一株高效乳化原油铜绿假单胞菌XJ-1及其应用的制作方法 专利技术说明

有机化合物处理,合成应用技术一株高效乳化原油铜绿假单胞菌xj-1及其应用技术领域1.本发明属于微生物生物技术和环境生物技术领域，具体涉及一株高效乳化原油铜绿假单胞菌xj-1及其在微生物采油中的应用。背景技术：2.微生物强化采油(micro-bial enhanced oil recovery,meor)是近年来在国内外发展迅速的一项提高原油采收率技术，是利用微生物在油藏中的生长代谢活动或其代谢产物来提高原油采收率的综合性技术。该技术驱油潜力大、综合成本低、采出液不需特殊处理，是一项经济有效、绿色环保的采油技术。实验室内研究和现场实验研究证实了利用微生物在油藏原位的代谢产生表面活性剂提高原油采收率是一项切实可行的微生物采油技术。其基本原理是：①细菌产生的表面活性物质、有机溶剂、有机酸、生物聚合物或生物气等，在油藏中作用于残余油可改变原油的流动性；②利用微生物的代谢过程中，直接改变原油性质，如降解原油部分组分，引起原油性质变化，使原油易于流动，以提高残余油的洗油效率，从而起到提高采收率的作用③细菌代谢产生的生物聚合物，能起到调堵地层大孔道的作用，改善地层渗流规律，扩大水驱波及体积。与其它三次采油技术相比，meor具有高效、经济、无二次污染不损伤油层等优点，是最具潜力的一项提高原油采收率的技术。3.期刊adv mat res，2010，93(94)：623-626报道了从城市下水道污泥中，筛选分离出一株可在厌氧条件下产鼠李糖脂表面活性剂的假单胞菌anbiosurf-1，期刊rscadv，2015，5(45):36044-36050报道了从新疆油田油藏采出液中筛选到了利用甘油能够厌氧合成鼠李糖脂的铜绿假单胞菌sg，但是菌株sg在厌氧条件下的鼠李糖脂产量仅为228mg/l。4.meor技术的核心是微生物菌种，驱油用微生物菌种的优良与否直接关系到微生物采油技术的效果好坏及成本高低。因此，获得优质、高效的驱油菌种对于微生物采油技术的应用十分必要。目前已获得的厌氧产表面活性剂微生物菌种资源有限，并且有些厌氧产表面活性剂菌种并非从油藏环境中分离得到，其对于油藏环境的适应性还有待进一步评价。微生物菌种在厌氧条件下的表面活性剂产量较低成为油藏原位产表面活性剂提高采收率技术的瓶颈。因此，筛选油藏本源的厌氧产表面活性剂的菌种资源，并提高其在厌氧条件下的表面活性剂产量，对于不依赖于空气注入的厌氧产表面活性剂提高原油采收率技术的研发和应用具有重要意义。技术实现要素：5.为克服以上技术问题，本发明提供了一种高效乳化原油铜绿假单胞菌xj-1菌株，该菌株能够利用廉价营养液产生鼠李糖脂，显著降低原油的粘度，对于油藏原位产表面活性剂提高原油采收率的技术具有重要的理论和应用价值。6.一方面，本发明提供一种菌株，该菌株的分类命名为铜绿假单胞菌xj-1；分类命名的拉丁文名称为pseudomonas aeruginosa xj-1，已于2021年8月23日，保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为cgmcc no.23170，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。7.分类体系：变形菌门，γ-变形菌纲，假单胞菌目，假单胞菌科，假单胞菌属，铜绿假单胞菌xj-1变形菌门，γ-变形菌纲，假单胞菌目，假单胞菌科，假单胞菌属，铜绿假单胞菌xj-1(bacteria；proteobacteria；gammaproteobacteria；pseudomonadales；pseudomonadaceae；pseudomonas；pseudomonas aeruginosa group；pseudomonas aeruginosa；pseudomonas aeruginosa xj-1bacteria；proteobacteria；gammaproteobacteria；pseudomonadales；pseudomonadaceae；pseudomonas；pseudomonas aeruginosa group；pseudomonas aeruginosa；pseudomonas aeruginosa xj-1)。8.另一方面，本发明还提供了铜绿假单胞菌xj-1菌株的分离方法。9.优选地，所述分离方法中的采样环境为：由石油区域采集油水样中分离得到，并以植物油为唯一碳源，在37℃-42℃筛选获得。10.优选地，所述石油区域为陆梁油田。11.优选地，所述分离方法中的培养基为无机盐植物油培养基和/或lb培养基。12.优选地，所述无机盐植物油培养基包含植物油、na2hpo4、kh2po4、nano3、feso4、mgso4、cacl2、酵母粉中的任意一种或多种。13.优选地，所述无机盐植物油培养基由植物油、na2hpo4、kh2po4、nano3、feso4、mgso4、cacl2、酵母粉和蒸馏水组成。14.优选地，按照重量百分数计，所述无机盐植物油培养基组分为：植物油3％-8％，na2hpo40.06％-0.08％，kh2po40.01％-0.03％，nano30.1％-0.3％，feso40.001％-0.003％，mgso40.02％-0.05％，cacl20.001％-0.003％，酵母粉0.001％-0.003％，其余为蒸馏水。15.优选地，所述无机盐植物油培养基组分为：大豆油50g，na2hpo40.6g，kh2po40.2g，nano32g，feso40.01g，mgso40.3g，cacl20.01g，酵母粉0.01g，蒸馏水1l。16.优选地，所述分离方法包括以下步骤：17.(1)将油水样接种至无机盐基础培养基中，进行培养；18.(2)将菌液涂布在lb平板上培养，得单菌落；19.(3)将单菌落落接种到lb培养基中，培养到对数期，得种子液a；20.(4)将种子液a接入发酵培养基中培养，得种子液b；21.(5)将种子液b接入无机盐植物油培养基，进行培养。22.(6)步骤(2)-(5)重复3-4次。23.优选地，步骤(4)中，所述发酵培养基组成为：糖蜜，玉米浆，nano3，地层水。24.优选地，按照重量百分数计，所述发酵培养基组分为：糖蜜2％-5％，玉米浆0.1％-0.5％，nano30.1％-0.5％，其余为地层水。25.优选地，所述发酵培养基组分为：糖蜜35g，玉米浆5g，nano32g，地层水1l。26.本发明还提供了所述的铜绿假单胞菌株在生产鼠李糖脂中的应用。27.本发明还提供了一种生产鼠李糖脂的产品，所述的产品包含所述的铜绿假单胞菌株xj-1；所述产品包含完整或不完整形式的微生物细胞、微生物发酵液、微生物冻干粉和固定化细胞中的任一种或多种。28.优选地，所述微生物发酵液的制备方法为：将xj-1菌株在lb斜面上划线培养，用无菌水将菌体洗下，将对数期的菌液作为种子液接入发酵培养基中，将所得发酵液作为种子液接入发酵培养基中进行培养，得xj-1菌株发酵液。29.优选地，所述微生物冻干粉的制备方法为：将发酵液浓缩后加入冻干保护剂，经真空冷冻干燥机冻干后，得冻干粉。30.优选地，所述固定化细胞的制备方法为：将所述xj-1菌株固定在水不溶性载体上，所述固定化的方法包括吸附法和包埋法；所述吸附法的载体包括硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金属丝网、微载体和中空纤维中的任一种或多种；所述包埋法包括凝胶包埋法和半透膜包埋法。31.本发明还提供了一种生产鼠李糖脂的方法，所述方法为使用所述的铜绿假单胞菌株xj-1以营养培养基、无机盐培养基、废蜜糖和地沟油中的任一种或多种为碳源发酵生产鼠李糖脂。32.本发明还提供了所述的铜绿假单胞菌株在石油开采和加工中的应用；33.本发明还提供了一种生产石油产品的制剂，所述的制剂包含所述的铜绿假单胞菌株xj-1；所述制剂包含完整或不完整形式的微生物细胞、微生物发酵液、微生物冻干粉和固定化细胞中的任一种或多种；所述的石油产品为石油燃料、石油溶剂与化工原料、润滑剂、石蜡、石油沥青或石油焦。34.本发明还提供了一种石油开采的方法，所述方法为将所述的铜绿假单胞菌株xj-1或所述生产石油产品的制剂注入油藏进行发酵培养，或将所述的铜绿假单胞菌株xj-1或所述生产石油产品的制剂的发酵培养产物注入油藏。35.本发明还提供了所述的铜绿假单胞菌株在原油降粘中的应用。36.本发明还提供了一种原油降粘制剂，所述的制剂包含所述的铜绿假单胞菌株xj-1；所述制剂包含完整或不完整形式的微生物细胞、微生物发酵液、微生物冻干粉和固定化细胞中的任一种或多种。37.本发明还提供了一种原油降粘的方法，所述方法为将所述的铜绿假单胞菌株xj-1或所述原油降粘制剂注入原油中发酵培养，或将所述的铜绿假单胞菌株xj-1或所述降粘制剂的发酵培养产物注入原油。38.本发明还提供了所述的铜绿假单胞菌株在原油乳化中的应用。39.本发明还提供了一种原油的乳化制剂，所述的制剂包含铜绿假单胞菌株xj-1；所述制剂包含完整或不完整形式的微生物细胞、微生物发酵液、微生物冻干粉和固定化细胞中的任一种或多种。40.本发明还提供了一种原油乳化的方法，所述方法为将所述的铜绿假单胞菌株xj-1或所述原油的乳化制剂注入原油中发酵培养，或将所述的铜绿假单胞菌株xj-1或所述原油的乳化制剂的发酵培养产物注入原油。41.本发明xj-1菌株的特性：42.1.形态特征43.xj-1菌株在lb平板上培养一天的菌落特征：菌落形态为浅褐色小菌落，表面凹状不透明，边缘整齐，无芽孢，如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长产生浅绿色水溶性色素。44.细胞形态特征：菌体呈短杆状，菌体的一端有单鞭毛，运动活泼，菌体大小1.5-5.0μm(长)×0.5-1.0μm(宽)，大多数菌体呈分散状，成对或短链状排列；生长温度28-42℃，最适温度为37℃。45.2.生理化特性46.xj-1可以在营养培养基，如lb、营养琼脂中生长，也可以在添加植物油、甘油、葡萄糖、十六烷的无机盐培养基中生长，也可以利用废糖蜜或地沟油为碳源生长；47.该菌具有很高的利用廉价营养(如废糖蜜或地沟油)产鼠李糖脂能力。xj-1菌株降低表面张力及其稳定性良好，并且不会产生粘稠状物体，便于注入油藏。48.将菌株xj-1的16s rdna的pcr扩增产物进行测序，铜绿假单胞菌xj-1的16s rdna基因序列与铜绿假单胞菌irmd和铜绿假单胞菌cgr的16s rdna序列相似性为99％。参照《bergey’s mannual ofsystematic bacteriology》，根据其形态特征和生理生化特性，以及根据其16s rdna基因序列在genbank中的搜索结果，鉴定其属于铜绿假单胞菌属(pseudomonas aeruginosa)，命名为铜绿假单胞菌xj-1。49.与现有技术比，本发明的技术优势在于：50.(1)本发明提供的一种铜绿假单胞菌xj-1菌株具有很高的利用廉价营养产鼠李糖的能力，利用废蜜糖或地沟油为碳源能产生鼠李糖脂的量为27g/l。所述菌株既可以在营养培养基，如lb、营养琼脂中生长，也可以在添加植物油、甘油、葡萄糖、十六烷的无机盐培养基中生长，还可以利用废糖蜜或地沟油为碳源生长，对于油藏开采有很好的应用价值。51.(2)本发明提供的一种铜绿假单胞菌xj-1菌株，接菌后的发酵培养基的表面张力由接种前的62mn/m降低至32mn/m，xj-1菌株具有很好的降低表面张力的能力及稳定性，并且不会产生粘稠状物体，便于注入油藏。52.(3)本发明提供的一种铜绿假单胞菌xj-1菌株对不同性质的原油都有很好的乳化降黏性能。所述菌株对稠油乳化降粘率为71％；对稀油乳化降粘率为9.1％；对高凝油乳化降粘率为62％。原油的粘度降低，其流动性能增强，一方面降低了原油的油水流度比，对原油起到驱油的效果；另一方面能够使大量原油分散于水中，使得运输压大大降低，提高了经济效益。附图说明53.图1为菌株xj-1的培养生长曲线；54.图2为实施例1中菌株xj-1的16s rrna基因系统进化树；55.图3为实施例3中菌株xj-1发酵液的ei24曲线；56.图4为实施例4中菌株xj-1发酵液的表面张力曲线；57.图5为实施例6中原油乳状液油滴颗粒显微图像处理过程示意图；其中，a为原油乳状液显微图像，b为图像二值化示意图，c为二值筛选杂点滤除示意图，d为粘连颗粒的分割处理示意图，e为空洞填充示意图；58.图6为实施例7中鼠李糖脂产量与吸光值线性曲线。59.保藏信息：该菌株的分类命名为铜绿假单胞菌xj-1；分类命名的拉丁文名称为pseudomonas aeruginosa xj-1，已于2021年8月23日，保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为cgmcc no.23170，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。具体实施方式60.下面通过具体实施例对本发明进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。61.实施例1铜绿假单胞菌xj-1菌株的分离和鉴定62.菌株的分离和育种：63.(1)取陆梁油田石油区域采集油水样，震荡均匀后用移液管取10ml，无菌接种至100ml无机盐基础培养基中(培养基组成：原油2g，na2hpo40.6g，kh2po40.2g，nano32g，feso40.01g，mgso40.3g，cacl20.01g，酵母粉0.01g，蒸馏水，1l，ph 7.2；121℃灭菌30min)，37℃摇床220rpm往复振荡培养7天；64.(2)富集的菌液呈现墨绿色，将富集xj-1菌的摇瓶用无菌水进行稀释，以10的倍数逐级稀释至105倍。然后将稀释液涂布在lb平板上培养48h，lb平板上得到一株产生绿色素单菌；65.(3)将单菌接种到lb培养基中，培养16h到对数期，得种子液a；66.(4)按2％(v/v)比例将种子液a接入100ml发酵培养基中(发酵培养基组成：糖蜜35g，玉米浆5g，nano32g，地层水1l，ph 7.2；121℃灭菌30min)，37℃摇床往复振荡培养3天，得种子液b；67.(5)将种子液b按2％(v/v)比例接种至新鲜的100ml无机盐植物油培养基(培养基组成：大豆油50g，na2hpo40.6g，kh2po40.2g，nano32g，feso40.01g，mgso40.3g，cacl20.01g，酵母粉0.01g，蒸馏水，1l，ph 7.2；121℃灭菌30min)；68.(6)重复步骤(2)-(5)，得到本发明的铜绿假单胞菌xj-1菌株。69.菌株的鉴定：70.1形态学鉴定71.菌体呈短杆状，菌体的一端有单鞭毛，运动活泼，菌体大小1.5-5.0μm(长)×0.5-1.0μm(宽)，大多数菌体呈分散状，成对或短链状排列。72.经革兰氏染色法鉴定，铜绿假单胞菌xj-1菌为革兰氏阴性菌。73.2可培养性鉴定74.将按照上述分离和育种方法中的步骤(1)-(2)操作得到的单菌落接种到lb培养基中进行培养，菌株xj-1的生长曲线如图1。75.3生理化特性及16s rdna基因序列特征76.将实施例1中分离得到的xj-1菌株斜面划线至biolog平板上37℃过夜培养，待平板上长满菌落后用无菌棉签将菌落转移到100ml无菌的生理盐水中，用革兰氏阳性菌调整其在600nm波长处的吸光值od600为0.5～0.6之间，用8道移液器将菌液加到biolog gp/gn 96孔板中(每孔100μl)，37℃培养，4h和12h分别用biolog分析仪读板(能利用碳源生长的则该孔变色)，得出的数值与biolog 1.32数据库进行比对，得出在碳源分类学上距离最接近的菌名和距离。77.表1菌株xj-1生理生化测定结果[0078][0079][0080]注：大于等于90％为阳性(+)，小于等于90％为阴性(－)[0081]将实施例1中分离得到的xj-1菌株按比例2％(v/v)接种于100ml lb培养基，37℃摇床(220rpm)培养24h，离心收集菌体，重新悬浮，加溶菌酶和sds破壁，由酚-氯仿法提取基因组dna，并采用正相引物27f(5’‑gagagtttgatcctggctcag-3’)和反向引物1541r(5’‑aaggaggtgat cca gcc-3’)，用这对引物对其16s rdna基因进行pcr扩增，将扩增引物送北京奥科公司进行测序。pcr条件为：94℃，10min；94℃，45s，55℃，45s，72℃90s，30个循环；然后72℃10min，4℃保存。铜绿假单胞菌xj-1的16s rdna基因序列与铜绿假单胞菌irmd和铜绿假单胞菌cgr的16s rdna序列相似性为99％。[0082]参照《bergey’s mannual ofsystematic bacteriology》，根据其形态特征和生理生化特性，以及根据其16s rdna基因序列在genbank中的搜索结果，鉴定xj-1属于铜绿假单胞菌属(pseudomonas aeruginosa)，结果见图2。[0083]实施例2铜绿假单胞菌xj-1菌株对原油的降粘实验[0084]将实施例1中分离得到的xj-1菌株在lb斜面上划线，37℃培养24h后用100ml无菌水将菌体洗下，将对数期的菌液作为种子液按比例2％(v/v)接入100ml发酵培养基中(发酵培养基组成：糖蜜35g，玉米浆5g，nano32g，地层水1l，ph 7.2；121℃灭菌30min)，37℃振荡培养(120rpm)3天，得发酵液，作为种子液。[0085]测定方法：将种子液按2％(v/v)比例接入30ml发酵培养基中，加入30g原油，150r/min震荡培养15天，温度根据原油在地层的温度设定，用水代替新接种的发酵液的摇瓶为对照，计算降粘率。[0086]表2 xj-1菌对原油的降粘作用[0087] 转子转速rpm粘度mpa·s扭矩(％)降粘率(％)稀油对照615043.836.4/稀油(25℃)615039.818.49.1稠油对照616851.876.8/稠油(60℃)06246.440.671高凝油对照611067.764.2/高凝油(60℃)611025.748.562[0088]实施例3铜绿假单胞菌xj-1菌株发酵液乳化活性实验[0089]将实施例1中分离得到的xj-1菌株在lb斜面上划线，37℃培养24h后用100ml无菌水将菌体洗下，将对数期的菌液作为种子液按比例2％(v/v)接入100ml发酵培养基中(发酵培养基组成：糖蜜35g，玉米浆5g，nano32g，地层水1l，ph 7.2；121℃灭菌30min)，37℃振荡培养(220rpm)3天，得发酵液，作为种子液。将种子液按2％(v/v)比例接入发酵培养基中，得到新接种的发酵液。[0090]在带刻度的磨口试管中，加入2ml测试烃(0#柴油)和2ml xj-1菌株发酵液，涡旋振荡器充分振荡1min，静置24h，以乳化指数(emusification index，ei24)表示乳化剂的乳化活性，测定不同发酵时间的乳化指数，结果见图3。[0091][0092]排油圈直径的测定：在洁净培养皿中加入20ml的蒸馏水，然后滴加1ml预热至45℃的原油均匀散于水表面，使其形成一层薄的油膜，在油膜中央定量10μl滴加微生物发酵培养液，中心油膜被挤向四周形成排油圈，排油圈直径与发酵培养液表面活性的大小成正比。测量其最大排油圈直径，重复3次，取平均值为5.1cm。[0093]实施例4铜绿假单胞菌xj-1菌株发酵液表面张力的测定实验[0094]将实施例1中分离得到的xj-1菌株在lb斜面上划线，37℃培养24h后用100ml无菌水将菌体洗下，将对数期的菌液作为种子液按比例2％(v/v)接入100ml发酵培养基中(发酵培养基组成：糖蜜35g，玉米浆5g，nano32g，地层水1l，ph 7.2；121℃灭菌30min)，37℃振荡培养(220rpm)3天，得发酵液，作为种子液。将种子液按2％(v/v)比例接入发酵培养基中，得到新接种的发酵液。[0095]表面张力测定参照国标gb/t 22237-2008《表面活性剂表面张力的测定》进行。以未接菌的发酵培养基为对照，通过powereach jk99b型全自动界面张力仪，采用白金环法测定菌株发酵液的表面张力，不同培养时间稀释倍数为10的xj-1菌发酵液表面张力结果见图4。由图4可知，培养72h后，稀释倍数为10的菌株发酵液的表面张力由未接种前的62mn/m降低至32mn/m。表3为培养72h后，不同稀释倍数的xj-1菌发酵液表面张力结果。[0096]表3培养72h的xj-1菌株表面张力结果[0097][0098]实施例5铜绿假单胞菌xj-1菌界面张力的测定实验[0099]将实施例1中分离得到的xj-1菌株在lb斜面上划线，37℃培养24h后用100ml无菌水将菌体洗下，将对数期的菌液作为种子液按比例2％(v/v)接入100ml发酵培养基中(发酵培养基组成：糖蜜35g，玉米浆5g，nano32g，地层水1l，ph 7.2；121℃灭菌30min)，37℃振荡培养(220rpm)3天，得发酵液。[0100]界面张力的测定方法：样品管中装满xj-1菌株发酵液作为高密度相，然后再在高密度相中注入一滴原油作为低密度相，样品管在马达的带动下转动，在离心作用下液滴在样品管的中心轴线上，并且被拉伸变形，设定转速8000rpm，温度根据原油在地层的温度设定(稀油温度设定为25℃，稠油温度设定为60℃)，对照的高密度相与低密度相分别为水与原油，xj-1菌株发酵液表面张力结果见表4。[0101]表4 xj-1菌株表面张力的结果比较[0102] 转速x像素y像素界面张力稀油对照8000421.4450513.06稀油8000455.066100.13稠油对照8000421.4956526.19稠油8000455.066100.169[0103]实施例6铜绿假单胞菌xj-1菌对原油的乳化分散效果[0104]使用显微镜图像法测定菌株对原油(陆梁原油样品)的乳化分散效果，显微图像法通过测量大量颗粒并进行统计分析，从而反映大量颗粒的信息特征。[0105]显微图像法操作方法：根据原油乳状液中油滴颗粒的多少对其进行一定倍数稀释(标准是使得显微观察时每个视野有多个完整油滴(》20)且油滴间相互不重合)，然后取少许滴于载玻片上于光学显微镜下进行原油乳状液图像采集；将采集到的图像进行二值化，转换变成二值图像；图像二值化后，会出现许多大小不等的黑色区域，面积非常小的颗粒一般是图像中的杂点，此时通过系统的二值筛选功能将其过滤掉；图像二值化后，部分颗粒会出现中间空洞的现象，此时需要进行空洞填充；对于处于边界上和有粘连的颗粒需要借助图像处理工具进行去除和分割处理，使之成为独立的颗粒。具体流程见图5。[0106]最后通过显微图像分析软件“颗粒计算”功能对颗粒整体分布参数进行计算，这里可得到的参数包括每个颗粒的周长、面积、等效直径、最大径、最小径；最后将这些计算结果保存到系统数据库中，将数据导入文本文档(text)，进行统计学描述。[0107]因此，在使用该方法评价原油乳状液中原油乳化分散效果时，需要待测样品中原油达到一定的乳化分散程度，并且测试过程中对待测样品做一定程度稀释(标准是使得显微观察时每个视野有多个完整油滴(》20)且油滴间相互不重合)，从而增加测试准确性。同时，由于这种方法单次所测到的颗粒个数较少，需要通过更换视场的方法对同一个样品进行多次测量(5次以上)，增大测试样本数量，从而消除一幅图中由于各种因素引起的误差，提高测试结果的真实性。在实际的图像采集过程中，会出现部分颗粒位于图像边缘的现象，此时颗粒是不完整的，需要对之进行剔除。图像经二值化处理时，由于光照原因，部分颗粒表面会发生光的反射现象，造成目标物局部亮度变大，图像二值化处理后出现颗粒孔洞，此时需要进行空洞填充，以免产生断裂碎片影响测量结果。表5为菌株xj-1对三种原油乳化分散效果。[0108]表5菌株xj-1对三种原油乳化分散效果[0109][0110]从表5中乳状液粒径来看，菌株xj-1可将稀油、高凝油以及稠油乳化分散为较小颗粒，粒径分别为0.5337μm、1.5275μm和1.3356μm。因此，菌株xj-1对三种原油都具有很好的乳化分散效果。[0111]实施例7鼠李糖脂的制备及其在对原油的乳化分散效果[0112]鼠李糖脂制备过程：[0113](1)将菌株在lb平板划线，30℃培养12-16h。[0114](2)从平板挑取长势良好的单克隆接于5ml lb试管，200rpm，30℃培养12h。[0115](3)次日以2％的接种量转接于50ml lb种子培养基，200rpm，30℃培养8h。测定od600值基本一致。[0116](4)以10％接种量转接50ml发酵培养基，200rpm，30℃培养72h(3d)。[0117](5)4℃9000rpm离心15min，上清液用hcl调节ph＝2.0，加入等体积萃取液(氯仿：甲醇＝2:1)，震荡混匀30min，8000rpm离心15min，取下层氯仿于锥形瓶中(锥形瓶空瓶提前称重)，置于通风橱过夜挥发氯仿。[0118](6)次日待氯仿挥发完全，锥形瓶称重，得到鼠李糖脂粗品干重。[0119](7)体积氯仿回溶鼠李糖脂，取100μl置于刻度试管中，置于通风橱将氯仿挥发完全。刻度试管中加入2ml超纯水，1ml 6％的苯酚溶液混匀。之后加入5ml硫酸(冰上)混匀，80℃水浴1h，于490nm处测定吸光度。根据鼠李糖脂产量与吸光度线性曲线(图6)，计算鼠李糖脂含量。[0120]上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。









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