150.69,141.78,136.30,134.39,128.58,126.84,123.46,121.44,120.34,69.38,67.31,34.71,31.98,31.54,30.94,24.65,8.74.hrms:c21h20no8 for[m+h]+,calculated 414.11889,found 414.12048.m.p.165～166℃.602.14195,found 602.14081.m.p.195～197℃.[0070]实施例7[0071]化合物t7的制备：[0072][0073]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、苯丙酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t7(38mg，65％)。[0074]化合物t7：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.61-7.52(m,2h),7.22-7.16(m,5h),7.06(s,1h),6.34(s,1h),4.02(d,j＝16.2hz,1h),3.85(d,j＝16.8hz,1h),2.96(t,j＝8.4hz,2h),2.84(t,j＝8.4hz,2h),2.14(d,j＝13.2hz,1h),2.06(s,3h),1.90(m 1h),1.85(m,1h),1.78(m,1h),1.45(m,1h),1.30(s,3h),1.16(s,3h).[0075]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.32,176.65,174.43,170.67,166.74,160.76,158.58,150.50,141.84,140.17,136.65,133.34,134.21,133.15,128.47,128.32,126.32,123.11,121.22,120.19,118.54,117.62,68.94,37.40,35.56,34.67,31.99,31.45,30.97,29.70,24.49,8.74.hrms:c32h30n3o6s2 for[m+h]+,calculated 616.15760,found 616.15649.m.p.182～185℃.[0076]实施例8[0077]化合物t8的制备：[0078][0079]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、2-甲氧基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t8(38mg，65％)。[0080]化合物t8：红色固体。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ11.14(s,1h),8.23(dd,j＝7.9,1.9hz,1h),7.70(s,2h),7.63–7.56(m,1h),7.21–7.13(m,2h),7.09(d,j＝8.4hz,1h),6.48(d,j＝3.9hz,1h),4.11(s,3h),4.07(d,j＝11.2hz,1h),3.98(d,j＝15.6hz,1h),2.25(d,j＝1.3hz,3h),1.97(m,1h),1.94–1.84(m,2h),1.59–1.52(m,1h),1.39(s,3h),1.26(s,3h).[0081]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ185.65,179.76,169.54,166.78,164.56,162.32,158.76,155.32,150.66,147.78,145.67,142.34,141.54,135.09,134.89,133.98,132.90,125.33,123.12,122.67,121.85,117.89,68.95,56.44,35.84,34.73,32.01,31.50,29.70,24.48,8.77.hrms:c31h28n3o7s2 for[m+h]+,calculated 618.13687,found 618.13574.m.p.126～129℃.[0082]实施例9[0083]化合物t9的制备：[0084][0085]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、3-甲氧基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t9(38mg，65％)。[0086]化合物t9：红色固体。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ11.91(s,1h),7.75(d,j＝7.7hz,1h),7.65–7.55(m,3h),7.43(t,j＝7.8hz,1h),7.10(d,j＝8.1hz,2h),6.48(s,1h),4.17–3.96(dd,j＝15.6hz,2h),3.85(s,3h),2.19(d,j＝16.3hz,1h),2.12(s,3h),1.92(m,1h),1.81(m,1h),1.49(m,1h),1.30(s,3h),1.21(s,3h).[0087]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.32,177.63,167.83,166.83,165.44,159.83,155.4,153.43,150.94,147.67,145.56,141.54,136.78,135.09,132.90,130.89,129.87,128.98,126.78,125.45,123.12,121.85,68.95,56.44,35.84,34.73,32.01,31.50,29.70,24.48,8.77.hrms:c31h28n3o7s2 for[m+h]+,calculated 618.13687,found 618.13574.m.p.126～129℃.m.p.190～193℃.[0088]实施例10[0089]化合物t10的制备：[0090][0091]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、4-甲氧基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t10(38mg，65％)。[0092]化合物t10：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.19(m,1h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),7.71–7.66(dd,2h),7.66–7.53(m,j＝5.6hz,1h),7.19–7.14(m,1h),6.44(d,j＝3.2hz,1h),4.41–4.30(m,2h),4.14(dd,j＝16.0,11.6hz,1h),2.19(s,3h),2.15(s,3h),1.93(d,j＝14.7hz,1h),1.87(d,j＝13.4hz,1h),1.58–1.53(m,1h),1.38(s,3h),1.24(s,3h).[0093]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.38,174.60,166.68,164.84,160.83,159.59,158.77,158,05,157.60,154.78,150.62,141.81,136.67,134.29,130.75,128.33,126.51,123.20,121.28,120.18,114.20,113.71,68.97,55.56,42.17,35.54,34.70,31.99,29.70,24.48,8.71.hrms:c31h28n3o7s2 for[m+h]+,calculated 618.13687,found 618.13715.m.p.124～127℃.[0094]实施例11[0095]化合物t11的制备：[0096][0097]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、2-硝基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t11(38mg，65％)。[0098]化合物t11：红色固体。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.13(m,1h),7.78–7.67(m,4h),7.60(s,1h),7.19(s,1h),6.43(s,1h),4.34(dd,j＝12.4hz,2h),2.15(d,j＝5.4hz,3h),1.94–1.83(m,2h),1.56(m,2h),1.40(s,3h),1.25(s,3h).[0099]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ183.43,179.87,167.66,166.70,157.88,159.90,157.88,144.67,143.22,142.78,141.84,137.33,136.27,135.87,133.23,131.31,126.33,125.56,124.54,123.25,121.22,119.98,69.04,42.07,34.72,31.97,31.50,30.96,23.73,8.73.hrms:c30h25n4o8s2 for[m+h]+,calculated 633.11138,found 633.11078.m.p.148～150℃.[0100]实施例12[0101]化合物t12的制备：[0102][0103]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、3-硝基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t12(38mg，65％)。[0104]化合物t12：红色固体。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.91(s,1h),8.67(d,j＝7.7hz,1h),8.43(d,j＝5.8hz,1h),7.84(t,j＝7.9hz,1h),7.70–7.57(m,2h),7.09(s,1h),6.41(s,1h),4.10–3.89(dd,j＝16.4hz,2h),2.06(s,3h),1.99–1.80(m,2h),1.53(d,j＝14.7hz,1h),1.44(t,j＝7.2hz,1h),1.36(s,3h),1.23(s,3h).[0105]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ181.78,176.98,173.09,169.98,166.95,160.98,159.34,156.78,155.56,153.43,145.99,137.11,135.27,133.45,132.09,130.99,129.58,127.30,125.45,126.46,124.56,117.89,61.96,42.07,33.56,32.77,31.236,29.70,28.80,8.27.hrms:c30h25n4o8s2 for[m+h]+,calculated 633.11138,found 633.10992.m.p.145～146℃.[0106]实施例13[0107]化合物t13的制备：[0108][0109]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、4-硝基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t13(38mg，65％)。[0110]化合物t13：红色固体。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.44–8.28(m,4h),7.69–7.56(dd,j＝8.4,8.0hz,2h),7.08(s,1h),6.43(s,1h),4.15–3.95(dd,j＝16.0hz,2h),2.21(d,j＝13.5hz,1h),2.01(s,3h),1.97–1.80(m,2h),1.52(s,1h),1.34(s,3h),1.22(s,3h).[0111]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.71,174.86,169.89,167.17,161.19,159.89,154.64,153.45,152.64,150.84,141.78,138.98,137.46,136.89,134.36,128.44,126.71,124.48,123.97,123.33,121.35,120.21,68.95,36.32,34.53,31.51,30.97,30.21,24.17,8.78.hrms:c30h24n4o8s2 for[m+h]+,calculated 633.11138,found 633.10986.m.p.193～194℃.[0112]实施例14[0113]化合物t14的制备：[0114][0115]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、2-甲基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t14(38mg，65％)。[0116]化合物t14：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.69(d,j＝11.1hz,3h),7.39(t,j＝6.8hz,1h),7.32(t,j＝7.5hz,1h),7.25(s,1h),7.15(d,j＝1.5hz,1h),6.50(t,j＝3.5hz,1h),4.03–3.94(dd,j＝10.8,10.2hz,2h),2.50(s,3h),2.21(t,j＝5.5hz,1h),2.16(d,j＝1.3hz,3h),1.95(tt,j＝14.4,3.2hz,1h),1.85(td,j＝13.5,2.6hz,1h),1.53(d,j＝13.7hz,1h),1.35(s,3h),1.24(d,j＝4.2hz,3h).[0117]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ183.39,175.52,170.09,169.76,161.76,159.33,155.58,150.41,143.09,137.73,136.35,133.19,130.02,129.66,128.95,127.77,126.36,123.53,120.47,119.68,118.30,117.45,69.31,35.57,34.77,32.02,30.99,29.75,24.51,20.81,8.80.hrms:c31h28n3o6s2 for[m+h]+,calculated 602.14195,found 602.14008.m.p.182～183℃.[0118]实施例15[0119]化合物t15的制备：[0120][0121]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、3-甲基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t15(38mg，65％)。[0122]化合物t15：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.96–7.92(m,1h),7.89(s,1h),7.63–7.54(m,j＝5.6hz 2h),7.46–7.36(m,2h),7.06(s,1h),6.47(t,j＝3.4hz,1h),4.00(dd,j＝15.7hz,2h),2.43(s,3h),2.23–2.17(m,1h),2.07(s,3h),1.92(tt,j＝14.3,3.1hz,1h),1.87–1.78(m,1h),1.49(d,j＝13.8hz,1h),1.29(s,3h),1.20(s,3h).[0123]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.39,174.52,166.78,165.25,161.51,160.75,158.82,150.41,141.59,138.81,136.51,134.20,134.02,130.61,128.91,128.74,128.33,126.55,125.67,123.18,121.30,120.15,68.90,35.72,34.63,33.45,31.96,30.91,24.46,21.27,8.59.hrms:c31h28n3o6s2 for[m+h]+,calculated 602.14195,found 602.14172.m.p.145～148℃.[0124]实施例16[0125]化合物t16的制备：[0126][0127]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、4-甲基苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t16(38mg，65％)。[0128]化合物t16：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.01(d,j＝7.9hz,2h),7.63–7.57(dd,j＝5.6,5.2hz,2h),7.30(d,j＝7.8hz,2h),7.08(s,1h),6.48(t,j＝3.5hz,1h),4.10(d,j＝15.8hz,1h),4.01(d,j＝15.8hz,1h),2.39(s,3h),2.10(s,3h),2.04(s,1h),1.94–1.89(m,1h),1.82(t,j＝14.9hz,1h),1.52–1.46(m,1h),1.29(s,3h),1.20(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.41,174.53,166.79,164.83,161.31,160.77,158.71,150.48,144.31,141.60,136.62,134.05,132.43,130.32,129.53,128.53,128.34,127.87,126.58,123.15,121.31,120.18,68.93,35.49,34.63,31.95,31.33,30.94,24.44,21.65,8.62.hrms:c31h28n3o6s2 for[m+h]+,calculated 602.14195,found 602.14093.m.p.157～159℃.[0129]实施例17[0130]化合物t17的制备：[0131][0132]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、2-氟苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t17(38mg，65％)。[0133]化合物t17：红色固体。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ10.35(s,1h),8.19–8.08(m,1h),7.69(s,2h),7.66–7.59(m,1h),7.37(t,j＝7.6hz,1h),7.27(s,1h),7.18(s,1h),6.48(s,1h),4.17–3.89(dd,j＝16.0,15.6hz,2h),2.26(s,1h),2.23(s,3h),2.01–1.82(m,2h),1.60–1.51(m,1h),1.39(s,3h),1.25(s,3h).[0134]13c nmr(151mhz,chloroform-d)13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.64,174.74,166.85,161.78,160.96,159.62,150.71,141.67,136.82,135.48,134.31,132.71,128.42,126.74,125.28,124.03,124.00,123.22,121.40,120.27,118.64,116.80,69.03,35.66,34.75,31.97,31.52,31.00,24.48,8.79.hrms:c30h25fn3o6s2 for[m+h]+,calculated 606.11688,found 606.11566.m.p.135～138℃.[0135]实施例18[0136]化合物t18的制备：[0137][0138]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、3-氟苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t18(38mg，65％)。[0139]化合物t18：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.97(d,j＝7.6hz,1h),7.85(d,j＝9.3hz,1h),7.66–7.57(dd,j＝5.2hz 2h),7.52(s,2h),7.10(s,1h),6.46(s,1h),4.11(d,j＝15.9hz,1h),4.01(d,j＝15.9hz,1h),2.19(s,1h),2.11(s,3h),1.92(d,j＝14.0hz,1h),1.85(d,j＝13.5hz,1h),1.51(d,j＝13.0hz,1h),1.32(s,3h),1.22(s,3h).[0140]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.28,174.46,166.86,164.08,163.55,161.91,160.79,150.52,141.78,136.62,134.17,132.77,130.73,130.68,128.32,126.51,124.64,123.21,121.30,120.62,120.19,115.89,68.98,35.39,34.68,31.98,31.43,31.00,24.50,8.72.hrms:c30h25fn3o6s2 for[m+h]+,calculated 606.11688,found 606.11749.m.p.125～128℃.[0141]实施例19[0142]化合物t19的制备：[0143][0144]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、4-氟苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t19(38mg，65％)。[0145]化合物t19：红色固体。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ12.48(s,1h),8.29–8.15(m,2h),7.66–7.49(dd,j＝8.0hz,2h),7.20(t,j＝8.4hz,2h),7.02(s,1h),6.47(s,1h),4.28–3.87(dd,j＝13.2,16.0hz,2h),2.20(d,j＝13.6hz,1h),2.02(s,2h),1.96–1.79(m,2h),1.56–1.46(m,1h),1.30(s,3h),1.21(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.29,174.45,166.86,166.76,165.17,164.11,161.80,160.80,150.55,141.69,136.56,134.18,131.59,131.53,128.33,126.77,126.51,123.22,121.29,120.15,116.13,115.99,69.09,35.50,34.69,31.96,31.36,31.00,24.50,8.63.hrms:c30h25fn3o6s2 for[m+h]+,calculated 606.11688,found 606.11505.m.p.196～198℃.[0146]实施例20[0147]化合物t20的制备：[0148][0149]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、2-氯苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t20(38mg，65％)。[0150]化合物t20：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.79(d,j＝7.5hz,1h),7.70(s,2h),7.54–7.40(m,3h),7.16(s,1h),6.48(t,j＝3.5hz,1h),4.08–4.00(d,j＝12.8hz,1h),3.99–3.89(d,j＝18.4hz,1h),2.23(d,j＝17.9hz,1h),2.18–2.12(m,3h),2.01–1.91(m,1h),1.85(t,j＝13.5hz,1h),1.54(d,j＝17.3hz,1h),1.38(s,3h),1.25(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.57,174.68,166.72,164.05,160.88,150.64,141.84,141.70,136.75,136.67,134.33,134.28,132.87,132.10,131.60,130.83,130.74,128.40,128.34,126.68,123.26,120.24,69.00,42.18,35.44,34.70,32.00,30.96,24.48,8.70.hrms:c30h25cln3o6s2 for[m+h]+,calculated 622.08733,found 622.08612.m.p.137～139℃.[0151]实施例21[0152]化合物t21的制备：[0153][0154]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、3-氯苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t21(38mg，65％)。[0155]化合物t21：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.11–8.05(m,2h),7.63(d,j＝8.3hz,1h),7.58(d,j＝8.2hz,1h),7.54(d,j＝7.0hz,1h),7.49(t,j＝7.8hz,1h),7.09(s,1h),6.45(d,j＝3.6hz,1h),4.12–3.95(dd,j＝10.4,10.8hz,2h),2.22(dd,j＝18.5,5.8hz,1h),2.09(s,3h),1.96–1.80(m,2h),1.51(d,j＝10.0hz,1h),1.33(s,3h),1.22(s,3h).1h),1.33(s,3h),1.22(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.31,174.49,166.72,163.91,161.45,160.77,159.20,150.52,141.70,136.58,135.01,134.12,133.35,132.50,130.23,128.75,128.30,126.71,126.54,123.16,121.29,120.17,68.93,58.49,35.61,34.66,31.96,31.42,24.45,8.62.hrms:c30h25cln3o6s2 for[m+h]+,calculated 622.08733,found 622.08936.m.p.138～140℃.[0156]实施例22[0157]化合物t22的制备：[0158][0159]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、4-氯苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t22(38mg，65％)。[0160]化合物t22：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.16–8.01(m,2h),7.93–7.82(m,2h),7.74–7.68(dd,j＝5.6,5.2hz,2h),7.19(s,1h),6.44(d,j＝3.4hz,1h),4.34(d,j＝15.0hz,1h),4.33(d,j＝15.0hz,1h),2.24–2.23(m,1h),2.17(s,3h),1.95(dt,j＝14.0,2.9hz,2h),1.58–1.55(m,1h),1.41(s,3h),1.25(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.22,174.41,170.36,166.81,164.28,161.66,160.77,159.04,150.55,141.68,140.01,139.90,136.59,134.16,131.51,130.29,129.12,128.30,126.50,123.19,121.29,120.15,69.06,35.47,34.69,31.96,31.01,29.75,24.50,8.64.hrms:c30h25cln3o6s2 for[m+h]+,calculated 622.08733,found622.08594.m.p.136～137℃.[0161]实施例23[0162]化合物t23的制备：[0163][0164]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、2-溴苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t23(38mg，65％)。[0165]化合物t23：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ7.98–7.78(m,3h),7.63–7.52(dd,j＝6.2hz,2h),7.34(m,1h),7.16(s,1h),6.45(t,j＝3.4hz,1h),4.32(d,j＝12.6hz,1h),4.33(s,j＝12.0hz,1h),2.25–2.23(m,1h),2.15(s,3h),1.98(m,2h),1.58–1.54(m,1h),1.37(s,3h),1.22(s,3h).13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ184.47,175.34,166.75,164.73,162.86,158.83,149.58,141.09,139.22,138.69,137.08,136.76,135.34,133.67,131.09,130.34,129.05,126.33,122.01,121.19,119.28,117.76,62.07,39.67,35.66,33.09,32.98,29.78,29.09,24.55,8.47.hrms:c30h25cln3o6s2 for[m+h]+,calculated 666.03534,found 666.03552.m.p.136～137℃.[0166]实施例24[0167]化合物t24的制备：[0168][0169]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、3-溴苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t24(38mg，65％)。[0170]化合物t24：红色固体。1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.32(s,1h),7.78–7.70(m,3h),7.46(t,j＝7.7hz,1h),7.37(t,j＝7.8hz,1h),7.25(s,1h),6.43(d,j＝3.2hz,1h),4.20–3.91(dd,j＝12.0,16.2hz,2h),2.25(d,j＝7.4hz,3h),2.13(s,1h),1.76–1.61(m,2h),1.58–1.52(m,1h),1.33(s,3h),1.25(s,3h).[0171]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ188.91,178.82,175.41,172.33,169.87,159.64,155.43,150.05,141.73,136.41,134.16,133.26,131.91,131.53,130.51,130.04,128.91,128.71,127.16,123.12,122.75,122.55,68.95,46.83,34.99,31.97,30.98,28.78,24.44,8.68.hrms:c30h25brn3o6s2 for[m+h]+,calculated 666.03681,found 666.03552.m.p.122～124℃.实施例25[0172]化合物t25的制备：[0173][0174]向化合物t3(0.1mmol)的dcm(3ml)溶液中，依次加入三乙胺(0.2mmol)、4-溴苯甲酰氯(0.1mmol)，加完后抽换气(n2)，然后室温条件下反应2小时。反应完毕后，加水(10ml)稀释，dcm萃取三次(3ⅹ8ml)，然后依次用饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离，乙醇重结晶，得化合物t25(38mg，65％)。[0175]化合物t25：红色固体。[0176]1h nmr(600mhz,chloroform-d)δ8.03(d,j＝8.5hz,2h),7.64(d,j＝8.7hz,2h),7.60(dd,j＝20.2,3.5hz,2h),7.05(s,1h),6.47(d,j＝3.4hz,1h),4.09(d,j＝15.9hz,1h),4.01(d,j＝16.0hz,1h),2.23(s,1h),2.05(d,j＝3.3hz,3h),1.93(d,j＝14.3hz,1h),1.87(d,j＝13.2hz,1h),1.51(d,j＝14.2hz,1h),1.31(s,3h),1.21(s,3h).[0177]13c nmr(151mhz,chloroform-d)δ182.30,174.47,166.72,165.01,164.38,161.77,160.81,158.82,150.59,141.70,136.62,134.20,132.19,131.64,130.38,129.37,128.78,128.35,126.55,123.23,121.33,120.18,69.14,35.49,34.71,31.97,31.39,29.75,24.50,8.67.hrms:c30h25brn3o6s2 for[m+h]+,calculated 666.03681,found 666.03522.m.p.136～137℃.[0178]应用例1丹参酮iia衍生物的心肌细胞保护活性评价[0179]一、实验目的[0180]利用cck-8试剂法检测丹参酮iia及其衍生物在对h9c2心肌细胞的毒性，建立h9c2心肌细胞h2o2氧化应激损伤模型，检测丹参酮iia衍生物对心肌细胞活性的影响，对其心肌细胞保护活性进行初步评价。[0181]二、实验方法[0182]1.细胞培养及衍生物对h9c2心肌细胞的毒性检测[0183]将h9c2心肌细胞在含胎牛血清(10％)的dmem培养基中培养，在co2培养箱(5％co2,95％相对湿度)37℃下培养。利用cck-8试剂检测丹参酮iia及其衍生物在1μm、5μm和10μm时对h9c2心肌细胞的毒性，结果如表1所示。[0184]表1丹参酮iia对正常心肌细胞的毒性(n＝3)[0185][0186][0187]续表[0188][0189][0190]续表[0191][0192][0193]注：与正常组对比，**p《0.05，**p《0.01[0194]由表1所示数据可以看出，大部分丹参酮iia衍生物在浓度为5μm和10μm时，其心肌细胞活力均明显下降(p《0.01)，而在浓度为1μm时，所有丹参酮iia衍生物对心肌细胞活力均无明显影响(p》0.05)，证明在该浓度下，丹参酮iia衍生物没有细胞毒性。因此活性实验浓度选用1μm。[0195]2.h9c2心肌细胞h2o2氧化应激模型的建立[0196]在培养皿中培养h9c2细胞，显微镜下观察细胞状态良好，并且细胞数量达到80％以上时，采用血球计数板进行细胞计数，调整细胞浓度，以5×103个/孔接种于96孔板。培养24h后，弃掉原培养基，加入浓度为300μm的h2o2培养基200μl，在37℃的培养箱中培养1h。观察细胞形态，若发生细胞皱缩、折光率减小及细胞空泡化，说明h9c2心肌细胞h2o2氧化应激模型建立成功。[0197]3.细胞活力测定[0198]于96孔板中培养细胞24h后，建立心肌细胞h2o2氧化应激模型，1h后加入丹参酮iia及其衍生物的样品溶液，再培养24h，随后弃掉原培养基，在各孔中分别加入200μl cck-8溶液，摇匀后37℃培养箱孵育4h，450nm下检测各孔吸光度，按给药心肌细胞与正常心肌细胞吸光度的比值来计算相对心肌细胞活力。[0199]4、实验分组[0200](1)空白组：正常培养的h9c2心肌细胞。[0201](2)模型组：200μl300μm的h2o2溶液处理正常培养的h9c2心肌细胞。[0202](3)丹参酮iia组：造模1h后，给药时加入含有丹参酮iia的1μm的完全培养基。[0203](4)样品组：造模1h后，给药时分别加入含有各个丹参酮iia衍生物的1μm完全培养基。[0204]三、实验结果[0205]采用graphpad prism 8软件进行数据分析，多组间采用单因素方差分析(one-wayanova)，两组间比较采用t检验。p《0.05表示实验数据具有统计学差异。[0206]表1丹参酮iia对正常心肌细胞的毒性(n＝3)[0207][0208]注：与正常组对比，**p《0.01；与模型组对比，#p《0.05，##p《0.01[0209]由表2所示数据可以看出，相对于正常细胞，模型组相对心肌细胞活力明显下降，约为空白组的55.3％(p《0.01)，说明h2o2氧化应激模型成功建立。相对于模型组来说，丹参酮iia组在浓度为1μm时，受损细胞活力得到提升，相对心肌细胞活力约为空白组的77.8％(p《0.05)，说明丹参酮iia本身具有一定的心肌细胞保护作用。相应的，除化合物t3、t5、t8和t4外，其余丹参酮iia在浓度为1μm时的相对心肌细胞活力均在55％以上(p《0.05)，说明这些化合物均能提升受损心肌细胞活力。其中，化合物t9在浓度1μm时的相对心肌细胞活力约为80.1％(p《0.01)，化合物t10在浓度1μm时的相对心肌细胞活力约为84.5％(p《0.01)，t16在浓度为1μm时的相对心肌细胞活力约为82.2％(p《0.01)，相比于丹参酮iia来说，三个化合物的心肌保护活性均得到显著提升。[0210]应用例2丹参酮iia衍生物对大鼠离体胸主动脉血管环舒缩调控作用研究[0211]一、实验目的[0212]采用离体血管灌流技术，利用生物能量信号采集系统检测血管环张力变化，用去甲肾上腺素预收缩后的大鼠离体胸主动脉血管环筛选出对血管具有显著舒张活性的衍生物。[0213]二、实验方法[0214]1.药液配置[0215]丹参酮iia衍生物样品准确称量，用dmso将其溶解，配置成实验所需浓度。同时将重酒石酸去甲肾上腺素(ne)和硝普钠也配置成实验所需浓度。k-h液(krebs-henseleit)：118mmol/l氯化钠、4.7mmol/l氯化钾、2.5mmol/l氯化钙、1.2mmol/l磷酸二氢钠、1.2mmol/l硫酸镁、25mmol/l碳酸氢钠、10mmol/l葡萄糖，p h 7.4，于4℃保存备用。[0216]2.离体大鼠胸主动脉血管环的制备[0217]sd大鼠脱颈处死后，迅速打开胸腔，取出胸主动脉后立即放入4℃预氧饱和的k-h液中，清洗血管并剥离血管周围的结缔组织和脂肪组织，分割为长度3～5mm的血管环。随后，将血管环一端悬挂于盛有7ml k-h溶液并持续通入95％o2和5％co2的(37.0±0.5)℃恒温浴槽中，另一端与肌肉张力换能器相连，经多道生理信号采集分析系统传入计算机内，记录血管环的收缩舒张状态。血管环在无张力的状态下平衡15min，之后调节基础张力为0.75g平衡20min，再调节基础张力为1.5g平衡60min，期间每15分钟更换1次k-h溶液。spf级sd雄性大鼠，200-300g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，动物许可证号：no.scxk(辽)2020-0001。实验期间，动物可自由进食进水。[0218]3.血管环内皮功能完整性的检测[0219]待张力稳定后，向槽内加入ne，使其浓度达到1×10-6mol/l，刺激血管环使其收缩；达到最大收缩张力且稳定后再次加入硝普钠，图2为去甲肾上腺素引起的血管环收缩的舒张变化图，使其浓度达到1×10-5mol/l，观察数值的变化，并计算血管环舒张幅度，最大收缩值与加硝普钠后的舒张值的差值/最大收缩值与基础张力值的差值之比》70％，表明血管环活性良好，可以进行下一步的实验；若舒张幅度＜70％，说明血管环内皮损伤程度较大，则弃去血管环。[0220]4.丹参酮ⅱa衍生物对大鼠胸主动脉血管环的作用研究[0221]经过上一步血管环的筛选，选出内皮较为完整的血管环后，更换浴槽内的k-h液，冲洗刺激，更换几次后，最后一次将浴槽定容至7ml。待血管环再一次稳定后，再次加入ne，使其浓度达到1×10-6mol/l，刺激血管收缩，达到最大收缩张力值且稳定后分别加入丹参酮iia衍生物溶液，使丹参酮iia衍生物溶液的浓度达到2×10-5mol/l，待张力值稳定后记录数据，并计算衍生物的舒张率。将去甲肾上腺素诱导收缩平衡后的张力记为tne，加入衍生物后的张力记为tx。[0222]大鼠胸主动脉舒张率＝(tne-tx)/tne[0223]5.实验分组[0224](1)丹参酮iia衍生物组：2×10-5mol/l的丹参酮iia衍生物对1×10-6mol/l的ne预刺激胸主动脉血管环收缩后的作用研究。[0225](2)空白对照组：以dmso代替丹参酮iia衍生物等量加入。[0226](3)丹参酮iia组：2×10-5mol/l的丹参酮iia对1×10-6mol/l的ne预刺激的胸主动脉血管环收缩后的作用研究。[0227]三、实验结果[0228]采用spss 21.0软件对数据进行处理和分析。实验数据均以血管环收缩幅度变化相对值的百分比(％)来表示，平均值±标准差为检验结果，多组间比较采用单因素方差分析，组间差异采用t检验分析。[0229]丹参酮iia衍生物以及丹参酮iia在2×10-5mol/l浓度下对去甲肾上腺素引起大鼠胸主动脉血管环收缩的舒张作用如表4.1所示。[0230]表4.1 2×10-5mol/l浓度的丹参酮iia及其衍生物对ne引起血管环收缩的舒张作用[0231][0232][0233]由表4.1所列结果可以看出，相比于丹参酮iia，化合物t7，t13，t15，t19在浓度为2×10-5mol/l时对ne引起大鼠胸主动脉血管环收缩的舒张作用得到提升。[0234]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。









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