一种板栗龙眼黄酒多糖在制备降糖药物中的应用 专利技术说明

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术1.本发明涉及降糖药物技术领域，尤其涉及一种新板栗龙眼黄酒多糖在制备降糖药物中的应用。背景技术：2.近年来，随着食品营养和预防疾病之间的关系越来越受到学者和消费者的关注，人们对富含高营养食品的需求正在迅速增长。人所共知，发酵是一种能够改善食品营养价值的现代生物工程技术。在中国膳食养生文化发展进程中，发酵食品以其突出的感官、营养和保健价值，占据了极其重要的地位。黄酒以其丰富的营养、适宜的口味和独特的香气已经在我国流行了至少四千多年，也是享誉世界的历史最悠久的著名酒饮之一。虽然黄酒传统一般由糯米酿制，但近代研究已表明，采用一些药食同源的食品原料，例如莲藕、铁皮石斛和山茱萸等，均可成功酿造新型黄酒。3.板栗在植物学分类上属山毛榉科(壳科)栗属，龙眼又称桂圆，无患子科龙眼属植物，两者均在中国被广泛种植，且有两千多年的历史。中国板栗和龙眼因其两者丰富的营养和良好的感官品质而倍受推崇。我国是世界上最大的板栗和龙眼生产国，仅在2017年，中国板栗和龙眼总产量分别占世界总产量的83.3％和59％。板栗和龙眼鲜果的基本营养成分如下：水分(52.0％和83.5％)、碳水化合物(42.2％和15.1％)、蛋白质(4.2％和1.3％)、脂肪(0.7％和0.1％)，此外两者还含有黄酮、多酚以及多糖等生物活性成分，这些成分对保持人体健康具有重要作用，如预防糖尿病、抗氧化、抑制肿瘤增殖和免疫调节等。因此，如何高效利用板栗和龙眼中的营养成分，开发其高附加值加工产品，已成为板栗和龙眼深加工亟需解决的关键问题和研究重点之一。4.尽管板栗和龙眼营养价值很高，但目前两者在食品加工业中的应用依然有限。绝大多数关于板栗和龙眼生物活性物质的研究仍然是聚焦于两者生物活性成分的提取和保健功能方面，而忽视了两者在加工成食品后，其生物活性成分的保健作用。多糖，是由10个以上的相同或不同的单糖组成的具有较强功能活性的生物大分子，其结构复杂多变，并具有抗衰老、抗氧化、抗溃疡，调节身体免疫力等多种作用。因此，本技术以板栗和龙眼作为营养强化剂应用于黄酒酿造，对其多糖进行分离纯化，并对其纯化后组分进行成分分析和降血糖功能活性的测定。技术实现要素：5.本发明的目的在于提供一种板栗龙眼黄酒多糖在制备降糖药物中的应用。6.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：7.本发明提供了一种板栗龙眼黄酒多糖在制备降糖药物中的应用。8.优选的，所述板栗龙眼黄酒多糖的制备方法包括如下步骤：9.(1)将板栗仁、龙眼果肉与浸泡11～13h后的糯米混合蒸煮40～60min；10.(2)在步骤(1)蒸煮后的物料淋饭冷却至25～30℃后，拌入活化好的红曲和小曲，然后依次进行搭窝培菌、冲缸、发酵、过滤、灭菌、陈酿处理，得到板栗龙眼黄酒；11.(3)所述板栗龙眼黄酒经减压浓缩、醇沉后，得到板栗龙眼黄酒粗多糖；12.(4)所述板栗龙眼黄酒粗多糖经除蛋白、透析、分级纯化后，得到板栗龙眼黄酒多糖。13.优选的，所述板栗仁、龙眼果肉与糯米的质量比为23～27:3～5:68～77。14.优选的，所述小曲的添加量为板栗仁、龙眼果肉与糯米总质量的0.8～1.0％，所述红曲的添加量为板栗仁、龙眼果肉与糯米总质量的11～15％。15.优选的，所述搭窝培菌的温度为20～25℃，时间为3～5天。16.优选的，所述发酵的温度为18～24℃，发酵时间为6～8天。17.优选的，步骤(3)中所述减压浓缩至原体积的1/3～1/4，所述减压浓缩的温度为45～55℃。18.优选的，所述醇沉先加入减压浓缩后板栗龙眼黄酒体积2～3倍的90～95％的乙醇溶液，2～4℃醇沉10～14h，取上清液，再添加所述上清液体积3～5倍体积的无水乙醇，在2～4℃醇沉18～19h。19.优选的，所述透析用透析袋的分子量为3800～4200ku，所述透析的时间为46～50h；所述分级纯化采用超滤系统进行，所述超滤系统使用100ku的超滤膜。20.优选的，所述板栗龙眼黄酒多糖的分子量小于100ku。21.本发明在蒸制好的板栗、龙眼、糯米中接种小曲、红曲搭窝培菌后混合发酵，再经过滤、灭菌、装瓶、陈酿得到板栗龙眼黄酒；将得到的黄酒减压浓缩、醇沉、除蛋白、透析、分级纯化得到分子量小于100ku的板栗龙眼黄酒多糖。体内外降糖活性测定结果表明，本技术提供的板栗龙眼黄酒多糖能够减缓t2dm体质量的负增长、降低其空腹血糖值、提高其糖耐水平和肝糖原的合成能力、促进其胰岛素和丙酮酸激酶的分泌，能够作为降糖药物使用。22.多糖的生物活性不仅与提取、纯化方法和结构多样性有关，而且受多糖的分子量、分枝程度(db)、单糖的类型、多糖的分子间关联、糖苷分枝和多糖的修饰等化学特性的影响。在板栗龙眼黄酒多糖中含有较高的半乳糖(40.46％)、甘露糖(18.94％)、葡萄糖(11.46％)和阿拉伯糖(9.35％)。除此之外，还存在少量的鼠李糖、半乳糖醛酸和葡糖糖醛酸。还具有少量岩藻糖，含量为2.44％，且迄今为止，在黄酒多糖、鲜板栗和鲜龙眼多糖中还未发现本技术的多糖。附图说明23.图1为实施例4中实验第0天时各组小鼠的空腹血糖值；24.图2为实施例4中实验第20天时各组小鼠的空腹血糖值；25.图3为实施例4中实验第19天测定的的小鼠血糖水平；26.图4为实施例4中计算的血糖曲线下面积；27.图5为实施例4中正常小鼠(a)、蒸馏水对照(b)、盐酸二甲双胍阳性对照(c)以及不同板栗龙眼黄酒多糖处理后小鼠胰岛素水平28.图6为实施例4中正常小鼠(a)、蒸馏水对照(b)、盐酸二甲双胍阳性对照(c)以及不同板栗龙眼黄酒多糖处理后肝糖原含量；29.图7为实施例4中正常小鼠(a)、蒸馏水对照(b)、盐酸二甲双胍阳性对照(c)以及不同板栗龙眼黄酒多糖处理后丙酮酸激酶的含量。具体实施方式30.本发明提供了一种板栗龙眼黄酒多糖在制备降糖药物中的应用。31.在本发明中，所述板栗龙眼黄酒多糖的制备方法包括如下步骤：32.(1)将板栗仁、龙眼果肉与浸泡11～13h后的糯米混合蒸煮40～60min；33.(2)在步骤(1)蒸煮后的物料淋饭冷却至25～30℃后，拌入活化好的红曲和小曲，然后依次进行搭窝培菌、冲缸、发酵、过滤、灭菌、陈酿处理，得到板栗龙眼黄酒；34.(3)所述板栗龙眼黄酒经减压浓缩、醇沉后，得到板栗龙眼黄酒粗多糖；35.(4)所述板栗龙眼黄酒粗多糖经除蛋白、透析、分级纯化后，得到板栗龙眼黄酒多糖。36.在制备板栗龙眼黄酒多糖时，本发明将板栗仁、龙眼果肉与浸泡11～13h后的糯米混合蒸煮40～60min。37.在本发明中，所述板栗仁为切碎的板栗仁。38.在本发明中，所述龙眼果肉也经过切碎处理。39.在本发明中，所述板栗仁、龙眼果肉与糯米的质量比为23～27:3～5:68～77，优选为25:4:71。40.在本发明中，所述混合蒸煮的时间优选为50min。41.进一步，本发明在蒸煮后的物料淋饭冷却至25～30℃后，拌入活化好的红曲和小曲，然后依次进行搭窝培菌、冲缸、发酵、过滤、灭菌、装瓶，陈酿处理，得到板栗龙眼黄酒；42.在本发明中，所述小曲购自湖南华伟铭化可以有限公司；所述红曲购自浙江丽水生物科技公司。43.在本发明中，所述小曲的添加量为板栗仁、龙眼果肉与糯米总质量的0.8～1.0％，优选为0.9％。44.在本发明中，所述红曲的添加量为板栗仁、龙眼果肉与糯米总质量的11～15％，优选为13％。45.在本发明中，所述活化的温度优选为21～24℃，进一步优选为22℃；所述活化的时间1.5h。46.在本发明中，所述搭窝培菌在砂罐中进行，所述砂罐在使用前优选用酒精擦拭内壁和罐盖，然后将加入红曲和小曲的物料加入到砂罐中，并用无菌纱布覆盖，所述搭窝培菌的目的是使物料糖化。47.在本发明中，所述搭窝培菌的温度为20～25℃，优选为22℃；时间为3～5天，优选为4天。48.在本发明中，为了降低酒酿中的糖分和渗透压，促进菌体繁殖，搭窝培菌后进行冲缸，所述冲缸方法为：在砂罐中加入发酵前原料体积1.5倍的清水进行冲缸。49.在本发明中，所述发酵的温度为18～24℃，优选为21℃；发酵时间为6～8天，优选为8天。在发酵过程中优选每6h搅拌一次。50.在本发明中，所述过滤优选采用无菌纱布和脱脂棉进行粗滤，再用砂芯漏斗进行精滤。51.在本发明中，所述灭菌优选为巴氏杀菌。52.在本发明中，陈酿优选在17℃的环境中。53.制备得到板栗龙眼黄酒后，将所述板栗龙眼黄酒经减压浓缩、醇沉后，得到板栗龙眼黄酒粗多糖。54.在本发明中，所述减压浓缩为浓缩至原体积的1/3～1/4，优选为1/3；所述减压浓缩的温度为45～55℃，优选为50℃。55.在本发明中，所述醇沉先加入减压浓缩后板栗龙眼黄酒体积2～3倍的90～95％的乙醇溶液，2～4℃醇沉10～14h；优选为2.5倍体积的95％的乙醇溶液，4℃醇沉12h；取上清液，再添加所述上清液体积3～5倍体积的无水乙醇，在2～4℃醇沉18～19h，优选为4倍体积的无水乙醇，在4℃醇沉18.5h。离心收集沉淀，得到板栗龙眼黄酒多糖。56.所述板栗龙眼黄酒粗多糖经除蛋白、透析、分级纯化后，得到板栗龙眼黄酒多糖。57.在本发明中，将所述板栗龙眼黄酒多糖用蒸馏水复溶得到板栗龙眼黄酒多糖水溶液后用于除蛋白。58.在本发明中，所述除蛋白方法为：按照粗多糖水溶液与sevage试剂5：1的体积混合，充分震荡后静止10min。用分液漏斗除去下层的有机相和中间层的变性蛋白，并收集上层液体。重复上述步骤，直至液面交界处无变性蛋白，收集上层液体备用。59.在本发明中，所述透析方法为：将除去蛋白质的板栗龙眼黄酒粗多糖水溶液采用第(1)步的方法再次减压浓缩，除去残留的sevage试剂和水分。将浓缩后的板栗龙眼黄酒粗多糖水溶液装入4000ku的透析袋(美国viskase公司)中，配合磁力搅拌器，用蒸馏水透析46～50h，优选为48h，每隔6h换一次水，除去其中的无机盐和小分子等。最后将水溶液减压浓缩，冷冻干燥，得板栗龙眼黄酒多糖(clwp)。60.在本发明中，所述分级纯化采用超滤系统进行，所述超滤系统使用100ku的超滤膜。61.在本发明中，所述板栗龙眼黄酒多糖的分子量小于100ku。62.下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。63.实施例164.板栗龙眼黄酒多糖的制备65.将250g板栗仁、40g龙眼果肉与710g浸泡12h后的糯米混合蒸煮50min；蒸煮后的物料淋饭冷却至25℃后，拌入22℃温水活化1.5h后的红曲130g和小曲9g，搅拌均匀。将搅拌均匀的混合物放进砂罐中搭窝，先用酒精擦拭砂罐内壁和罐盖，再加入物料，然后用无菌纱布覆盖，在22℃的恒温条件下培菌4d后，加入发酵前原料体积1.5倍的清水进行冲缸。冲缸完成后在21℃条件下发酵8d，期间每6h搅拌一次。66.将发酵完成后的板栗龙眼糯米黄酒用无菌纱布和脱脂棉进行粗滤，再用砂芯漏斗进行精滤。精滤好的板栗龙眼糯米黄酒进行巴氏杀菌，冷却后装入经过高温杀菌的陶瓷瓶中，并放置在17℃的环境中进行陈酿，得到板栗龙眼糯米黄酒成品。67.实施例268.板栗龙眼黄酒多糖的提取和分离69.(1)减压浓缩、醇沉70.将实施例1制备的板栗龙眼糯米黄酒在50℃下减压浓缩至原体积的1/3后，添加2.5倍浓缩后黄酒体积的95％乙醇，4℃醇沉12h，取上清液再添加上清液4倍体积的无水乙醇后充分搅拌，4℃醇沉18.5h，醇沉后，5000r/min，离心15min，离心后收集沉淀，加沉淀3倍体积的蒸馏水复溶得板栗龙眼黄酒粗多糖水溶液。71.(2)除蛋白72.按照粗多糖水溶液与sevage试剂5：1的体积混合，充分震荡后静止10min。用分液漏斗除去下层的有机相和中间层的变性蛋白，并收集上层液体。重复上述步骤，直至液面交界处无变性蛋白，收集上层液体备用。73.(3)透析74.将除去蛋白质的板栗龙眼黄酒粗多糖水溶液采用第(1)步的方法再次减压浓缩(50℃，浓缩至原体积的1/3)，除去残留的sevage试剂和水分。将浓缩后的板栗龙眼黄酒粗多糖水溶液装入4000ku的透析袋(美国viskase公司)中，配合磁力搅拌器，用蒸馏水透析48h，每隔6h换一次水，除去其中的无机盐和小分子等。最后将水溶液减压浓缩，-40℃真空冷冻干燥机(fd-1-50，山东明投机械有限公司)中预冻30min后，干燥2h，得板栗龙眼黄酒多糖(clwp)。75.(4)分级纯化76.精确称取3.00g板栗龙眼黄酒多糖(clwp)充分溶于300ml的超纯水中，并将多糖水溶液通过0.22μm的滤膜(上海市斯亚净化器件厂)进行抽滤，备用。用0.5mol/l的氢氧化钠溶液以200r/min的泵速对超滤系统润滑并清洗20min，再用150ml的超纯水以同样的转速对超滤系统进行清洗，再将抽滤过的多糖水溶液通过超滤系统进行纯化。超滤系统使用100ku(美国颇尔公司)分子量的膜，将多糖水溶液截留为》100ku和《100ku两种分子量的溶液，并命名为clwp-1(》100ku)和clwp-2(《100ku)。将4倍体积的无水乙醇加入到两种溶液中，置于4℃的环境中醇沉24h，收集沉淀按1:1的比例溶于超纯水中，-40℃真空冷冻干燥机(fd-1-50，山东明投机械有限公司)中预冻30min后，干燥2h，干燥后保存备用。77.实施例378.板栗龙眼黄酒多糖中单糖的组成成分测定79.分别取实施例2分离的两种多糖样品10mg用5ml 2mol/l三氟乙酸在95℃水解5h后用n2在105℃下干燥5h。将干燥后的两种样品用甲醇进行洗涤，提取物在n2气流中干燥。用2ml蒸馏水重新配制clwp-1和clwp-2干样品以及单糖标准品(美国sigma-aldrich公司)，并精密吸取5μl样品和单糖标准品，同时注入气相色谱中。80.色谱条件：采用dionextm carbopactm pa10(6890n-5975b气相色谱质谱联用仪)(250mm×4.0mm，10μm)分析柱；进样量为5μl。流动相a(0.1mnaoh)，流动相b(0.1m naoh，0.2m naac)，流速0.1ml/min；柱温为25℃；洗脱梯度：0mina相/b相(95:5，v/v)，30mina相/b相(80:20，v/v)，30.1mina相/b相(60:40，v/v)，45mina相/b相(60:40，v/v)，45.1mina相/b相(95:5，v/v)，60mina相/b相(95:5，v/v)。81.表1 clwp中的单糖组成成分82.单糖clwp-1clwp-2半乳糖(％)43.2840.46甘露糖(％)18.8118.94葡萄糖(％)12.5311.46阿拉伯糖(％)8.589.35木糖(％)8.968.14岩藻糖(％)-2.44鼠李糖3.133.37半乳糖醛酸(％)4.375.14葡萄糖醛酸(％)0.340.7083.多糖的单糖组成对多糖的结构和活性具有重要影响。为了阐明clwp的单糖组成，选用离子色谱法测定了clwp-1和clwp-2的单糖组成和相对含量。由表1可知，clwp-1和clwp-2共由9种单糖组成，包括半乳糖、甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸。clwp-1和clwp-2中最主要的单糖成分为半乳糖，含量分别为43.28％和40.46％，其次为甘露糖，含量分别为18.81％和18.94％。与现有的传统糯米黄酒多糖中的单糖成分相比，半乳糖含量约为传统糯米黄酒的20倍，甘露糖含量约为传统糯米黄酒的6倍。与新鲜板栗中单糖成分相比，板栗龙眼黄酒中半乳糖和甘露糖的含量分别是前者的2.2～11.5倍和7.6～10.2倍。与干龙眼和鲜龙眼多糖中的单糖组分相比，板栗龙眼黄酒中半乳糖和甘露糖的含量是干龙眼多糖的3.4和1.4倍；板栗龙眼黄酒中甘露糖的含量是鲜龙眼多糖的0.5倍(鲜龙眼多糖中不含半乳糖)。除此以外，在clwp-1和clwp-2中发现还存在少量的鼠李糖、半乳糖醛酸和葡糖糖醛酸，含量分别为3.13％和3.37％、4.37％和5.14％、0.34％和0.70％。且在clwp-2中发现少量的岩藻糖，含量为2.44％，且迄今为止，在黄酒多糖、鲜板栗和鲜龙眼多糖中还未发现本技术的多糖。84.实施例485.建立四氧嘧啶诱导t2dm模型86.选取70只小鼠(spf级雄性昆明小鼠，8周龄：常州卡文斯实验动物有限公司)，适应性饲养5d，随机选取7只为正常对照组(a组)，禁食12h，测量空腹血糖，作为此次实验的基础血糖值。87.剩余63只小鼠建立t2dm模型：禁食不禁水12h，尾部静脉注射四氧嘧啶(sigma，a7413)80mg/kg，间隔24h后腹腔注射四氧嘧啶100mg/kg，为了避免药物在成模前引起的动物低血糖相及其可能对小鼠造成的应激性损害，每次注射给药后3h灌胃质量分数为50％葡萄糖，0.5ml/只。末次给药72h后，禁食(不禁水)10h，断尾取血，测空腹血糖值。fbg》11.1mmol/l，并出现多饮、多食、多尿者，判定为建模成功。88.分组及给药89.选取56只t2dm小鼠随机分为8组，分别设置为糖尿病模型组(b组)每天按0.1ml/kg灌胃蒸馏水，阳性对照组(c组)每天按50mg/kg灌胃盐酸二甲双胍；clwp-1分为低、中、高剂量组(clwp-1l、clwp-1m、clwp-1h)每天分别按50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg灌胃；clwp-2分为低、中、高剂量组(clwp-2l、clwp-2m、clwp-2h)每天分别按50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg灌胃；a组每天按0.1ml/kg灌胃蒸馏水。小鼠分笼饲养，每天按剂量给药一次，自由进食，饮水，实验期为20d。90.(1)体重及空腹血糖的测定91.在5，10，15，20d的时候定时在禁食3h，灌胃5h后进行尾部静脉采血，测量体重(结果见表2)和空腹血糖(结果见图1、2)，观察其形态，并进行取材进行后续检测。92.表2clwp对t2dm小鼠体重的影响(x±s，n＝7)[0093][0094][0095]注：上标小写字母不同表示存在显著差异，p《0.05。[0096]由表2可知，实验前，各组造模小鼠体重均低于a组小鼠体重，说明t2dm造模成功。持续灌胃20d后，b组小鼠体重明显低于clwp各给药小组小鼠体重，clwp-2各剂量间效果显著(p《0.05)，呈剂量依赖性，clwp-2h组小鼠体重与c组小鼠体重的增重比接近。表明clwp可有效缓解t2dm体重减轻的症状，且同剂量下，clwp-2缓解t2dm体重减轻的效果显著优于clwp-1(p《0.05)。[0097]图1为第0天时各组小鼠的空腹血糖值，图2为第20天时各组小鼠的空腹血糖值。如图1所示，实验开始时，各组t2dm的空腹血糖值均显著高于a组(p《0.05)，且空腹血糖值大于11.1mmol/l，说明t2dm造模成功。如图2所示，实验结束后，各组糖尿病小鼠的空腹血糖值依然显著高于a组(p《0.05)；clwp各给药小组小鼠的空腹血糖值均低于b组，clwp-1l组小鼠的空腹血糖值显著高于c组小鼠的空腹血糖值(p《0.05)，其余各组小鼠的空腹血糖值与c组小鼠的空腹血糖值相近，以上结果表明，clwp能有效降低t2dm的空腹血糖值。[0098](2)口服葡萄糖耐量的测定[0099]在实验的第19d，小鼠禁食6h后，尾部采血测定小鼠0min，30min，60min，90min，120min的血糖值，并使用graphpad prismversion 9.0计算血糖曲线下面积(auc)。结果如图3、4所示。[0100]由图3可知，各组小鼠口服葡萄糖后，在30min时均达到血糖最大值，随后血糖水平开始下降，在120min后，基本恢复到口服葡萄糖前的血糖水平。a组血糖值低于各组糖尿病小鼠，给药各组的血糖值均低于b组。由图4可知，a组小鼠auc显著低于各组糖尿病小鼠的auc(p《0.05)，clwp各给药小组小鼠auc均低于b组小鼠auc，clwp-1和clwp-2各剂量间效果差异显著(p《0.05)，呈剂量依赖性，clwp-2h组小鼠auc与c组小鼠auc基本一致。表明clwp可有效改善t2dm的葡萄糖耐量。[0101](3)血清胰岛素的测定[0102]实验末，小鼠动脉采血，室温静置30min，4℃冷藏2h，离心分离血清，试剂盒(mouse insulin elisa试剂盒：cusabio，csb-e05071m)测定胰岛素水平，如图5a所示。[0103]胰岛素是体内唯一可降低血糖的激素，在维持血糖平衡中发挥了重要作用。当体内血糖升高时，会加快胰岛素与其受体结合的速度，使葡萄糖进入细胞，加速糖原合成，达到降低血糖水平的目的。由图5可知，a组小鼠的血清胰岛素含量显著高于其他各组糖尿病小鼠(p《0.05)，说明糖尿病可以抑制小鼠体内胰岛素的分泌；clwp各给药小组小鼠的血清胰岛素含量均高于b组小鼠的血清胰岛素含量，clwp-1和clwp-2各剂量间效果差异显著(p《0.05)，呈剂量依赖性，clwp-2h组小鼠血清胰岛素含量与c组小鼠血清胰岛素含量基本一致。表明clwp可有效促进t2dm的血清胰岛素分泌，同剂量下，clwp-2提高t2dm分泌血清胰岛素的效果明显优于clwp-1(p《0.05)。[0104](4)肝糖原含量和丙酮酸激酶含量的测定[0105]按照试剂盒方法进行检测，肝糖原(glycogen colorimetric/fluorometric assay kit：biovision，k646-100)，结果如图6所示；丙酮酸激酶(丙酮酸激酶试剂盒：南京建成，a076-1-1)，结果如图7所示；[0106]肝糖原作为血糖缓冲液，在血糖浓度升高时合成，并在餐间分解为葡萄糖以维持体内血糖稳态。由图6可知，a组小鼠的肝糖原含量显著高于其他各组糖尿病小鼠(p《0.05)，说明糖尿病可以抑制小鼠肝糖原的合成；clwp各给药小组小鼠的肝糖原含量含量均高于b组小鼠的肝糖原含量，clwp-1各剂量间效果差异显著(p《0.05)，呈剂量依赖性，clwp-2h组小鼠的肝糖原含量和c组小鼠的肝糖原含量基本一致，表明clwp可有效提高t2dm肝糖原的合成能力，同剂量下，clwp-2提高t2dm肝糖原的合成能力的效果优于clwp-1，但差异不显著(p》0.05)。[0107]丙酮酸激酶不仅可以促进的胰岛素分泌还能抑制糖异生途径，改善体内葡萄糖稳态。由图7可知，a组小鼠的丙酮酸激酶含量显著高于其他各组糖尿病小鼠(p《0.05)，说明糖尿病可以抑制小鼠体内丙酮酸激酶的分泌；clwp各给药小组小鼠的丙酮酸激酶含量均高于b组小鼠的丙酮酸激酶含量，clwp-1各剂量间效果差异显著(p《0.05)，呈剂量依赖性，clwp-2h组小鼠体内分泌的丙酮酸激酶含量与c组含量接近，表明clwp可有效提高t2dm小鼠体内丙酮酸激酶的分泌，同剂量下，clwp-2提高t2dm体内丙酮酸激酶分泌的效果明显优于clwp-1(p《0.05)。[0108]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。









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