新型抗CLDN18抗体的制作方法 专利技术说明

有机化合物处理,合成应用技术新型抗cldn18抗体技术领域1.本发明总体上涉及新型抗claudin18(具体地，抗claudin18.2)抗体和其抗体片段。背景技术：2.claudin(cldn)蛋白是位于上皮和内皮紧密连接处的完整膜蛋白，可用于调节离子和溶质的细胞旁通透性。敲除cldn18的小鼠表现出增加的溶质通透性和肺泡液清除率。cldn18蛋白在各种癌症类型中广泛表达，其至少有两种异构体，即cldn18.1和cldn18.2，其中cldn18.1剪接变异体在肺中表达，cldn18.2剪接变异体在胃粘膜中表达，但在其他健康组织中不表达(singh et al.，journal of hematology&oncology(2017)10：105)。cldn18.2提供了一种高选择性的胃谱系(例如，胃细胞特异性)标记物，其表达模式仅限于短期分化上皮细胞，并且在胃腺干细胞区不存在(sahin et al.，clin cancer res 14(23)7624-7634，2008)。sahin等人还报告了cldn18.2在几种不同类型的癌症中经常过度表达，包括胰腺癌、胃癌、食道癌、肺癌和卵巢癌。因此，已发表的报告表明，cldn18.2可能是一种诊断工具以及一个开发与上皮细胞源性肿瘤相关疾病的癌症免疫疗法的有吸引力的目标。特别是，针对cldn18.2产生的单克隆抗体zolbetuximab(也称为imab362)从临床试验中获得了初步结果，表明其对晚期胃癌有帮助。3.仍然需要新型抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体。4.发明简述5.本技术全文中的冠词“一种”(a/an)、“一个”(a/an)和“所述”在此用于指代一种(个)或多于一种(个)(即，至少一种(个))该冠词的语法对象。举例来说，“一种抗体”指一种抗体或多于一种抗体。6.在一个方面，本发明提供了一种能够特异性结合cldn18的抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包括lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中：7.a)所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：1-28、201、202、332-337；或者8.b)所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：29-67、203、338-343、367；或者9.c)所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：68-94、344-346；或者10.d)所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：95-113、205、347、348；或者11.e)所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：114-123、349、350；或者12.f)所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：124-155、204、351-354。13.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包括lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中：14.a)所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：1、4、11、15-20、201、202、332-337，并且/或者15.b)所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：29、32、43、46-51、53、203、338-343，并且/或者16.c)所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：68、69、71、79、80-85、344-346，并且/或者17.d)所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：95、96、101-104、106、205、347、348，并且/或者18.e)所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：114、115、117-122、349、350，并且/或者19.f)所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：124、127、135、137-142、144、204、351-354。20.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包括lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中：21.a)所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：1、4、11、15-20、201、202，并且/或者22.b)所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：29、32、43、46-51、53、203，并且/或者23.c)所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：68、69、71、79、80-85，并且/或者24.d)所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：95、96、101-104、106、205，并且/或者25.e)所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：114、115、117-122，并且/或者26.f)所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：124、127、135、137-142、144、204。27.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包括lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中：28.a)所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：16、19、201、202，并且/或者29.b)所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：47、50、203，并且/或者30.c)所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id no：80、83，并且/或者31.d)所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：96、103、205，并且/或者32.e)所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id no：118、120，并且/或者33.f)所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：138、141、204。34.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区，所述重链可变区包括：35.(1)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：1所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：29所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：68所示的序列；或者36.(2)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：30所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者37.(3)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：3所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：31所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：70所示的序列；或者38.(4)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：4所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：32所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者39.(5)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：5所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：33所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：71所示的序列；或者40.(6)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：4所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：34所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者41.(7)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：6所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：32所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者42.(8)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：7所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：35所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：72所示的序列；或者43.(9)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：8所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：36所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：72所示的序列；或者44.(10)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：6所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：37所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者45.(11)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：5所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：38所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：73所示的序列；或者46.(12)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：8所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：35所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：74所示的序列；或者47.(13)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：39所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者48.(14)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：9所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：40所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：75所示的序列；或者49.(15)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：9所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：41所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：76所示的序列；或者50.(16)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：10所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：42所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：77所示的序列；或者51.(17)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：11所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：43所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：71所示的序列；或者52.(18)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：12所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：44所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：75所示的序列；或者53.(19)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：13所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：40所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：75所示的序列；或者54.(20)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：14所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：45所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：78所示的序列；或者55.(21)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：8所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：35所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：72所示的序列；或者56.(22)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：15所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：46所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：79所示的序列；或者57.(23)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：16所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：47所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：80所示的序列；或者58.(24)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：201所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：47所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：80所示的序列；或者59.(25)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：17所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：48所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：81所示的序列；或者60.(26)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：18所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：49所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：82所示的序列；或者61.(27)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：19所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：50所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：83所示的序列；或者62.(28)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：202所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：50所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：83所示的序列；或者63.(29)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：202所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：203所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：83所示的序列；或者64.(30)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：17所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：51所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：84所示的序列；或者65.(31)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：52所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者66.(32)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：20所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：53所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：85所示的序列；或者67.(33)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：21所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：54所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：86所示的序列；或者68.(34)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：22所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：55所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：87所示的序列；或者69.(35)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：56所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者70.(36)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：1所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：57所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；或者71.(37)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：11所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：43所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：88所示的序列；或者72.(38)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：23所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：58所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：89所示的序列；或者73.(39)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：24所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：59所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：90所示的序列；或者74.(40)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：25所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：60所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：90所示的序列；或者75.(41)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：61所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：91所示的序列；或者76.(42)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：62所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；或者77.(43)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：27所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：367所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：93所示的序列；或者78.(44)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：63所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；或者79.(45)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：64所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；或者80.(46)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：28所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：65所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：85所示的序列；或者81.(47)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：28所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：66所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：94所示的序列；或者82.(48)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：28所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：66所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：85所示的序列；或者83.(49)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：67所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；或者84.(50)hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：11所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：61所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：91所示的序列。85.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区，所述轻链可变区包括：86.(1)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：95所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：114所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：124所示的序列；或者87.(2)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：114所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：125所示的序列；或者88.(3)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：126所示的序列；或者89.(4)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：127所示的序列；或者90.(5)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：116所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：128所示的序列；或者91.(6)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：97所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：129所示的序列；或者92.(7)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：130所示的序列；或者93.(8)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：98所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：127所示的序列；或者94.(9)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：128所示的序列；或者95.(10)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：99所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：131所示的序列；或者96.(11)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：99所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：132所示的序列；或者97.(12)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：99所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：133所示的序列；或者98.(13)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：100所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：134所示的序列；或者99.(14)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：135所示的序列；或者100.(15)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：136所示的序列；或者101.(16)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：102所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：117所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：137所示的序列；或者102.(17)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：103所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：118所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：138所示的序列；或者103.(18)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：103所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：118所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：204所示的序列；或者104.(19)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：119所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：139所示的序列；或者105.(20)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：104所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：118所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：140所示的序列；或者106.(21)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：141所示的序列；或者107.(22)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：205所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：141所示的序列；或者108.(23)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：121所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：142所示的序列；或者109.(24)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：105所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：143所示的序列；或者110.(25)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：106所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：122所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：144所示的序列；或者111.(26)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：95所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：128所示的序列；或者112.(27)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：98所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：145所示的序列；或者113.(28)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：146所示的序列；或者114.(29)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：147所示的序列；或者115.(30)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：148所示的序列；或者116.(31)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：107所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：149所示的序列；或者117.(32)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：108所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列；或者118.(33)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：108所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列；或者119.(34)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：107所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：149所示的序列；或者120.(35)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：109所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：123所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：151所示的序列；或者121.(36)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：110所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列；或者122.(37)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：111所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列；或者123.(38)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：152所示的序列；或者124.(39)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：153所示的序列；或者125.(40)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：112所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：152所示的序列；或者126.(41)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：153所示的序列；或者127.(42)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：107所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：149所示的序列；或者128.(43)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：152所示的序列；或者129.(44)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：154所示的序列；或者130.(45)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：155所示的序列；或者131.(46)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：108所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列；或者132.(47)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：107所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：149所示的序列；或者133.(48)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：113所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：149所示的序列；或者134.(49)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：108所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列；或者135.(50)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：107所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：149所示的序列；或者136.(51)lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：153所示的序列。137.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段进一步包括重链hfr1、hfr2、hfr3和hfr4中的一个或多个，和/或轻链lfr1、lfr2、lfr3和lfr4中的一个或多个，其中：138.a)所述hfr1包括如seq id no：355或356所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，139.b)所述hfr2包括如seq id no：357或358所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，140.c)所述hfr3包括如seq id no：359或360所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，141.d)所述hfr4包括如seq id no：361或362所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，142.e)所述lfr1包括如seq id no：363所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，143.f)所述lfr2包括如seq id no：364所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，144.g)所述lfr3包括如seq id no：365所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，并且145.h)所述lfr4包括如seq id no：366所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列。146.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括选自下组的序列：seq id nos：206-259、311-313、318-321，以及与其具有至少80％序列同一性但仍然保持与cldn18特异性结合亲和性的同源序列；所述轻链可变区包括选自下组的序列：seq id nos：260-310、314-317、322-324，以及与其具有至少80％序列同一性但仍然保持与cldn18特异性结合亲和性的同源序列。147.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括选自下组的序列：seq id nos：210、246，以及与其具有至少80％序列同一性但仍然保持与cldn18特异性结合亲和性的同源序列；所述轻链可变区包括选自下组的序列：seq id nos：273、307，以及与其具有至少80％序列同一性但仍然保持与cldn18特异性结合亲和性的同源序列。148.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段进一步包括一个或多个氨基酸残基取代或修饰，但仍然保持与cldn18的特异性结合亲和性。在一些实施方式中，其中所述取代或修饰中的至少一个在所述重链可变区或轻链可变区中的一个或多个cdr序列和/或一个或多个非cdr序列中。149.在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包括fc区，可选地包括人免疫球蛋白(ig)的fc区，或可选地包括人igg的fc区。在一些实施方式中，所述fc区源自人igg1、igg2、igg3、igg4、iga1、iga2或igm。在一些实施方式中，源自人igg1的所述fc区包括一个或多个选自下组的突变：l235v、g236a、s239d、f243l、h268f、r292p、y300l、v305i、s324t、a330l、i332e和p396l。在一些实施方式中，源自人igg1的所述fc区包括一个或多个选自下组的突变：(1)g236a、s239d和i332e；(2)s239d、a330l和i332e；(3)s239d和i332e；(4)s239d、h268f、s324t和i332e；(5)f243l、r292p、y300l、v305i和p396l；(6)l235v、f243l、r292p、y300l和p396l。在一些实施方式中，本发明提供的所述的抗体或其抗原结合片段包括fc区，所述fc区包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：326-331。150.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段为人源化的。在一些实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、重组抗体、嵌合抗体、标记抗体、双价抗体、抗独特型抗体或融合蛋白。151.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段为双抗体(diabody)、fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv片段、二硫键稳定的fv片段(dsfv)、(dsfv)2、双特异性dsfv(dsfv-dsfv’)、二硫键稳定的双抗体(ds diabody)、单链抗体分子(scfv)、scfv二聚体(双价的双功能抗体)、多特异性抗体、骆驼化单域抗体(camelized single chain domain antibody)、纳米抗体(nanobody)、域抗体(domain antibody)或双价域抗体。152.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段能够特异性地与人类cldn18结合。在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段能够特异性地与人类cldn18.2结合。在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段能够与人类cldn18.1和人类cldn18.2结合。在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段能够以不超过2nm的ec50特异性与人类cldn18.2结合，所述ec50通过facs检测法测定。153.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段具有选自下组的一种或多种性质：154.a)通过facs检测法测定，特异性地与人类cldn18.2结合，但不与人类cldn18.1特异性地结合；155.b)通过facs检测法测定，特异性地与人类cldn18.2和小鼠cldn18.2结合；156.c)以不超过4nm的ec50特异性地与小鼠cldn18.2结合，所述ec50通过facs检测法测定；157.d)以不超过10-8m的kd值特异性地与人类cldn18.2结合，所述kd值通过biacore分析测定；158.e)以不超过10-8m的kd值特异性地与人类cldn18.2结合，所述kd值通过octet分析测定。159.在另一方面，本发明提供了一种抗cldn18抗体或其抗原结合片段，其与本发明提供的抗体或其抗原结合片段竞争结合人类cldn18。160.在一些实施方式中，本发明的cldn18是包含如seq id no：401所示的氨基酸序列的人类cldn18.2。161.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段不是抗体imab362，其中抗体imab362包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括如seq id no：397所示的序列，所述轻链可变区包括如seq id no：398所示的序列。162.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或抗原结合片段为双特异性的。163.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或抗原结合片段能够特异性地与除cldn18之外的第二抗原或cldn18上的第二表位结合。164.在一些实施方式中，本发明提供的所述抗体或抗原结合片段与一个或多个缀合物部分连接。在一些实施方式中，所述缀合物部分包括清理修饰剂、化疗剂、毒素、放射性同位素、镧系元素、发光标记、荧光标记、酶底物标记、dna烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白结合剂、纯化部分或其他抗癌药物。165.在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段以及一种或多种药学上可接受的运载体。166.在另一方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体，其包括本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段、跨膜区和细胞内信号区。在一些实施方式中，所述嵌合抗原受体的抗原结合片段为scfv。在一些实施方式中，所述嵌合抗原受体的跨膜区包括cd3、cd4、cd8或cd28的跨膜区。在一些实施方式中，所述嵌合抗原受体的细胞内信号区选自下组：cd3、cd27、cd28、cd137、cd134、myd88、cd40、cd278、tlrs的细胞内信号区序列，或者其组合。167.在另一方面，本发明提供了一种分离的多核苷酸，其编码根据本发明提供的所述抗体或其抗原结合片段和/或本发明提供的所述嵌合抗原受体。168.在另一方面，本发明提供了一种载体，其包括本发明所述的分离的多核苷酸。169.在另一方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包括本发明所述的载体。170.在另一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体，以及第二治疗剂。171.在另一方面，本发明提供了一种表达本发明所述的抗体或其抗原结合片段或本发明所述的嵌合抗原受体的方法，其包括在表达本发明所述的载体的条件下培养本发明所述的宿主细胞。172.在另一方面，本发明提供了一种在受试者中治疗、预防或减轻与cldn18相关的疾病、病症或状况的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本发明所述抗体或其抗原结合体和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体。173.在一些实施方式中，所述疾病、病症或状况是癌症。在一些实施方式中，所述癌症是源自上皮细胞的癌症。在一些实施方式中，所述癌症是肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆囊癌、胃癌、肺癌、支气管癌、骨癌、肝胆管癌、胰腺癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、肾癌、肾盂和输尿管癌、唾液腺癌、小肠癌、尿道癌、膀胱癌、头颈癌、脊柱癌、脑癌、宫颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、结肠癌、结直肠癌、直肠癌、食道癌、胃肠道癌、皮肤癌、前列腺癌、垂体癌、阴道癌、甲状腺癌、喉癌、胶质母细胞瘤、黑素瘤、骨髓增生异常综合症、肉瘤、畸胎瘤、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓性白血病(aml)、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、t或b细胞淋巴瘤、胃肠道间质瘤、软组织肿瘤、肝细胞癌或腺癌，或其转移。在一些实施方式中，所述癌症是胃癌、胰腺癌、食道癌、卵巢癌，或者其转移。174.在一些实施方式中，所述受试者已经被鉴定为具有表达cldn18的癌细胞或浸润肿瘤的免疫细胞，可选地其水平显著地高于非癌细胞上正常发现的水平。在一些实施方式中，受试者为人。175.在一些实施方式中，所述施用是经由口服、鼻内、静脉内、皮下、舌下或肌内施用。176.在一些实施方式中，所述在受试者中治疗、预防或减轻与cldn18相关的疾病、病症或状况的方法进一步包括施用治疗有效量的第二治疗剂。在一些实施方式中，所述第二治疗剂选自下组：化疗剂、抗癌药、放射治疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、靶向治疗剂、细胞治疗剂、基因治疗剂、激素治疗剂、抗病毒剂、抗生素、镇痛药、抗氧化剂、金属螯合剂和细胞因子。177.在另一方面，本发明提供了一种调节cldn18阳性细胞中cldn18活性的方法，其包括将所述cldn18阳性细胞暴露于本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体。178.在另一方面，本发明提供了一种检测样品中cldn18的存在或含量的方法，其包括将所述样品与本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体接触，并确定所述样品中cldn18的存在或含量。179.在另一方面，本发明提供了一种在受试者中诊断与cldn18相关的疾病、病症或状况的方法，其包括：a)将获取自所述受试者的样品与本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体接触；b)测定在所述样品中cldn18的存在或含量；c)将所述cldn18的存在或含量与所述受试者的与cldn18相关的疾病、病症或状况的存在或状态相关联。180.在另一方面，本发明提供了一种治疗、预防或减轻会从cldn18活性的调节中受益的受试者的疾病、病症或状况的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体。181.在另一方面，本发明提供了本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体在制备用于治疗、预防或减轻受试者中与cldn18相关的疾病、病症或状况的药物中的用途。182.在另一方面，本发明提供了本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体在制备用于诊断受试者中与cldn18相关疾病、病症或状况的诊断试剂中的用途。183.在另一方面，本发明提供了一种用于检测cldn18的试剂盒，其包括本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明所述的药物组合物和/或本发明所述的嵌合抗原受体。184.在一些实施方式中，本发明所述的cldn18是人类cldn18.2。附图说明185.图1显示了使用参考抗体imab362对hcldn18.2稳定蛋白的elisa分析结果。186.图2显示了使用免疫小鼠的血清对hcldn18.2稳定蛋白的elisa分析结果。187.图3显示了使用免疫小鼠的血清对cho-k1-hcldn18.2稳定细胞系的facs检测结果。188.图4显示了杂交瘤筛选的代表图。189.图5显示了纯化杂交瘤抗体分别与hek293-hcldn18.2细胞(图5a)、hek293-hcldn18.1细胞(图5b)、hek293-mcldn18.2细胞(图5c)和snu620细胞(图5d)结合的亲和性。190.图6显示了6种嵌合抗体(即ch99h8、ch97a9、ch60f11、ch35b4、ch22e12、ch33g12)以hek293/hcldn18.2细胞为靶细胞的adcc研究结果。191.图7显示了6种嵌合抗体(即ch99h8、ch97a9、ch60f11、ch35b4、ch22e12、ch33g12)在以nugc-4/hcldn18.2细胞为靶细胞的adcc研究中的剂量反应。192.图8显示了6种嵌合抗体(即ch99h8、ch97a9、ch60f11、ch35b4、ch22e12、ch33g12)在以hek293-hcldn18.1细胞为靶细胞的adcc研究中的剂量反应。193.图9显示了6种嵌合抗体(即ch99h8、ch97a9、ch60f11、ch35b4、ch22e12、ch33g12)以hek293/hcldn18.2细胞为靶细胞的cdc研究结果。194.图10a和图10b显示了人源化22e12抗体与mfc/hcldn18.2细胞的结合亲和性。195.图11a和图11b显示了人源化35b4抗体与snu620/hcldn18.2细胞的结合亲和性。196.图12a和图12b显示了nk92-cd16a和hek293/hcldn18.2细胞(图12a)或nugc4细胞(图12b)上人源化22e12和35b4抗体的adcc研究结果。197.图13显示了nk92-cd16a和hek293/hcldn18.2细胞上fc改造的人源化35b4(图13a)和22e12(图13b)抗体的adcc研究结果。198.图14显示了本发明提供的抗体的免疫组织化学(ihc)染色的代表图。199.图15a至15e分别显示了hu35b4.h1l2抗体(图15a)、hu22e12.h1l2抗体(图15b)、ch99h8抗体(图15c)、ch97a9抗体(图15d)和参考抗体imab362(图15e)使用表面等离子共振(spr)进行的动力学研究结果。200.图16显示了示例性抗体对snu620细胞的内化率。201.图17a和图17b显示了分别接受媒介、人igg1同种型、hu22e12.h1l2抗体单独、抗sirpα抗体单独以及hu22e12.h1l2抗体和抗sirpα抗体联合处理的小鼠的肿瘤体积(图17a；*表示p《0.05；***表示p《0.001)和体重(图17b)随着处理后的天数的变化。具体实施方式202.本发明的以下描述只为说明本发明的多种实施方式。因此，此处讨论的具体修改方式不应理解为对发明范围的限制。本领域的技术人员在不偏离本发明范围的情况下即可很容易地得出多种等同方式、变化和修改，应理解这样的等同实施方式包括在本发明范围内。在本发明中引用的所有文献，包括公开出版物、专利和专利发明都通过引用的方式全文并入。203.定义204.本发明中使用的术语“抗体”包括任何可结合某特定抗原的免疫球蛋白、单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、双价抗体、单价抗体、多特异性抗体或双特异性抗体。天然的完整抗体包含两条重(h)链和两条轻(l)链。哺乳动物的重链可分为α、δ、ε、γ和μ，每条重链包括可变区(vh)以及第一、第二、第三和可选地第四恒定区(分别为ch1、ch2、ch3、ch4)；哺乳动物的轻链可分为λ或κ，而每条轻链包括可变区(vl)以及恒定区。抗体呈“y”型，“y”型结构的茎部由通过二硫键结合的两条重链的第二和第三恒定区组成。“y”型结构的每条臂包括与单条轻链的可变区和恒定区结合的单条重链的可变区和第一恒定区。轻链和重链的可变区决定抗原的结合。每条链的可变区通常含有三个被称为互补决定区(cdr)的高变区(轻链cdr包括lcdr1、lcdr2、lcdr3，重链cdr包括hcdr1、hcdr2、hcdr3)。本发明中公开的抗体和抗原结合片段的cdr边界可通过kabat、imgt、chothia或al-lazikani命名法命名或识别(al-lazikani,b.，chothia,c.，lesk,a.m.，j.mol.biol.，273(4)，927(1997)；chothia,c.et al.，j mol biol.dec 5；186(3)：651-63(1985)；chothia,c.和lesk,a.m.，j.mol.biol.，196,901(1987)；chothia,c.et al.，nature.dec 21-28；342(6252)：877-83(1989)；kabat e.a.et al.，sequences of proteins of immunological interest,5th ed.public health service，national institutes of health，bethesda，md.(1991)；marie-paule lefranc et al.，developmental and comparative immunology，27：55-77(2003)；marie-paule lefranc et al.，immunome research，1(3)，(2005)；marie-paule lefranc，molecular biology of b cells(second edition)，chapter 26，481-514,(2015))。其中，三个cdr由被称为框架区(fr)(轻链fr包括lfr1、lfr2、lfr3和lfr4，重链fr包括hfr1、hfr2、hfr3和hfr4)的侧翼部分间隔开，框架区比cdr更加高度保守，并形成一个支架支撑高度可变环。重链和轻链的恒定区不参与抗原结合，但具有多种效应功能。抗体依据其重链恒定区的氨基酸序列可以分成几类。根据是否含有α、δ、ε、γ和μ重链，抗体可分别分为五个主要的分类或同种型：iga、igd、ige、igg和igm。几个主要的抗体分类还可分为亚类，如igg1(γ1重链)、igg2(γ2重链)、igg3(γ3重链)、igg4(γ4重链)、iga1(α1重链)或iga2(α2重链)等。205.在某些实施方式中，本发明提供的所述抗体包括其任何抗原结合片段。本发明中的术语“抗原结合片段”是指由含有一个或多个cdr的抗体的一部分形成的抗体片段，或者与抗原结合但不具有完整的天然抗体结构的任何其他抗体片段。抗原结合片段的例子包括，但不限于，如双功能抗体(diabody)、fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、二硫键稳定的fv片段(dsfv)、(dsfv)2、双特异性dsfv(dsfv－dsfv’)、二硫键稳定的双功能抗体(ds diabody)、单链抗体分子(scfv)、scfv二聚体(双价的双功能抗体)、双特异性抗体、多特异性抗体、骆驼化单域抗体(camelized single domain antibody)、纳米抗体(nanobody)、域抗体(domain antibody)和双价域抗体(bivalent domain antibody)。抗原结合片段能够与亲本抗体结合相同的抗原。206.抗体的“fab”是指由单条轻链(包括可变区和恒定区)和单条重链的可变区和第一恒定区经二硫键结合起来组成的抗体的一部分。[0207]“fab’”是指包含了部分铰链区的fab片段。[0208]“f(ab’)2”是指fab’的二聚体。[0209]抗体(例如igg、iga或igd同种型)的“fc”是指由第一重链的第二和第三恒定区经由二硫键与第二重链的第二和第三恒定区连接组成的抗体的一部分。igm和ige同种型抗体的fc还包含第四恒定区。抗体的fc部分负责多种不同的效应功能，例如，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)和补体依赖性细胞毒性(cdc)，但在抗原结合中不起作用。[0210]抗体的“fv”是指含有完整抗原结合位点的最小抗体片段。fv片段由单条轻链的可变区与单条重链的可变区结合组成。[0211]“单链fv抗体”或“scfv”是指由轻链可变区与重链可变区直接相互连接或通过肽接头序列连接而成的经改造的抗体(huston js et al.proc natl acad sci usa,85：5879(1988))。[0212]“单链fv-fc抗体”或“scfv-fc”是指由与抗体fc部分连接的scfv组成的经改造的抗体。[0213]“骆驼化单域抗体(camelized single domain antibody)”、“重链抗体”或“hcab(heavy-chain-only antibody)”都是指含有两个vh结构域而不含有轻链的抗体(riechmann l.and muyldermans s.,j immunol methods.dec 10；231(1-2)：25-38(1999)；muyldermans s.，j biotechnol.jun；74(4)：277-302(2001)；wo94/04678；wo94/25591；美国专利号6,005,079)。重链抗体最初来源于驼科(骆驼、单峰驼和美洲驼)。虽然缺失轻链，但是骆驼化抗体(camelized antibody)有确证的抗原结合全部功能(hamers-casterman c.et al.，nature.jun 3；363(6428)：446-8(1993)；nguyen vk.et al.immunogenetics.apr；54(1)：39-47(2002)；nguyen vk.et al.immunology.may；109(1)：93-101(2003))。重链抗体的可变区(vhh结构域)是获得性免疫应答产生的已知最小的抗原结合单位(koch-nolte f.et al.,faseb j.nov；21(13)：3490-8.epub 2007jun 15(2007))。[0214]“纳米抗体(nanobody)”是指一种抗体片段，其由来自重链抗体的vhh结构域以及两个恒定区ch2和ch3组成。[0215]“双功能抗体(diabody)”或“dab”包括带有两个抗原结合位点的小抗体片段，其中所述片段含有在同一条多肽链上相连的vh结构域和vl结构域(vh-vl或vl-vh)(请参见，例如，holliger p.et al.，proc natl acad sci usa.jul15；90(14)：6444-8(1993)；ep404097；wo93/11161)。两个结构域之间的接头很短，使同一条链上的两个结构域不能互相配对，从而迫使两个结构域与另一条链的互补结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。这两个抗原结合位点可靶向相同或不同的抗原(或表位)。在一些实施方式中，“双特异性ds双功能抗体”是靶向两种不同抗原(或表位)的双功能抗体。[0216]“域抗体(domain antibody)”是指仅含有重链可变区或轻链可变区的抗体片段。在某些情况下，两个或更多个vh结构域由肽接头共价连接形成双价或多价域抗体。双价域抗体的两个vh结构域可靶向相同或不同的抗原。[0217]本发明中使用的术语“价”是指给定分子中存在特定数量的抗原结合位点。术语“单价”是指仅具有一个抗原结合位点的抗体或抗原结合片段。术语“多价”是指具有多个抗原结合位点的抗体或抗原结合片段。由此，术语“双价”、“四价”和“六价”分别表示抗原结合分子中存在两个结合位点、四个结合位点和六个结合位点。在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段是双价的。[0218]在本发明中，“双特异性”抗体是指具有来源于两个不同的单克隆抗体的片段，并且能够与两个不同的表位结合的人工抗体。所述两个表位可以存在于同一个抗原，或者其可以存在于两个不同的抗原。[0219]在一些实施方式中，“scfv二聚体”是双价双功能抗体或双特异性scfv(bsfv)，包含二聚化的两个vh-vl(由肽接头连接)部分，使得一个部分的vh与另一个部分的vl协作形成两个结合位点，这两个结合位点可靶向相同抗原(或表位)或不同抗原(或表位)。在另一些实施方式中，“scfv二聚体”是双特异性双功能抗体，包含相互连接的vl1-vh2(由肽接头连接)和vh1-vl2(由肽接头连接)，使得vh1和vl1协作，vh2和vl2协作，且每个协作的配对具有不同的抗原特异性。[0220]“dsfv”是指二硫键稳定的fv片段，其单条轻链的可变区与单条重链的可变区之间的连接是二硫键。在一些实施方式中，“(dsfv)2”或“(dsfv-dsfv’)”含有三条肽链：两个vh部分通过肽接头(例如长的柔性接头)相连，并通过二硫键分别与两个vl部分结合。在一些实施方式中，dsfv-dsfv’具有双特异性，其中每对通过二硫键配对的重链和轻链具有不同的抗原特异性。[0221]本发明中使用的术语“嵌合”是指具有来源于一种物种的重链和/或轻链的一部分，并且所述重链和/或轻链的其余部分来源于另一不同物种的抗体或抗原结合片段。在一个示例性的实例中，嵌合抗体可以包括来源于人的恒定区和来源于非人动物(例如小鼠)的可变区。在一些实施方式中，所述非人动物是哺乳动物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、豚鼠或仓鼠。[0222]本发明中使用的术语“人源化”是指包括来源于非人动物的cdr、来源于人的fr区、以及来源于人的恒定区(当适用时)的抗体或抗原结合片段。本发明提供的人源化抗体的cdr和其亲本抗体的cdr相比可能包括突变。[0223]本发明中使用的术语“亲和力”或“亲和性”是指免疫球蛋白分子(即，抗体)或其片段与抗原之间非共价相互作用的强度。[0224]本发明中的“特异性结合”或“特异性地结合”是指两分子间的非随机结合反应，例如，抗体和抗原间的反应。特异性结合的特征可以在于结合亲和力，例如由kd值表示，即，当抗原和抗原结合分子之间的结合达到平衡时解离速率与结合速率的比值(koff/kon)。可通过使用本领域公知的任何常规方法测定kd，包括但不限于，表面等离子共振法、octet方法、微量热泳法、hplc-ms方法和流式细胞荧光分选技术(facs)检测法。≤10-6m(例如≤5x10-7 m、≤2x10-7 m、≤10-7m、≤5x10-8 m、≤2x10-8 m、≤10-8m、≤5x10-9 m、≤4x10-9 m、≤3x10-9m、≤2x10-9 m、≤10-9m、≤5x10-10 m、≤4x10-10 m、≤3x10-10 m、≤2x10-10 m、≤10-10m)的kd值可以表示抗体或其抗原结合片段与cldn18.2(例如人类cldn18.2)之间的特异性结合。[0225]本发明中的“竞争结合cldn18.2”的能力是指第一抗体或其抗原结合片段抑制cldn18.2与第二抗cldn18.2抗体之间结合的相互作用到任何可检测的程度的能力。在一些实施方式中，竞争结合cldn18.2的抗体或抗原结合片段可将cldn18.2与第二抗cldn18.2抗体之间的结合相互作用抑制至少85％或至少90％。在一些实施方式中，这样的抑制作用可以大于95％或大于99％。[0226]本发明中使用的术语“表位”是指抗原上与抗体结合的特定的原子基团或氨基酸。如果两种抗体表现出对抗原的竞争性结合，则可能结合抗原上相同或密切相关的表位。表位可以是线性或构象的(即，包括间隔开的氨基酸残基)。例如，如果抗体或其抗原结合片段对参考抗体与抗原的结合阻断达到至少85％、或至少90％或至少95％，那么所述抗体或其抗原结合片段可以被认为与所述参考抗体结合相同/密切相关的表位。[0227]本发明所用的术语“氨基酸”是指含有氨基(-nh2)和羧基(-cooh)官能团以及每个氨基酸特有的侧链的有机化合物。氨基酸名称在本发明中也以标准的单字母或三字母代码表示，总结如下：[0228]名称三字母代码单字母代码丙氨酸alaa精氨酸argr天冬酰胺asnn天冬氨酸aspd半胱氨酸cysc谷氨酸glue谷氨酰胺glnq甘氨酸glyg组氨酸hish异亮氨酸ilei亮氨酸leul赖氨酸lysk蛋氨酸metm苯丙氨酸phef脯氨酸prop丝氨酸sers苏氨酸thrt色氨酸trpw酪氨酸tyry缬氨酸valv[0229]在本发明中当“保守取代”用于氨基酸序列时，是指将一个氨基酸残基用另一个具有相似理化性质的侧链的氨基酸残基替代。例如，可以在具有疏水侧链的氨基酸残基之间(例如met、ala、val、leu和ile)、具有中性亲水侧链的氨基酸残基之间(例如cys、ser、thr、asn和gln)、具有酸性侧链的氨基酸残基之间(例如asp、glu)、具有碱性侧链的氨基酸残基之间(例如his、lys和arg)或具有芳香侧链的氨基酸残基之间(例如trp、tyr和phe)进行保守取代。本领域已知，保守取代通常不会引起蛋白构象结构的显著变化，因此能够保留蛋白质的生物活性。[0230]本发明所述的术语“同源的”指当最佳比对时核酸序列(或其互补链)或氨基酸序列与另一条序列具有至少60％(例如，至少65％、70％、75％、80％、85％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)的序列同一性。[0231]当“百分比(％)序列同一性”用于氨基酸序列(或核酸序列)时，是指在进行序列比对，并且必要时引入间隔使相同氨基酸(或核酸)数目达到最多后，在候选序列中，与参比序列相同的氨基酸(或核酸)残基占所述候选序列的氨基酸(或核酸)残基的百分比。换言之，可以通过用与其比较的参比序列相同的氨基酸残基(或碱基)数除以候选序列或参比序列(以较短者为准)中的氨基酸残基(或碱基)总数来计算氨基酸序列(或核酸序列)的百分比(％)序列同一性。所述氨基酸残基的保守取代可以认为或可以不认为是相同残基。可以通过本领域公开的工具，例如blastn、blastp(美国国家生物技术信息中心网站(ncbi)，也可参见altschul s.f.et al.，j.mol.biol.，215：403–410(1990)；stephen f.etal.，nucleic acids res.，25：3389–3402(1997))、clustalw2(欧洲生物信息研究所网站，可参见higgins d.g.et al.,methods in enzymology，266：383-402(1996)；larkin m.a.et al.，bioinformatics(oxford,england)，23(21)：2947-8(2007))和align或megalign(dnastar)软件，对序列进行比对以确定氨基酸(或核酸)序列的百分比序列同一性。本领域技术人员可以使用所述工具的默认参数或根据比对的需要适当调整参数，例如通过挑选合适的算法。[0232]本发明中使用的“效应功能”是指抗体的fc区与其效应子(例如，c1复合体和fc受体)结合的生物活性。示例性的效应功能包括：抗体与c1复合体上的c1q相互作用介导的补体依赖性细胞毒性(cdc)、抗体的fc区与效应细胞上的fc受体结合介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)以及吞噬作用。可以使用各种检测法(例如fc受体结合测定、c1q结合测定和细胞裂解测定)评估效应功能。[0233]本发明中使用的“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“adcc”是指细胞介导的反应，其中表达fc受体(fcr)的效应细胞识别靶细胞上的结合抗体或其抗原结合片段，并随后导致靶细胞裂解。“adcc活性”或“adcc效应”是指结合在靶细胞上的抗体或其抗原结合片段诱导上述adcc反应的能力。[0234]本发明中使用的“补体依赖性细胞毒性”或“cdc”是指抗体可通过激活机体补体系统介导特异性靶细胞裂解的机制。在cdc中，c1q结合抗体，这种结合触发补体级联反应，导致在靶细胞表面形成膜攻击复合物(mac)(c5b至c9)，这是补体激活经典途径的结果。“cdc活性”或“cdc效应”是指结合在靶细胞上的抗体或抗原结合片段引发上述cdc反应的能力。[0235]本发明中使用的“靶细胞”是指包含fc区域的抗体通常通过c末端到fc区域的蛋白质部分特异性结合到的细胞。“效应细胞”是表达一个或多个fc受体并执行效应功能的白细胞。介导adcc的人类白细胞的实例包括外周血单核细胞(pbmc)、自然杀伤(nk)细胞、单核细胞、细胞毒性t细胞和中性粒细胞；优选pbmc和nk细胞。效应细胞可从其天然来源分离，例如，从如本领域已知的血液或pbmc分离。[0236]“分离的”物质已经经人工由自然状态改变。如果自然界中出现某种“分离的”组合物或物质，那么其已经被改变或脱离其原始状态，或二者均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在的多核苷酸或多肽不是“分离的”，但如果这些多核苷酸或多肽与之在天然状态下共存的物质足够分离并以基本上纯的状态存在，则可以认为是“分离的”。“分离的核酸序列”是指分离的核酸分子的序列。在一些实施方式中，“分离的抗体或其抗原结合片段”是指纯度为至少60％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的抗体或其抗原结合片段，其中纯度由电泳方法(例如，sds-page、等电聚焦、毛细管电泳)，或色谱法(例如，离子交换色谱或反相hplc)确定。[0237]本发明中的术语“载体”是指可将遗传元件操作性地插入其中并使该遗传元件获得表达的一种运载工具，例如生产由该遗传元件编码的蛋白质、rna或dna，或者复制所述遗传元件。载体可用于转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传元件在宿主细胞内得以表达。举例来说，载体包括：质粒、噬菌粒、柯斯质粒(cosmid)、人工染色体如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1衍生的人工染色体(pac)、噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体，以及动物病毒等。载体可含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还可包括协助其进入细胞的成分，包括但不限于，病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳。载体可以是表达载体或克隆载体。本发明提供的载体(例如表达载体)含有本发明所述的编码抗体或其抗原结合片段的核酸序列、至少一个可操作地连接至所述核酸序列的启动子(例如，sv40、cmv、ef-1α)，以及至少一个选择标记。[0238]本发明中“宿主细胞”是指可以或已经导入外源多核苷酸和/或载体的细胞。[0239]术语“受试者”包括人类和非人类动物。非人类动物包括所有脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物(例如，非人类灵长类、小鼠、大鼠、猫、兔子、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物和爬行动物)。除另有说明外，否则术语“患者”、“受试者”或“个体”在本发明中可互换使用。[0240]术语“抗肿瘤活性”是指肿瘤细胞增殖、生存力或转移活性的降低。例如，抗肿瘤活性可以通过在治疗期间出现的异常细胞的生长速率的下降或肿瘤尺寸的稳定或减少、或者由于与没有治疗的对照相比由于治疗导致的更长的生存期来显示。可以使用可接受的体外或体内肿瘤模型(包括但不限于，异种移植物模型、同种异体移植物模型、小鼠乳腺肿瘤病毒(mmtv)模型和本领域已知的研究抗肿瘤活性的其他已知模型)来评估抗肿瘤活性。[0241]本发明中使用的对某种疾病、病症或状况的“治疗”或“疗法”包括预防或减轻某种疾病、病症或状况，降低某种疾病、病症或状况发生或发展的速度，降低发展出某种疾病、病症或状况的风险，预防或延迟与某种疾病、病症或状况相关的症状发展，减少或终止与某种疾病、病症或状况相关的症状，产生某种疾病、病症或状况的完全或部分的逆转，治愈某种疾病、病症或状况，或以上的组合。[0242]术语“诊断(diagnosis)”、“诊断(diagnose)”或“诊断(diagnosing)”是指病理状态、疾病或状况的鉴定，例如cldn18(具体地，cldn18.2)相关疾病的鉴定，或指患有cldn18(具体地，cldn18.2)相关疾病的可能会受益于特定的治疗方案的受试者的鉴定。在一些实施方式中，诊断包含鉴定cldn18.2的异常含量或活性。在一些实施方式中，诊断是指在受试者中鉴定癌症。[0243]如本发明所用，术语“生物样品”或“样品”是指获自或源自目标受试者的生物组合物，其包含待表征和/或待鉴定的细胞和/或其他分子实体，例如基于物理、生化、化学和/或生理特征来表征和/或鉴定。生物样品包括但不限于通过本领域技术人员已知的任何方法获得的受试者的细胞、组织、器官和/或生物流体。在一些实施方式中，生物样品是流体样品。在一些实施方式中，流体样品是全血、血浆、血清、粘液(包括鼻腔排泄物和痰)、腹膜液、胸膜液、胸腔液、唾液、尿液、滑液、脑脊髓液(csf)、胸腔穿刺液、腹部流体、腹水或心包积液。在一些实施方式中，生物学样品是获自受试者的胃、心脏、肝、脾、肺、肾、皮肤或血管的组织或细胞。[0244]本发明所用的“cldn18”是指claudin18以及包括任何其变体，包括cldn18.1和cldn18.2，细胞自然表达或转染cldn18基因的细胞表达的cldn18的构象、异构体和物种同源物。在某些实施方式中，cldn18为人类cldn18。本发明所用的cldn18可以来自其他动物物种，例如人、小鼠和食蟹猴等。术语“cldn18”、“cldn-18”、“cldn 18”、“claudin18”、“claudin-18”或“claudin 18”在本发明中可能会互换使用。[0245]“cldn18.1”是cldn18的剪接变异体，包括cldn18.1翻译后的修饰变异体、异构体和物种同源物，所述变异体、异构体和物种同源物由细胞自然表达或在转染cldn18.1基因的细胞上表达。术语“cldn18.1”、“cldn-18.1”、“cldn 18.1”、“claudin18.1”、“claudin-18.1”或“claudin 18.1”在本发明中可能互换使用。人类cldn18.1蛋白质的示例性序列在ncbi参考序列号np_057453.1中公开。[0246]“cldn18.2”是cldn18的剪接变异体，包括cldn18.2翻译后的修饰变异体、异构体和物种同源物，所述变异体、异构体和物种同源物由细胞自然表达或在转染cldn18.2基因的细胞上表达。术语“cldn18.2”、“cldn-18.2”、“cldn 18.2”、“claudin18.2”、“claudin-18.2”或“claudin 18.2”在本发明中可能互换使用。人类cldn18.2蛋白质的示例性序列在ncbi参考序列号np_001002026.1中公开。[0247]术语“抗cldn18抗体”是指能够特异性结合cldn18(例如，人类cldn18)的抗体。术语“抗人类cldn18抗体”是指能够特异性结合人类cldn18的抗体。在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18抗体能够与cldn18.1和cldn18.2特异性结合。在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18抗体能够与cldn18.2特异性结合，但不与cldn18.1结合或与cldn18.1的结合能力较差(例如，与cldn18.1的结合亲和性比与cldn18.2的结合亲和性低至少10倍，或至少50倍，或至少100倍，或比与cldn18.2的结合亲和性低至少200倍)。在一些实施方式中，本发明提供的抗cldn18抗体与cldn18.1不具有可检测的结合亲和性。在一些实施方式中，结合亲和性是通过facs检测法确定的。在一些实施方式中，结合亲和性是通过facs检测法测定的平均荧光强度(mfi)确定。[0248]本发明中使用的“cldn18相关”疾病、病症或状况是指由cldn18表达或活性增加或减少引起、加剧或以其他方式与之相关的任何疾病或状况。在一些实施方式中，cldn18相关疾病、病症或状况是与过度细胞增殖相关的紊乱，例如癌症。在某些实施方式中，cldn18相关疾病或状况的特征在于表达或过度表达cldn18和/或cldn18相关基因，例如cldn18.1基因或cldn18.2基因。[0249]术语“药学上可接受的”表示指定的载体、媒介、稀释剂、赋形剂和/或盐通常在化学和/或物理上与组成该制剂的其他成分相容，并且在生理上与其受体相容。[0250]本发明中使用的术语“cldn18阳性细胞”是指在细胞表面表达cldn18的细胞(例如上皮细胞)。[0251]抗cldn18抗体[0252]本发明提供了抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段。本发明提供的抗cldn18抗体和抗原结合片段能够与cldn18(特别是，cldn18.2)特异性结合。[0253]在某些实施方式中，本发明提供的抗体及其抗原结合片段特异性地与人类cldn18(特别是，人类cldn18.2)结合。在某些实施方式中，本发明提供的抗体及其抗原结合片段能够特异性地与人类cldn18.1和人类cldn18.2结合。在某些实施方式中，本发明提供的抗体及其抗原结合片段以不超过10-7m、不超过8×10-8m、不超过5×10-8m、不超过2×10-8m、不超过10-8m、不超过8×10-9m、不超过5×10-9m、不超过2×10-9m、不超过10-9m、不超过8×10-10m、不超过7×10-10m、不超过6×10-10m、不超过5×10-10m、不超过4×10-10m、不超过3×10-10m、不超过2×10-10m的kd值与人类cldn18.2特异性结合，所述kd值是通过biacore分析测定的。biacore分析基于表面等离振子共振技术(参见，例如，murphy,m.et al.，current protocols in protein science，chapter 19，unit 19.14,2006)。[0254]在某些实施方式中，本发明提供的抗体及其抗原结合片段以不超过10-8m、不超过8×10-9m、不超过5×10-9m、不超过1×10-9m、不超过8×10-10m、不超过5×10-10m、不超过1×10-10m、不超过8×10-11m、不超过5×10-11m、不超过1×10-11m、不超过8×10-12m、不超过5×10-12m、不超过1×10-12m的kd值特异性与人类cldn18(特别是，cldn18.2)结合，所述kd值是通过octet分析测定的。octet分析是基于生物层干涉技术(参见，例如，abdiche,yasmina n.,et al.analytical biochemistry 386.2(2009)：172-180，和sun y s.，instrumentation science&technology，2014,42(2)：109-127)。[0255]本发明提供的抗体或其抗原结合片段与cldn18的结合也可以用“半最大有效浓度”(ec50)值表示，该值是指观察到抗体的最大结合的50％时的抗体浓度。可以通过本领域已知的结合检测法，例如直接或间接结合检测法(例如酶联免疫吸附检测法(elisa)、facs检测法和其他结合检测法)来测定ec50值。在某些实施方式中，本发明提供的抗体及其抗原结合片段以不超过10-9m、不超过8×10-10m、不超过7×10-10m、不超过6×10-10m、不超过5×10-10m、不超过4×10-10m、不超过3×10-10m、不超过2×10-10m的ec50(即50％结合浓度)与人或小鼠cldn18(特别是，人或小鼠cldn18.2)结合，所述ec50值是通过facs检测法测定的。在某些实施方式中，所述结合是通过elisa或facs检测法测定的。在某些实施方式中，通过本发明的实施例2.3中所述的方法测定ec50值。[0256]在一些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段与cldn18.2特异性结合。在一些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段与人类cldn18.2特异性结合。在一些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段不与cldn家族里的其他成员(比如，cldn18.1)结合。在一些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段与人类cldn18.2特异性结合，但不与人类cldn18.1特异性结合，所述结合是通过例如facs检测法测定的。[0257]在某些实施方式中，本发明提供的抗体及其抗原结合片段以不超过10-8m、不超过8×10-9m、不超过5×10-9m、不超过2×10-9m、不超过10-9m、不超过8×10-10m、不超过7×10-10m、不超过6×10-10m、不超过5×10-10m或者不超过4×10-10m的ec50值与小鼠cldn18.2特异性结287所示的序列。[0271]本发明所使用的抗体“68e9”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：223所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：285所示的序列。[0272]本发明所使用的抗体“68d1”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：252所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：272所示的序列。[0273]本发明所使用的抗体“66e6”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：255所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：299所示的序列。[0274]本发明所使用的抗体“66e12”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：233所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：292所示的序列。[0275]本发明所使用的抗体“64c1”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：217所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：262所示的序列。[0276]本发明所使用的抗体“64c10”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：219所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：264所示的序列。[0277]本发明所使用的抗体“61a5”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：211所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：261所示的序列。[0278]本发明所使用的抗体“60f11”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：234所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：274所示的序列。[0279]本发明所使用的抗体“59g12”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：216所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：263所示的序列。[0280]本发明所使用的抗体“59f5”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：218所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：262所示的序列。[0281]本发明所使用的抗体“59e7”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：215所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：263所示的序列。[0282]本发明所使用的抗体“56b2”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：227所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：286所示的序列。[0283]本发明所使用的抗体“54f5”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：221所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：no：297所示的序列。[0310]本发明所使用的抗体“242g5”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：224所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：296所示的序列。[0311]本发明所使用的抗体“237e3”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：226所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：298所示的序列。[0312]本发明所使用的抗体“226e9”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：225所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：310所示的序列。[0313]本发明所使用的抗体“226d5”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：239所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：277所示的序列。[0314]本发明所使用的抗体“217b5”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：237所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：304所示的序列。[0315]本发明所使用的抗体“214e4”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：243所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：267所示的序列。[0316]本发明所使用的抗体“213a9”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：242所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：295所示的序列。[0317]本发明所使用的抗体“206c7”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：244所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：265所示的序列。[0318]本发明所使用的抗体“203d12”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：242所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：289所示的序列。[0319]本发明所使用的抗体“203a5”是指包含重链可变区和轻链可变区的单克隆抗体，其中所述重链可变区具有如seq id no：225所示的序列，所述轻链可变区具有如seq id no：296所示的序列。[0320]每种示例性的抗体重链可变区和轻链可变区的具体氨基酸序列如下表3所示。[0321]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括如下抗体的一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个、5个或6个)cdr序列：99h8抗体、99g8抗体、99a7抗体、97a9抗体、84e8抗体、83h3抗体、80f10抗体、79c3抗体、78h6抗体、73e4抗体、69b2抗体、68e9抗体、68d1抗体、66e6抗体、66e12抗体、64c1抗体、64c10抗体、61a5抗体、60f11抗体、59g12抗体、59f5抗体、59e7抗体、56b2抗体、54f5抗体、38b9抗体、35b4抗体、35a10抗体、33g12抗体、22e12抗体、15e10抗体、100f4抗体、40c1抗体、41b3抗体、66d7-1抗体、66d7-2抗体、51g10抗体、365f6抗体、360c2抗体、319f2抗体、317a7抗体、315f10抗体、314d7抗体、310h5抗体、308e8抗体、305g8抗体、256c10-1抗体、256c10-2抗体、248d9抗体、246b8抗体、243a8抗体、242g5抗体、237e3抗体、226e9抗体、226d5抗体、217b5抗体、214e4抗体、213a9抗体、206c7抗体、203d12抗体或203a5抗体。[0322]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：1-28、201、202、332-337，所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：29-67、203、338-343、367，所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：68-94、344-346；并且/或者所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：95-113、205、347、348，所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：114-123、349、350，所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：124-155、204、351-354。[0323]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：1、4、11、15-20、201、202、332-337，所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：29、32、43、46-51、53、203、338-343，所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：68、69、71、79、80-85、344-346；并且/或者所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：95、96、101-104、106、205、347、348，所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：114、115、117-122、349、350，所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：124、127、135、137-142、144、204、351-354。[0324]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：1、4、11、15-20、201、202，所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：29、32、43、46-51、53、203，所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：68、69、71、79、80-85；并且/或者所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：95、96、101-104、106、205，所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：114、115、117-122，所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列seq id nos：124、127、135、137-142、144、204。[0325]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：16、19、201、202，所述hcdr2包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：47、50、203，所述hcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id no：80、83；并且/或者所述lcdr1包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：96、103、205，所述lcdr2包括选自下组的氨基酸序列seq id no：118、120，所述lcdr3包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：138、141、204。[0326]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：1所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：29所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：68所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：95所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：114所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：124所示的序列。[0327]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：30所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：114所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：125所示的序列。[0328]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：3所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：31所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：70所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：126所示的序列。[0329]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：4所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：32所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：127所示的序列。[0330]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：5所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：33所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：71所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：116所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：128所示的序列。[0331]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：4所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：34所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：97所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：129所示的序列。[0332]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：6所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：32所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：127所示的序列。[0333]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：7所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：35所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：72所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：130所示的序列。[0334]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：8所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：36所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：72所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：130所示的序列。[0335]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：6所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：37所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：98所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：127所示的序列。[0336]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：5所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：38所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：73所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：128所示的序列。[0337]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：8所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：35所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：74所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：130所示的序列。[0338]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：6所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：32所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：127所示的序列。[0339]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：39所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：99所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：131所示的序列。[0340]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：5所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：33所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：71所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：128所示的序列。[0341]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：9所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：40所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：75所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：99所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：132所示的序列。[0342]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：9所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：41所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：76所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：99所示的序列，所述lcdr2包括id no：21所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：54所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：86所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：95所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：128所示的序列。[0359]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：22所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：55所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：87所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：98所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：145所示的序列。[0360]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：2所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：56所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：98所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：127所示的序列。[0361]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：1所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：57所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：69所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：98所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：127所示的序列。[0362]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：11所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：43所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：88所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：146所示的序列。[0363]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：23所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：58所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：89所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：147所示的序列。[0364]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：22所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：55所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：87所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：130所示的序列。[0365]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：24所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：59所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：90所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：148所示的序列。[0366]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：25所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：60所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：90所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：148所示的序列。[0367]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：61所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：91所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：107所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：149所示的序列。[0368]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：62所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：108所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列。[0369]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：24所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：59所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：90所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：148所示的序列。[0370]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：61所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：91所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：107所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：149所示的序列。[0371]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：25所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：60所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：90所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：109所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：123所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：151所示的序列。[0372]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：27所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：367所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：93所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：109所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：123所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：151所示的序列。[0373]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：63所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：110所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列。[0374]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：64所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：111所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列。[0375]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：28所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：65所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：85所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：152所示的序列。[0376]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：28所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：66所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：94所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：153所示的序列。[0377]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：28所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：65所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：85所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：112所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：152所示的序列。[0378]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：28所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：66所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：85所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：101所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：154所示的序列。[0379]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：67所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：155所示的序列。[0380]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：63所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：92所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：108所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：115所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：150所示的序列。[0381]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：26所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：61所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：91所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：107所示的序列，所述lcdr2id no：83所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：96所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：141所示的序列。[0390]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：202所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：203所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：83所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：205所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：141所示的序列。[0391]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段包括hcdr1、hcdr2和hcdr3，和/或lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1包括如seq id no：19所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：50所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：83所示的序列；并且/或者所述lcdr1包括如seq id no：205所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：141所示的序列。[0392]上述60种单克隆抗体中每一种的重链(表示为“h”)可变区、轻链(表示为“l”)可变区、hcdr和lcdr的seq id no如下表1所示。除非另有说明，否则cdr边界由kabat规则定义或确定。60种示例性的单克隆抗体中的每一个cdr的氨基酸序列如下表2所示。60种示例性的单克隆抗体中的每一个vh和vl的氨基酸序列如下表3所示。[0393]表1：60种示例性单克隆抗体的vh、vl、hcdr和lcdr的seq id no[0394][0395][0396][0397][0398]表2：60种示例性单克隆抗体中每一个cdr的氨基酸序列[0399][0400][0401][0402][0403][0404]表3：60个示例性单克隆抗体中每一个vh和vl的氨基酸序列[0405][0406][0407][0408][0409][0410][0411][0412][0413][0414][0415][0416]假设60种示例性单克隆抗体均可以结合至cldn18(特别是，cldn18.2)，并且抗原结合特异性主要由cdr1、cdr2和cdr3区提供，60种示例性单克隆抗体的hcdr1、hcdr2和hcdr3序列以及lcdr1、lcdr2和lcdr3序列可以被“混合并匹配”(即，来自不同抗体的cdr可以被混合并匹配，但每个抗体必须包含hcdr1、hcdr2和hcdr3以及lcdr1、lcdr2和lcdr3)，以产生本发明的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)结合分子。可以使用上文和实施例中所述的结合测定法来测试此类“混合并匹配”抗体的cldn18(特别是，cldn18.2)结合。优选地，当vh cdr序列被混合并匹配时，来自特定vh序列的hcdr1、hcdr2和/或hcdr3序列被结构相似的cdr序列取代。同样，当vl cdr序列被混合并匹配时，来自特定vl序列的lcdr1、lcdr2和/或lcdr3序列优选被结构相似的cdr序列取代。例如，抗体99h8和99g8的hcdr1具有一些结构相似性，因此易于混合并匹配。对于本领域技术人员显而易见的是，可以通过将一个或多个vh和/或vl cdr序列用本发明公开的60种示例性单克隆抗体的cdr序列中结构相似的序列替换来产生新的vh和vl序列。[0417]已知cdr负责抗原结合。然而，已经发现并非所有6个cdr都是必不可少的或不可改变的。换句话说，可以替换或改变或修饰60种示例性单克隆抗体中每一种的一个或多个cdr，但基本上保留与cldn18(特别是，cldn18.2)的特异性结合亲和性。[0418]在某些实施方式中，本发明所述的抗体及其抗原结合片段包含适当的框架区(fr)序列，只要所述的抗体及其抗原结合片段可以与cldn18(特别是，cldn18.2)特异性结合。上述的表2中所示的cdr序列获取自小鼠抗体，但可使用本领域公知的合适方法(例如，重组技术)将其嫁接到任何合适物种(例如，小鼠、人、大鼠、兔以及其他)的任何合适的fr序列。在一些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段包括hfr1、hfr2、hfr3、hfr4以及lfr1、lfr2、lfr3、lfr4，所述hfr1包括如seq id no：156所示的序列，所述hfr2包括如seq id no：162所示的序列，所述hfr3包括如seq id no：169所示的序列，所述hfr4包括如seq id no：177所示的序列，所述lfr1包括如seq id no：179所示的序列，所述lfr2包括如seq id no：185所示的序列，所述lfr3包括如seq id no：190所示的序列，所述lfr4包括如seq id no：198所示的序列。在一些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段包括hfr1、hfr2、hfr3、hfr4以及lfr1、lfr2、lfr3、lfr4，所述hfr1包括如seq id no：158所示的序列，所述hfr2包括如seq id no：165示的序列，所述hfr3包括如seq id no：172所示的序列，所述hfr4包括如seq id no：177所示的序列，所述lfr1包括如seq id no：182所示的序列，所述lfr2包括如seq id no：189所示的序列，所述lfr3包括如seq id no：194所示的序列，所述lfr4包括如seq id no：198。上述fr的氨基酸序列如表4所示。[0419]表4：小鼠fr的氨基酸序列[0420][0421][0422]在某些实施方式中，本发明所述的抗体及其抗原结合片段是人源化的。预期人源化的抗体或其抗原结合片段在人体具有降低的免疫原性。人源化的抗体或其抗原结合片段在其可变区是嵌合的，因为非人cdr序列被嫁接到人或基本上是人的fr序列中。抗体或抗原结合片段的人源化基本上可通过在人免疫球蛋白基因上用非人(例如，小鼠)cdr基因替换对应的人cdr基因来完成(参见，例如jones et al.(1986)nature 321：522-525；riechmann et al.(1988)nature 332：323-327；verhoeyen et al.(1988)science 239：1534-1536)。[0423]可以使用本领域公知的方法选择合适的人重链和轻链可变结构域，以达到这一目的。在一个示例性的实例中，可以使用“最佳拟合(best-fit)”的方法，其中对非人(例如，啮齿动物)抗体可变结构域序列进行筛选，或者将其与已知的人可变结构域序列的数据库进行blast比对，并且识别出最接近非人查询序列的人序列，用作用于嫁接非人cdr序列的人框架(参见，例如sims et al.，(1993)j.immunol.151：2296；chothia et al.(1987)j.mot.biol.196：901)。或者，可以将源自所有人抗体的共有序列的框架用于嫁接非人cdr(参见，例如carter et al.(1992)proc.natl.acad.sci.usa，89：4285；presta et al.(1993)j.immunol.，151：2623)。[0424]在某些实施方式中，本发明提供35b4的16种人源化抗体，其分别被命名为hu35b4.h1l1、hu35b4.h1l2、hu35b4.h1l3、hu35b4.h1l4、hu35b4.h1l1s92a、hu35b4.h2l1、hu35b4.h2l2、hu35b4.h2l3、hu35b4.h2l4、hu35b4.h2l1s92a、hu35b4.h3l1、hu35b4.h3l2、hu35b4.h3l3、hu35b4.h3l4、hu35b4.h3l1s92a。35b4的每种人源化抗体的重链可变区和轻链可变区的seq id no和具体的氨基酸序列如下表5和表6所示。35b4的每种人源化抗体fr的seq id no和具体的氨基酸序列如下表7和表8所示。人源化抗体hu35b4.h1l1、hu35b4.h1l2、hu35b4.h1l3、hu35b4.h1l4、hu35b4.h2l1、hu35b4.h2l2、hu35b4.h2l3、hu35b4.h2l4、hu35b4.h3l1、hu35b4.h3l2、hu35b4.h3l3、hu35b4.h3l4中的每一种均包括hcdr1、hcdr2、hcdr3和lcdr1、lcdr2、lcdr3，所述hcdr1包括如seq id no：201所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：47所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：80所示的序列，所述lcdr1包括如seq id no：103所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：118所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：138所示的序列；人源化抗体hu35b4.h1l1s92a、hu35b4.h2l1s92a、hu35b4.h3l1s92a中的每一种均包括hcdr1、hcdr2、hcdr3和lcdr1、lcdr2、lcdr3，所述hcdr1包括如seq id no：201所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：47所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：80所示的序列，所述lcdr1包括如seq id no：103所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：118所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：204所示的序列。上述35b4的15种人源化抗体的cdr边界是根据imgt规则定义或确定的。[0425]表5：每种35b4人源化抗体的人源化可变区的seq id no[0426]抗体vh(seq id no)vl(seq id no)hu35b4.h1l1311314hu35b4.h1l2311315hu35b4.h1l3311316hu35b4.h1l4311317hu35b4.h1l1s92a311402hu35b4.h2l1312314hu35b4.h2l2312315hu35b4.h2l3312316hu35b4.h2l4312317hu35b4.h2l1s92a312402hu35b4.h3l1313314hu35b4.h3l2313315hu35b4.h3l3313316hu35b4.h3l4313317hu35b4.h3l1s92a313402[0427]表6：每种35b4人源化抗体的人源化可变区的氨基酸序列[0428][0429]表7：35b4人源化抗体的人源化重链可变区和轻链可变区fr的seq id no[0430][0431][0432]表8：35b4人源化抗体的人源化fr的氨基酸序列[0433]seq id no氨基酸序列157evqllesggglvqpggslrlscaa163wvrqapgkglewvs164wvrqapgkglewva170rftisrdnskntlylqmnslraedtavyycak171rftisrdnskntlylqmnslraedtavyycat178wgqgtlvtvss180diqltqspsflsasvgdrvtitc181diqltqspsflsasvgdrvtmtc186wyqqkpgkapklliy187wyqqkpgkapkaliy188wyqqkpgkspkaliy191gvpsrfsgsgsgteftltisslqpedfatyyc192gvpsrfsgsgsgteytltisslqpedfatyyc193gvpsrfsgsgsgteytltissvqpedfatyyc199fgqgtkleik[0434]在一些实施方式中，本发明提供22e12的12种人源化抗体，其分别被命名为hu22e12.h1l1、hu22e12.h1l2、hu22e12.h1l3、hu22e12.h2l1、hu22e12.h2l2、hu22e12.h2l3、hu22e12.h3l1、hu22e12.h3l2、hu22e12.h3l3、hu22e12.h4l1、hu22e12.h4l2、hu22e12.h4l3。22e12的每种人源化抗体的重链可变区和轻链可变区的seq id no和具体氨基酸序列如下表9和表10所示。22e12的每种人源化抗体的fr的seq id no和具体氨基酸序列如下表11和表12所示。上述22e12的12种人源化抗体中的每一种均包括hcdr1、hcdr2、hcdr3和lcdr1、lcdr2、lcdr3，所述hcdr1包括如seq id no：202所示的序列，所述hcdr2包括如seq id no：203所示的序列，所述hcdr3包括如seq id no：83所示的序列；所述lcdr1包括如seq id no：205所示的序列，所述lcdr2包括如seq id no：120所示的序列，所述lcdr3包括如seq id no：141所示的序列。上述22e12的12种人源化抗体的cdr边界是根据imgt规则定义或确定的。[0435]表9：每种22e12人源化抗体的人源化可变区的seq id no[0436]抗体vh(seq id no)vl(seq id no)hu22e12.h1l1318322hu22e12.h1l2318323hu22e12.h1l3318324hu22e12.h2l1319322hu22e12.h2l2319323hu22e12.h2l3319324hu22e12.h3l1320322hu22e12.h3l2320323hu22e12.h3l3320324hu22e12.h4l1321322hu22e12.h4l2321323hu22e12.h4l3321324[0437]表10：每种22e12人源化抗体的人源化可变区的氨基酸序列[0438][0439]表11：22e12人源化抗体的人源化重链可变区和轻链可变区fr的seq id no[0440][0441][0442]表12：22e12人源化抗体的人源化fr的氨基酸序列[0443]seq id no氨基酸序列159qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckas160qvqlvqsgaevvkpgasvkvsckas161qvqlvqsgaevvkpgasvklsckas166wvrqapgqglewmg167wviqapgqglewmg168wviqapgqglewig173rvtmtrdtststvymelsslrsedtavyycar174rvtmtrdrststvymelsslrsedtavyfcag175rvtmtldrststvymelsslrsedtavyfcag176rvtltldrststvymelsslrsedtavyfcag178wgqgtlvtvss183divmtqspdslavslgeratinc184divmtqspdslavslgervtlnc189wyqqkpgqppklliy195gvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyyc196gvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyhc197gvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyhc200fgggtkleik[0444]在某些实施方式中，本发明提供的人源化抗体或其抗原结合片段基本上由除了非人cdr序列以外的所有人的序列组成。在一些实施方式中，可变区fr和恒定区(如果存在的话)全部或基本上来自人免疫球蛋白序列。人fr序列和人恒定区序列可以源自不同的人免疫球蛋白基因，例如，源自一种人抗体的fr序列和源自另一种人抗体的恒定区。在一些实施方式中，人源化抗体或其抗原结合片段包含人重链hfr1-4和/或轻链lfr1-4。[0445]在一些实施方式中，源自人的fr区可以包含与其所源自的人免疫球蛋白相同的氨基酸序列。在一些实施方式中，人fr的一个或多个氨基酸残基由来自亲本非人抗体的对应残基取代。这在某些实施方式中是需要的，以使人源化抗体或其片段密切接近非人亲本抗体结构，以最优化结合特征(例如，增加结合亲和性)。在某些实施方式中，本发明所述的人源化抗体或其抗原结合片段包含在各个人fr序列中不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基取代，或者在重链可变区或轻链可变区的所有fr序列中不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基取代。在一些实施方式中，这种氨基酸残基的变化可能仅存在于重链fr区、仅存在于轻链fr区，或在两条链上都存在。在某些实施方式中，人fr序列的一个或多个氨基酸被随机突变以增加结合亲和性。在某些实施方式中，人fr序列的一个或多个氨基酸被反向突变为亲本非人抗体的相应氨基酸，以增加结合亲和性。[0446]在某些实施方式中，本发明还提供人源化的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段，其包括重链hfr1、重链hfr2、重链hfr3和重链hfr4，其中所述重链hfr1包括如ex62x63lx64esggx65x66x67qpggslx68lscaa(seq id no：355)或qvqlx69qx70gx71ex72x73kx74gx75svkx76sckas(seq id no：356)所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述重链hfr2包括如wvrqx77px78kx79lewvx80(seq id no：357)或wvx81qx82pgqglewx83g(seq id no：358)所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述重链hfr3包括如rftisrdnx84x85ntlx86lqmx87slx88x89edtax90yycax91(seq id no：359)或x93x94tx95tx96dx97sx98x99tx100ymx101lsslx102sedx103avyx104cax105(seq id no：360)所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述重链hfr4包括如wgqgtlvtvsx92(seq id no：361)或wgqgtlvtvsx106(seq id no：362)所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，其中x62是a或v；x63是k或q；x64是v或l；x65是d或g；x66是f或l；x67是m或v；x68是k或r；x69是q或v；x70是p或s；x71是t或a；x72是l或v；x73是v或k；x74是t或p；x75是t或a；x76是l或v；x77是t或a；x78是e或g；x79是r或g；x80是a或s；x81是i或r；x82是r或a；x83是i或m；x84是a或s；x85是r或k；x86是f或y；x87是s或n；x88是q或r；x89是s或a；x90是i或v；x91是t或k；x93是k或r；x94是a或v；x95是l或m；x96是l或r；x97是r或t；x98是s或t；x99是t或s；x100是a或v；x101是q或e；x102是t或r；x103是s或t；x104是f或y；x105是g或r；x92是a或s；x106是a或s。[0447]在某些实施方式中，本发明还提供人源化的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段，其包括轻链lfr1、轻链lfr2、轻链lfr3和轻链lfr4，其中所述轻链lfr1包括如x107ix108x109x110qspx111x112lx113x114x115x116gx117x118x119tx120x121c(seq id no：363)所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述轻链lfr2包括如wyqqkpgx122x123pkx124x125iy(seq id no：364)所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述轻链lfr3包括如gvpx126rfx127gsgsgtx128x129x130ltix131x132x133x134x135edx136ax137yx138c(seq id no：365)所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，所述轻链lfr4包括如fgx139gtklex140k(seq id no：366)所示的序列或与其具有至少80％序列同一性的同源序列，其中x107是q或d；x108是v或q；x109是l或m；x110是s或t；x111是a或s或d；x112是i或f或s；x113是s或t或a；x114是a或v；x115是s或t；x116是p或v或a或l；x117是e或d；x118是k或r；x119是v或a；x120是m或i或l；x121是t或s或n；x122是s或k或q；x123是s或a或p；x124是a或l；x125是w或l；x126是t或s或d；x127是s或t；x128是s或e或d；x129是y或f；x130是s或t；x131是d或s；x132是r或s；x133是v或l；x134是e或q；x135是a或p；x136是a或f或l或v；x137是t或v；x138是y或h；x139是a或q或a或g；x140是l或i。[0448]在某些实施方式中，本发明还提供人源化的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段，其包括重链hfr1、重链hfr2、重链hfr3、重链hfr4，以及轻链lfr1、轻链lfr2、轻链lfr3、轻链lfr4，其中所述重链hfr1包括选自下组的序列：seq id nos：157-161，所述重链hfr2包括选自下组的序列：seq id nos：163-168，所述重链hfr3包括选自下组的序列：seq id nos：170-176，所述重链hfr4包括选自下组的序列：seq id no：178；并且/或者所述轻链lfr1包括选自下组的序列：seq id nos：180-184，所述轻链lfr2包括选自下组的序列：seq id nos：186-189，所述轻链lfr3包括选自下组的序列：seq id nos：191-197，所述轻链lfr4包括选自下组的序列：seq id nos：199-200。[0449]在某些实施方式中，本发明还提供人源化的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体及其抗原结合片段，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括选自下组的序列：seq id nos：311-313、318-321，和与其具有至少80％序列同一性但仍然保持与cldn18的特异性结合亲和性的同源序列；并且/或者所述轻链可变区包括选自下组的序列：seq id nos：314-317、322-324，和与其具有至少80％序列同一性但仍然保持与cldn18的特异性结合亲和性的同源序列。[0450]本发明还提供了35b4的15种示例性人源化抗体，包括：[0451]1)“hu35b4.h1l1”，其包括如hu35b4.h1(seq id no：311)所示的重链可变区和如hu35b4.l1(seq id no：314)所示的轻链可变区；[0452]2)“hu35b4.h1l2”，其包括如hu35b4.h1(seq id no：311)所示的重链可变区和如hu35b4.l2(seq id no：315)所示的轻链可变区；[0453]3)“hu35b4.h1l3”，其包括如hu35b4.h1(seq id no：311)所示的重链可变区和如hu35b4.l3(seq id no：316)所示的轻链可变区；[0454]4)“hu35b4.h1l4”，其包括如hu35b4.h1(seq id no：311)所示的重链可变区和如hu35b4.l4(seq id no：317)所示的轻链可变区；[0455]5)“hu35b4.h1l1s92a”，其包括如hu35b4.h1(seq id no：311)所示的重链可变区和如hu35b4.l1s92a(seq id no：402)所示的轻链可变区；[0456]6)“hu35b4.h2l1”，其包括如hu35b4.h2(seq id no：312)所示的重链可变区和如hu35b4.l1(seq id no：314)所示的轻链可变区；[0457]7)“hu35b4.h2l2”，其包括如hu35b4.h2(seq id no：312)所示的重链可变区和如hu35b4.l2(seq id no：315)所示的轻链可变区；[0458]8)“hu35b4.h2l3”，其包括如hu35b4.h2(seq id no：312)所示的重链可变区和如hu35b4.l3(seq id no：316)所示的轻链可变区；[0459]9)“hu35b4.h2l4”，其包括如hu35b4.h2(seq id no：312)所示的重链可变区和如hu35b4.l4(seq id no：317)所示的轻链可变区；[0460]10)“hu35b4.h2l1s92a”，其包括如hu35b4.h2(seq id no：312)所示的重链可变区和如hu35b4.l1s92a(seq id no：402)所示的轻链可变区；[0461]11)“hu35b4.h3l1”，其包括如hu35b4.h3(seq id no：313)所示的重链可变区和如hu35b4.l1(seq id no：314)所示的轻链可变区；[0462]12)“hu35b4.h3l2”，其包括如hu35b4.h3(seq id no：313)所示的重链可变区和如hu35b4.l2(seq id no：315)所示的轻链可变区；[0463]13)“hu35b4.h3l3”，其包括如hu35b4.h3(seq id no：313)所示的重链可变区和如hu35b4.l3(seq id no：316)所示的轻链可变区；[0464]14)“hu35b4.h3l4”，其包括如hu35b4.h3(seq id no：313)所示的重链可变区和如hu35b4.l4(seq id no：317)所示的轻链可变区；[0465]15)“hu35b4.h3l1s92a”，其包括如hu35b4.h3(seq id no：313)所示的重链可变区和如hu35b4.l1s92a(seq id no：402)所示的轻链可变区。[0466]本发明还提供了22e12的12种示例性人源化抗体，包括：[0467]1)“hu22e12.h1l1”，其包括如hu22e12.h1(seq id no：318)所示的重链可变区和如hu22e12.l1(seq id no：322)所示的轻链可变区；[0468]2)“hu22e12.h1l2”，其包括如hu22e12.h1(seq id no：318)所示的重链可变区和如hu22e12.l2(seq id no：323)所示的轻链可变区；[0469]3)“hu22e12.h1l3”，其包括如hu22e12.h1(seq id no：318)所示的重链可变区和如hu22e12.l3(seq id no：324)所示的轻链可变区；[0470]4)“hu22e12.h2l1”，其包括如hu22e12.h2(seq id no：319)所示的重链可变区和如hu22e12.l1(seq id no：322)所示的轻链可变区；[0471]5)“hu22e12.h2l2”，其包括如hu22e12.h2(seq id no：319)所示的重链可变区和如hu22e12.l2(seq id no：323)所示的轻链可变区；[0472]6)“hu22e12.h2l3”，其包括如hu22e12.h2(seq id no：319)所示的重链可变区和如hu22e12.l3(seq id no：324)所示的轻链可变区；[0473]7)“hu22e12.h3l1”，其包括如hu22e12.h3(seq id no：320)所示的重链可变区和如hu22e12.l1(seq id no：322)所示的轻链可变区；[0474]8)“hu22e12.h3l2”，其包括如hu22e12.h3(seq id no：320)所示的重链可变区和如hu22e12.l2(seq id no：323)所示的轻链可变区；[0475]9)“hu22e12.h3l3”，其包括如hu22e12.h3(seq id no：320)所示的重链可变区和如hu22e12.l3(seq id no：324)所示的轻链可变区；[0476]10)“hu22e12.h4l1”，其包括如hu22e12.h4(seq id no：321)所示的重链可变区和如hu22e12.l1(seq id no：322)所示的轻链可变区；[0477]11)“hu22e12.h4l2”，其包括如hu22e12.h4(seq id no：321)所示的重链可变区和如hu22e12.l2(seq id no：323)所示的轻链可变区；[0478]12)“hu22e12.h4l3”，其包括如hu22e12.h4(seq id no：321)所示的重链可变区和如hu22e12.l3(seq id no：324)所示的轻链可变区。[0479]这些示例性的人源化的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体保留了对cldn18(特别是，抗cldn18.2)的特异性结合能力或亲和性，并且在该方面至少与亲本小鼠抗体35b4或22e12相当或甚至更好。[0480]在某些实施方式中，本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段包括所述重链可变区的全部或一部分，和/或所述轻链可变区的全部或一部分。在某些实施方式中，本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段是单域抗体，其由本发明所述的重链可变区的全部或一部分组成。关于单域抗体的更多信息是本领域已知的(参见，例如，美国专利号6,248,516)。[0481]在某些实施方式中，本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段进一步包括免疫球蛋白(ig)恒定区，其可选地进一步包含重链和/或轻链恒定区。在某些实施方式中，重链恒定区包含ch1、铰链和/或ch2-ch3区(或任选的ch2-ch3-ch4区)。在某些实施方式中，本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段包括人igg1、igg2、igg3、igg4、iga1、iga2或igm的重链恒定区。在某些实施方式中，轻链恒定区包含cκ或cλ。本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段可以与野生型恒定区序列相同或在一个或多个突变点上不同。[0482]在某些实施方式中，所述重链恒定区包括fc区。已知fc区介导效应功能，例如抗体的抗体依赖性细胞毒性(adcc)和补体依赖性细胞毒性(cdc)。不同ig同种型的fc区诱导效应功能的能力不同。例如，已经认识到igg1和igg3的fc区比igg2和igg4的fc区更有效地诱导adcc和cdc。在某些实施方式中，本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段包括igg1或igg3同种型的fc区，其可以诱导adcc或cdc；或者包括igg4或igg2同种型的恒定区，其具有降低的或者耗竭的效应功能。在一些实施方式中，源自人igg1的所述fc区具有增加的效应功能。在一些实施方式中，源自人igg1的所述fc区包括一个或多个选自下组的突变：l235v、g236a、s239d、f243l、h268f、r292p、y300l、v305i、s324t、a330l、i332e和p396l。在一些实施方式中，源自人igg1的所述fc区包括选自下组的突变：(1)g236a、s239d和i332e；(2)s239d、a330l和i332e；(3)s239d和i332e；(4)s239d、h268f、s324t和i332e；(5)f243l、r292p、y300l、v305i和p396l；(6)l235v、f243l、r292p、y300l和p396l。在某些实施方式中，野生型人igg1的氨基酸序列如seq id no：325所示。在某些实施方式中，fc区包括选自下组的氨基酸序列：seq id nos：326-331。seq id nos：325-331的氨基酸序列如下表13所示，每个fc区的突变位置用下划线标出。[0483]表13：野生型人igg1和几个fc区的氨基酸序列[0484][0485][0486]在某些实施方式中，本发明所述的抗体或其片段具有足以用于诊断和/或治疗用途的与人类cldn18.2特异结合的亲和性。[0487]本发明所述的抗体或其片段可以是单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、重组抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、标记抗体、二价抗体、抗独特型抗体或融合蛋白。重组抗体是在体外使用重组方法(而不是在动物体内)制备的抗体。[0488]在某些实施方式中，本发明提供抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段，其与根据本发明所述的抗体或其抗原结合片段竞争与人类cldn18(具体地，cldn18.2)结合。在某些实施方式中，发明提供抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段，其与下述任何一种抗体竞争与人类cldn18(具体地，cldn18.2)结合：99h8、99g8、99a7、97a9、84e8、83h3、80f10、79c3、78h6、73e4、69b2、68e9、68d1、66e6、66e12、64c1、64c10、61a5、60f11、59g12、59f5、59e7、56b2、54f5、38b9、35b4、35a10、33g12、22e12、15e10、100f4、40c1、41b3、66d7-1、66d7-2、51g10、365f6、360c2、319f2、317a7、315f10、314d7、310h5、308e8、305g8、256c10-1、256c10-2、248d9、246b8、243a8、242g5、237e3、226e9、226d5、217b5、214e4、213a9、206c7、203d12或203a5。[0489]在一些实施方式中，本发明提供的cldn18为人类cldn18.2。在一些实施方式中，cldn18为人类cldn18.2，其包括如seq id no：401所示的氨基酸序列，如下表14所示。[0490]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(具体地，cldn18.2)抗体或其抗原结合片段不是imab362。[0491]本发明所使用的“imab362”是指包含重链可变区和轻链可变区的抗体或其抗原结合片段，所述重链可变区具有如seq id no：397所示的氨基酸序列，所述轻链可变区具有如seq id no：398所示的氨基酸序列。imab362的全长重链和全长轻链的氨基酸序列分别如seq id no：399和400所示。seq id nos：397-400的氨基酸序列如下表14所示。[0492]表14：seq id nos：397-401的氨基酸序列[0493][0494][0495]抗体变体[0496]本发明提供的抗体及其抗原结合片段还包含本发明提供的抗体序列的多种变体。[0497]在某些实施方式中，抗体变体在以上的表2所示的一个或多个cdr序列中、以上的表3所示的本发明所述的重链可变区或轻链可变区序列的一个或多个非cdr序列中和/或恒定区(例如，fc区)中包含一个或多个修饰或取代。这些抗体变体保持其亲本与cldn18(具体地，cldn18.2)特异结合的亲和性，但具有一种或多种所述修饰或取代带来的所需要的特性。例如所述抗体变体可以具有改善的抗原结合亲和性、改善的糖基化模式、降低的糖基化风险、减少的脱氨基作用、增强的效应功能、改善的fcrn受体结合、提高的药代动力学半衰期、ph敏感性，和/或对缀合的兼容性(例如一个或多个引入的半胱氨酸残基)。[0498]可以使用本领域公知的方法，例如“丙氨酸扫描诱变”，筛选亲本抗体序列以识别合适的或优选的待修饰或取代的残基(参见，例如cunningham and wells，(1989)science，244：1081-1085)。简要地说，可以识别靶标残基(例如带电的残基，如arg、asp、his、lys和glu)并由不带电的或带负电的氨基酸(例如丙氨酸或聚丙氨酸)取代，产生被修饰的抗体，并且针对目标特性对其进行筛选。如果在一个特定的氨基酸位置上的取代表现出了目标功能性改变，则该位置可以被识别为潜在的用于修饰或取代的残基。可以通过用另一种残基(例如半胱氨酸残基、带正电荷的残基等)取代来进一步评估所述潜在的残基。[0499]亲和性变体[0500]抗体的亲和性变体可以在以上的表2所示的一个或多个cdr序列、以上的表4、8和12所示的一个或多个fr序列，或者以上的表3、6和10所示的重链或轻链可变区序列中包含修饰或取代。本领域技术人员基于以上的表2中的cdr序列以及以上的表3、6和10中的可变区序列可以容易地确定fr序列，因为在本领域中众所周知，在可变区中，cdr区的两侧是两个fr区。所述亲和性变体保持亲本抗体的与cldn18(具体地，cldn18.2)特异性结合的亲和性，或者甚至相对于亲本抗体具有改进的与cldn18特异性结合的亲和性。在某些实施方式中，cdr序列、fr序列或可变区序列中的至少一个(或全部)取代包含保守取代。[0501]本领域技术人员将理解，在以上的表2所提供的cdr序列、在以上的表3、6和10提供的可变区序列中，一个或多个氨基酸残基可以被取代，而得到的抗体或抗原结合片段仍然保持与cldn18(具体地，cldn18.2)的结合亲和性或结合能力，或甚至具有改进的结合亲和性或能力。可以使用本领域公知的各种方法来达到这一目的。例如，可以生成抗体变体库(例如，fab或scfv变体)，并用噬菌体展示技术表达，随后针对与人类cldn18(具体地，cldn18.2)结合的亲和性对其进行筛选。又例如，可以使用电脑软件虚拟抗体与人类cldn18(具体地，cldn18.2)的结合，并识别抗体上形成结合界面的氨基酸残基。在取代中可以避开这些残基以防止结合亲和性的降低，或者可以做为取代的靶标以获得更强的结合。[0502]在某些实施方式中，本发明所述的人源化抗体或其抗原结合片段在一个或多个cdr序列中和/或一个或多个fr序列中包含一个或多个氨基酸残基取代。在某些实施方式中，亲和性变体在cdr序列和/或fr序列中包含总共不超过20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个取代。[0503]在某些实施方式中，所述抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段包含1、2或3个cdr序列，所述cdr序列与以上的表2中列出的序列具有至少80％(例如，至少85％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)的序列同一性，而同rl.et al.，j biol chem.2001.276(9)：6591-604；idusogie ee.et al.，j immunol.2000.164(8)：4178-84；steurer w.et al.，j immunol.1995，155(3)：1165-74；idusogie ee.et al.，j immunol.2001，166(4)：2571-5；lazar ga.et al.，pnas,2006,103(11)：4005-4010；ryan mc.et al.，mol.cancer ther.，2007,6：3009-3018；richards jo,.et al.，mol cancer ther.2008，7(8)：2517-27；shields r.l.et al.，j.biol.chem，2002，277：26733-26740；shinkawa t.et al.，j.biol.chem，2003,278：3466-3473。[0514]本发明提供的抗体或抗原结合片段的cdc活性也可以例如通过改善或减少c1q结合和/或cdc而改变(参见，例如wo99/51642；duncan&winter nature322：738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821)；和关于fc区变体的其他实例的wo94/29351。可以将选自fc区的氨基酸残基329、331和322的一个或多个氨基酸替换为不同的氨基酸残基，以改变c1q结合和/或减少或消除补体依赖性细胞毒性(cdc)(参见idusogie等人的美国专利号6,194,551)。也可以引入一个或多个氨基酸取代，以改变抗体固定补体的能力(参见bodmer等人的pct公开号wo94/29351)。[0515]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段具有增强的效应功能(例如，增强的adcc活性)，并且在人igg1选自下组的位点中包含一个或多个氨基酸取代：235、236、239、243、268、292、300、305、324、330、332和396(根据imgt编号)。在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段是igg1同种型，并且包含一个或多个选自下组的氨基酸取代：l235v、g236a、s239d、f243l、h268f、r292p、y300l、v305i、s324t、a330l、i332e和p396l(根据imgt编号)及其任何组合。在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18抗体(特别是，抗cldn18.2抗体)或其抗原结合片段为igg1同种型，并包含选自下组的突变(根据imgt编号)：(1)g236a、s239d和i332e；(2)s239d、a330l和i332e；(3)s239d和i332e；(4)s239d、h268f、s324t和i332e；(5)f243l、r292p、y300l、v305i和p396l；(6)l235v、f243l、r292p、y300l和p396l。[0516]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段包含一个或多个氨基酸取代，所述氨基酸取代可以改善与新生儿fc受体(fcrn)的ph依赖性结合。这样的变体可以具有延长的药代动力学半衰期，因为它在酸性ph下与fcrn结合，使其得以免于在溶酶体中降解，并且随后被转移并释放到细胞外。经改造的抗体或其抗原结合片段以改善与fcrn的结合亲和性的方法是本领域公知的，参见，例如，vaughn,d.et al.，structure，6(1)：63-73，1998；kontermann,r.et al.，antibody engineering，volume 1，chapter 27：engineering of the fc region for improved pk，published by springer，2010；yeung，y.et al.，cancer research，70：3269-3277(2010)；and hinton，p.et al.，j.immunology，176：346-356(2006)。[0517]在某些实施方式中，所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或抗原结合片段包含位于fc区界面的一个或多个氨基酸取代，以便于和/或促进异二聚体化。这些修饰包括将突起引入至第一fc多肽，以及将空腔引入第二fc多肽，其中所述突起可位于所述空腔内，以促进所述第一和第二fc多肽的相互作用，以形成异二聚体或复合体。产生具有这些修饰的抗体的方法是本领域公知的，例如，如美国专利号5,731,168所述。[0518]抗原结合片段[0519]本发明还提供了抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗原结合片段。抗原结合片段的多种类型是本领域公知的，并且可基于本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体进行研发，包括示例性抗体，其cdr示于上述的表2中，其可变区序列示于上述的表3、6和10中，及其不同的变体(例如，亲和力变体、糖基化变体、fc变体、半胱氨酸改造的抗体等等)。[0520]在某些实施方式中，本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗原结合片段是双功能抗体(diabody)、fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv片段、二硫键稳定的fv片段(dsfv)、(dsfv)2、双特异性dsfv(dsfv－dsfv’)、二硫键稳定的双功能抗体(ds diabody)、单链抗体分子(scfv)、scfv二聚体(双价的双功能抗体)、多特异性抗体、骆驼化单域抗体(camelized single domain antibody)、纳米抗体(nanobody)、域抗体(domain antibody)和双价域抗体。[0521]多种技术可用于这种抗原结合片段的生产。示例性的方法包括对完整抗体进行酶消化(参见例如morimoto et al.，journal of biochemical and biophysical methods 24：107-117(1992)、由宿主细胞(如大肠杆菌)重组表达(例如对于fab、fv和scfv抗体片段)、如上文讨论的噬菌体展示文库筛选(例如对于scfv)，以及化学耦合两个fab’‑sh片段以形成f(ab’)2片段(carter et al.,bio/technology10：163-167(1992))。生产抗体片段的其它技术对于本领域技术人员将是显而易见的。[0522]在某些实施方式中，所述抗原结合片段是scfv。scfv的生成记述于例如wo 93/16185；美国专利号5571894和5587458。scfv可以在氨基末端或羧基末端与效应蛋白融合以获得融合蛋白(参见例如antibody engineering,ed.borrebaeck编)。[0523]在某些实施方式中，本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段是二价、四价、六价或多价的。任何大于二价的分子被认为是多价的，包括例如三价、四价、六价等。[0524]如果两个结合位点均能特异性结合相同抗原或相同表位，则二价分子可以是单特异性的。在某种实施方式中，这提供了比对应的单价分子更强的与抗原或表位的结合。类似地，多价分子也可以是单特异性的。在某些实施方式中，在二价或多价抗原结合部分中，结合位点的第一价和结合位点的第二价在结构上相同(即，具有相同的序列)或在结构上不同(即，具有不同的序列，但具有相同的特异性)。[0525]如果两个结合位点对不同的抗原或表位具有特异性，则二价也可以是双特异性的。这也适用于多价分子。例如，当两个结合位点对于第一抗原(或表位)来说是单特异性的，而第三结合位点对第二抗原(或表位)来说是特异性时，三价分子可以是双特异性的。[0526]双特异性抗体[0527]在某些实施方式中，所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段是双特异性的。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段进一步与具有不同于所述cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段的结合特异性的第二功能部分连接。[0528]在某些实施方式中，本发明提供的双特异性抗体或其抗原结合片段能够特异性结合至除cldn18(特别是，cldn18.2)以外的第二抗原或cldn18(特别是，cldn18.2)上的第二表位。在某些实施方式中，所述第二抗原选自下组：egfr、fgfr、vegf、ox40、cd3、cd37、c-met、her2、cd19、cd20、cd39、sirpα、tgfbeta、cd73、pd1、pdl1、4-1bb、ctla4、tigit、gita、vista、tigit、b7-h3、b7-h4、b7-h5、cd112r、siglec-15、lag3和tim-3。在某些实施方式中，本发明提供的双特异性抗体或其抗原结合片段能够特异性地结合cldn18(具体地，cldn18.2)和sirpα。在某些实施方式中，本发明提供的双特异性抗体或其抗原结合片段能够特异性地结合cldn18(具体地，cldn18.2)和cd39。[0529]缀合物[0530]在一些实施方式中，所述抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段还包括一个或多个缀合物部分。所述缀合物部分可以连接到所述抗体或其抗原结合片段。缀合物部分是可以附接至所述抗体或其抗原结合片段的部分。可以设想，本发明所述的抗体或其抗原结合片段可以与多种缀合物部分连接(参见例如“conjugate vaccines”，contributions to microbiology and immunology，j.m.cruse and r.e.lewis,jr.(eds.)，carger press，new york，(1989))。这些缀合物部分可以通过共价结合(例如，二硫键)、亲和结合、嵌入、协同结合(coordinate binding)、络合(complexation)、结合(association)、混合(blending)或加入(addition)等其他方式与所述抗体或其抗原结合片段连接。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段经连接子或交联剂与一个或多个缀合物连接。连接子或交联剂包含可和抗-cldn18抗体或其片段反应的反应性化学基团。所述反应性化学基团可以是n-琥珀酰亚胺基酯和n-磺基琥珀酰亚胺基酯。另外，连接子包含反应性化学基团，其可以是可和药物反应以形成二硫键的二硫吡啶基。连接子包括例如n-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(spdp)(例如参见carlsson et al.,biochem.j.,173:723-737(1978))、n-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(spdb)(例如参见美国专利no.4,563,304)、n-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)2-磺基丁酸酯(磺基-spdb)(参见美国公开号20090274713)、n-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(spp)(例如参见cas注册号341498-08-6)、2-亚氨基硫烷，或乙酰琥珀酸酸酐。例如，抗体或细胞结合剂可以使用交联试剂和含有游离或保护的巯基的抗体或细胞结合剂来修饰，并因此然后衍生，和二硫化物或含巯基的美登醇反应以制备缀合物。缀合物可以通过色谱法纯化，包括但不限于hplc、空间排阻、吸附、离子交换和亲和捕获、渗析或切向流过滤。[0531]在某些实施方式中，本发明中提供的抗体或其抗原结合片段可以进行改造以在表位结合部分之外含有特定位点，所述特定位点可以用于与一个或多个缀合物部分结合。例如，该位点可以包括一个或多个反应性的氨基酸残基(例如半胱氨酸或组氨酸残基)，以便于与缀合物部分的共价连接。[0532]在某些是实施方式中，本发明中提供的抗体或其抗原结合片段可以间接地或通过另一缀合物部分与缀合物部分连接。例如，本发明提供的抗体或其抗原结合片段可以与生物素缀合，然后间接地与第二缀合物缀合，所述第二缀合物与抗生物素蛋白缀合。在某些实施方式中，所述缀合物部分包括清除修饰剂(例如，延长半衰期的聚合物(例如peg))、化疗剂、毒素、放射性同位素、镧系元素、可检测标记(例如，发光标记、荧光标记、酶底物标记)、dna烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白结合剂、纯化部分或其他抗癌药物(例如，toll样受体7(tlr-7)激动剂、toll样受体8(tlr-8)激动剂和/或toll样受体9(tlr-9)激动剂、sirna、抗体或其抗原结合片段、肽(例如，短肽)等)。[0533]“毒素”可以是对细胞有害或可以损害或杀死细胞的任何试剂。毒素的示例包括但不限于：紫杉醇、紫杉烷类、cc-1065和cc-1065类似物、双癌霉素(duocarmycins)和双癌霉素类似物、烯二炔类抗生素(例如，卡奇霉素)、多拉司他汀和多拉司他汀类似物(包括澳瑞他汀类)、托马霉素(tomaymycin)衍生物、来普霉素(leptomycin)衍生物、顺铂、卡铂、柔红霉素(daunorubicin)、多柔比星、阿霉素(doxorubicin)、长春新碱、长春碱、美法仑、丝裂霉素c、苯丁酸氮芥、吗啉代阿霉素、细胞松弛素b、短杆菌肽d、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊甙、长春新碱、mmae、mmaf、dm1、dm4、长春碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素d、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素及其类似物、抗代谢物(例如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪)、烷化剂(例如氮芥、塞替派苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、美法仑、卡莫司汀(bsnu)和洛莫司汀(ccnu)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素c和二氯二胺铂(ii)(ddp)顺铂)、蒽环类抗生素(例如柔红霉素(以前的道诺霉素)和阿霉素)、抗生素(例如更生霉素(以前称为放线菌素)、博来霉素、光神霉素和氨茴霉素(amc))、抗有丝分裂剂(例如长春新碱和长春碱)、拓扑异构酶抑制剂和微管蛋白结合剂。[0534]可检测标记的实例可以包括荧光标记(例如荧光素、罗丹明、丹磺酰、藻红蛋白或德克萨斯红)、酶-底物标记(例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、荧光素酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶或β-d-半乳糖苷酶)、放射性同位素(例如123i、124i、125i、131i、35s、3h、111in、112in、14c、64cu、67cu、86y、88y、90y、177lu、211at、186re、188re、153sm、212bi和32p、其他镧系元素)、发光标记、发色团部分、地高辛、生物素/亲和素、dna分子或用于检测的金。[0535]在某些实施方式中，缀合物部分可以是清除修饰剂，其有助于增加抗体的半衰期。说明性实例包括水溶性聚合物(例如peg、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇/丙二醇共聚物等)。该聚合物可以具有任何分子量，并且可以是支链或非支链的。连接至抗体的聚合物的数量可以变化，并且如果连接的聚合物多于一种，则它们可以是相同或不同的分子。[0536]在某些实施方式中，缀合物部分可以是纯化部分，例如磁珠。[0537]在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段用作缀合物的基础。[0538]在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段与信号肽结合。信号肽(有时称为信号序列、先导序列或先导肽)可用于促进本发明提供的抗体或其抗原结合片段的分泌和分离。信号肽的典型特征是疏水性氨基酸的核心，在一个或多个裂解事件中，这些氨基酸通常在分泌期间从成熟蛋白质中裂解。这类信号肽含有加工位点，当成熟蛋白质通过分泌途径时，这些加工位点允许从成熟蛋白质中切割信号序列。因此，本发明涉及所述具有信号序列的多肽，以及信号序列已被蛋白质水解切割的多肽(即，切割产物)。在一个实施方式中，编码信号序列的核酸序列可在表达载体中可操作地连接到感兴趣的蛋白质，例如通常不分泌或难以分离的蛋白质。信号序列指导蛋白质的分泌，例如从表达载体转化到的真核宿主，并且随后或同时切割信号序列。然后可以通过本领域认可的方法从细胞外培养基中容易地纯化蛋白质。或者，可以使用有助于纯化的序列(例如gst结构域)将信号序列连接到感兴趣的蛋白质。在一些实施方式中，本发明中使用的信号肽具有选自seq id nos：368-396组成的组的氨基酸序列，其序列如下表15所示。[0539]表15：信号肽的氨基酸序列[0540][0541]在一些实施方式中，本发明提供的与信号肽缀合的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含选自下组的序列：seq id nos：403-457，所述轻链可变区包含选自下组的序列：seq id nos：458-508。由此产生的抗体在本文中称为sg100f4、sg15e10等，其中前缀“sg”表示“信号肽”，后缀表示单克隆抗体，例如，“100f4”表示它来自单克隆抗体100f4，其中抗体100f4的vh和vl的n-末端分别与信号肽缀合。seq id nos：403-508的氨基酸序列如下表16所示，信号肽用下划线示出。[0542]表16：示例性抗体(包含信号肽)的氨基酸序列[0543][0544][0545][0546][0547][0548][0549][0550][0551][0552][0553][0554][0555][0556][0557]多核苷酸和重组方法[0558]本发明提供编码所述抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段的分离的多核苷酸。本发明所用的术语“核酸”或“多核苷酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核酸(dna)或核糖核酸(rna)及其聚合物。除非另有说明，否则特定的多核苷酸序列还隐含地涵盖其保守修饰的变体(例如简并的密码子取代)、等位基因、直向同源物、snp和互补序列以及明确指出的序列。具体而言，简并的密码子取代可通过产生这样的序列来实现：其中一个或多个选定的(或全部)密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代(参见batzer et al.，nucleic acid res.19：5081(1991)；ohtsuka et al.，j.biol.chem.260：2605-2608(1985)；和rossolini et al.，mol.cell.probes 8：91-98(1994))。[0559]使用传统的步骤，可以容易地对编码所述单克隆抗体的dna进行分离和测序(例如通过使用能够与编码所述抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。编码dna也可以通过合成方法获得。[0560]使用本领域公知的重组技术，可以将编码本发明提供的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段的分离的多核苷酸插入载体，用于进一步的克隆(dna的扩增)或用于表达。有多种载体可供选择。载体组分通常包括但不限于下列的一种或多种：信号序列、复制起始点、一种或多种标记基因、增强子元件、启动子(例如sv40、cmv、ef-1α)和转录终止序列。[0561]本发明提供包括分离的多核苷酸的载体。在某些实施方式中，本发明提供的多核苷酸编码抗体或其抗原结合片段、与核酸序列可操作连接的至少一种启动子(例如sv40、cmv、ef-1α)和至少一种选择标记。载体的实例包括但不限于：逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳多空病毒(例如sv40)、λ噬菌体和m13噬菌体、质粒pcdna3.3、pmd18-t、poptivec、pcmv、pegfp、pires、pqd-hyg-gseu、palter、pbad、pcdna、pcal、pl、pet、pgemex、pgex、pci、pegft、psv2、pfuse、pvitro、pvivo、pmal、pmono、pselect、puno、pduo、psg5l、pbabe、pwpxl、pbi、p15tv-l、ppro18、ptd、prs10、plexa、pact2.2、pcmv-script.rtm.、pcdm8、pcdna1.1/amp、pcdna3.1、prc/rsv、pcr 2.1、pef-1、pfb、psg5、pxt1、pcdef3、psvsport、pef-bos等。[0562]可以将包含编码所述抗体或其抗原结合片段的多核苷酸序列的载体引入宿主细胞，用于克隆或基因表达。适用于克隆或表达本发明中所述的载体中的dna的宿主细胞为上述的原核、酵母或高等真核细胞。适用于本发明用途的原核细胞包括真细菌，如革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌，例如，肠杆菌科(enterobacteriaceae)，例如，埃希氏菌属(escherichia)(例如，大肠杆菌(e.coli))、肠杆菌属(enterobacter)、欧文氏菌属(erwinia)、克雷白氏杆菌属(klebsiella)、变形杆菌属(proteus)、沙门氏菌属(salmonella)(例如，鼠伤寒沙门(氏)杆菌(salmonella typhimurium))、沙雷氏菌属(serratia)(例如，粘质沙雷氏菌(serratia marcescans))、志贺氏菌属(shigella)、杆菌属(bacilli)(例如，枯草芽孢杆菌(b.subtilis)和地衣芽孢杆菌(b.licheniformis))、假单胞菌属(pseudomonas)(例如，绿脓杆菌(p.aeruginosa)、以及链霉菌属(streptomyces)。[0563]除了原核细胞以外，真核微生物如丝状真菌或酵母也可用作编码抗cldn18抗体(特别是，抗cldn18.2抗体)的载体的合适的克隆或表达宿主。酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)，或面包酵母是最常用的低等真核宿主微生物。但是，许多其他属、种和株都比较常用且在本发明中适用，例如，粟酒裂殖酵母(schizosaccharomyces pombe)；克鲁维酵母属(kluyveromyces)宿主，例如，乳酸克鲁维酵母(k.lactis)、脆壁克鲁维酵母(k.fragilis)(atcc 12,424)、保加利亚克鲁维酵母(k.bulgaricus)(atcc 16,045)、魏氏克鲁维酵母(k.wickeramii)(atcc 24,178)、克鲁雄酵母(k.waltii)(atcc 56,500)、果蝇克鲁维酵母(k.drosophilarum)(atcc 36,906)、耐热克鲁维酵母(k.thermotolerans)和马克斯克鲁维酵母(k.marxianus)；解脂耶氏酵母(yarrowia)(ep 402,226)；巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)(ep 183,070)；假丝酵母(candida)；里氏木霉(trichoderma reesia)(ep 244,234)；链孢霉(neurospora crassa)；西方许旺酵母(schwanniomyces)，例如，西方许旺酵母(schwanniomyces occidentali)；和丝状真菌，例如，脉孢菌(neurospora)、青霉菌(penicillium)、弯颈霉(tolypocladium)和曲霉菌(aspergillus)(例如，钩巢曲霉(a.nidulans)和黑曲霉(a.niger))。[0564]本发明中提供的适用于表达糖基化抗体或其抗原结合片段的宿主细胞由多细胞生物衍生得到。无脊椎细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已发现多种杆状病毒株(baculoviral strains)及其变体以及对应的许可性昆虫宿主细胞(permissive insect host cells)，来自于诸如以下的宿主：草地夜蛾(spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃及斑蚊(aedes aegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(drosophila melanogaster)(果蝇)及家蚕(bombyx mori)。多种用于转染的病毒株为公众可得，例如苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(autographa californica npv)的l-1变种，以及家蚕核型多角体病毒(bombyx mori npv)的bm-5变种，这些病毒都可在本发明中使用，特别是用于转染草地夜蛾(spodoptera frugiperda)细胞。棉花、玉米、土豆、大豆、矮牵牛花、西红柿和烟草的植物细胞培养也可用作宿主。[0565]但是，最感兴趣的是脊椎细胞，且脊椎细胞的培养(组织培养)已经成为常规操作。可用的哺乳动物宿主细胞实例有，sv40转化的猴肾细胞cv1系(cos-7,atcc crl 1651)；人胚胎肾细胞系(293或悬浮培养的293细胞亚克隆，graham et al.,j.gen virol.36：59(1977))；幼地鼠肾细胞(bhk,atcc ccl 10)；中国仓鼠卵巢细胞/-dhfr(cho,urlaub et al.,proc.natl.acad.sci.usa 77：4216(1980))；小鼠睾丸支持细胞(tm4,mather,biol.reprod.23：243-251(1980))；猴肾细胞(cv1 atcc ccl 70)；非洲绿猴肾细胞(vero-76,atcc crl-1587)；人宫颈癌细胞(hela,atcc ccl 2)；犬肾细胞(mdck,atcc ccl 34)；布法罗大鼠肝细胞(brl 3a,atcc crl 1442)；人肺细胞(w138,atcc ccl 75)；人肝细胞(hep g2,hb 8065)；小鼠乳腺瘤(mmt 060562,atcc ccl51)；tri细胞(mather et al.,annals n.y.acad.sci.383：44-68(1982))；mrc 5细胞；fs4细胞；及人肝癌细胞系(hep g2)。在某些实施方式中，所述宿主细胞是哺乳动物培养的细胞系，例如cho、bhk、ns0、293、mfc、snu620及其衍生物。[0566]用上述的可产生抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体的表达或克隆载体转化宿主细胞，并将其在常规的营养培养基中培养，所述营养培养基经修饰后适宜于诱导启动子、选择转化细胞或扩增编码目的序列的基因。在另一实施方式中，所述抗体可通过本领域公知的同源重组的方法制得。在某些实施方式中，所述宿主细胞能够产生本发明中的抗体或其抗原结合片段。[0567]本发明还提供了一种表达本发明的抗体或其抗原结合片段的方法，包括在表达本发明所述的载体的条件下培养本发明提供的宿主细胞。本发明中用于产生所述抗体或其抗原结合片段的宿主细胞可在多种培养基中培养。市售的培养基如ham’s f10(sigma)、最低基本培液(mem)(sigma)、rpmi-1640(sigma)及dulbecco’s modified eagle’s medium(dmem)(sigma)可用于培养所述宿主细胞。另外，任何在ham et al.，meth.enz.58：44(1979)，barnes et al.，anal.biochem.102：255(1980)，美国专利号4,767,704、4,657,866、4,927,762、4,560,655或5,122,469、wo 90/03430、wo 87/00195或美国专利号re.30,985中描述的培养基都可以用作所述宿主细胞的培养基。这些培养基都可添加必要的激素和/或其他生长因子(如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐类(如氯化钠、氯化钙、氯化镁和磷酸盐)、缓冲液(如hepes)、核苷酸(如腺苷酸和胸腺嘧啶)、抗生素(如庆大霉素)、微量元素(定义为终浓度通常在微摩尔范围无机化合物)，和葡萄糖或与之等同的能量源。所述培养基还可含有本领域公知的适当浓度的任何其他必要的添加剂。所述培养基的条件，如温度、ph值等类似条件，为选择用于表达的宿主细胞此前所使用的条件，为普通技术人员所熟知。[0568]使用重组技术时，可以在壁膜间隙细胞内产生抗体，或者直接分泌进入基质。如果在细胞内产生抗体，则第一步是移除颗粒碎片(宿主细胞或裂解的片段)，例如通过离心或超滤。carter et al.，bio/technology 10：163-167(1992)描述了将分泌至大肠杆菌的壁膜间隙的抗体分离的方法。简要地说，在乙酸钠(ph 3.5)、edta和苯甲基磺酰氟(pmsf)的存在下将细胞浆解冻30分钟以上。可以通过离心移除细胞碎片。抗体分泌进入基质时，通常首先使用市售的蛋白浓缩过滤器，例如amicon或millipore pellicon超滤装置，将来自该表达系统的上清浓缩。任何前述步骤可以包括蛋白酶抑制剂，如pmsf，以抑制蛋白水解，并且可以包括抗生素，以防止偶然污染物的生长。[0569]从所述细胞中制得的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段可采用纯化方法进行纯化，例如羟磷灰石色谱、凝胶电泳、透析、deae-纤维素离子交换色谱柱、硫酸铵沉淀、盐析以及亲和色谱，其中亲合色谱为优选的纯化技术。[0570]在某些实施方式中，固定于固相的蛋白a用于所述抗体及其抗原结合片段的免疫亲和纯化。所述抗体的种类以及所述抗体中存在任何免疫球蛋白的fc结构域决定了蛋白a作为亲和配体是否适合。蛋白a可用于纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(lindmark et al.，j.immunol.meth.62：1-13(1983))。蛋白g适用于所有鼠源同种型和人γ3(guss et al.，embo j.5：1567 1575(1986))。琼脂糖是最常用的亲和配体附着基质，但也可选用其他基质。机械力稳定的基质如可控孔度玻璃或聚(苯乙烯)苯与用琼脂糖相比可实现更快的流速和更短的处理时间。如该抗体含有ch3结构域，则可用bakerbond abxtm树脂进行纯化(j.t.baker，phillipsburg,n.j.)。也可根据需要获得的抗体确定其他蛋白纯化的技术，如离子交换柱中的分馏、乙醇沉淀、反相hplc、硅胶色谱、基于阴离子或阳离子交换树脂的肝素琼脂糖凝胶色谱(如聚天冬氨酸柱)、层析聚焦、sds-page、以及硫酸铵沉淀。[0571]在任何初步纯化步骤之后，可用低ph疏水相互作用色谱的方法处理包含目标抗体和杂质的混合物，用ph约2.5-4.5的洗涤缓冲液，优选地在低盐浓度下进行(例如，从约0到0.25m盐浓度)。[0572]药物组合物[0573]本发明进一步提供包含本发明所述的抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段的药物组合物，和一个或多个药学上可接受的运载体。[0574]用于本发明中公开的药物组合物的药学上可接受的运载体可包括，例如，药学上可接受的液体、凝胶或固体载剂、水相溶媒、非水相溶媒、抗微生物物质、等渗物质、缓冲液、抗氧化剂、麻醉剂、悬浮剂/分散剂、螯合剂、稀释剂、佐剂、辅料或无毒辅助物质，其他本领域公知的组分或以上的多种组合。[0575]适用的组分可包括，例如，抗氧剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、缓冲液、防腐剂、润滑剂、搅味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂或稳定剂例如糖和环糊精。适用的抗氧剂可包括，例如，甲硫氨酸、抗坏血酸、edta、硫代硫酸钠、铂、过氧化氢酶、柠檬酸、半胱氨酸、巯基甘油、巯基乙酸、巯基山梨醇、丁基甲基茴香醚、丁基化羟基甲苯和/或没食子酸丙酯。如本发明所公开，在包含本发明公开的抗体或其抗原结合片段的组合物中包括一种或多种抗氧剂如甲硫氨酸，可降低所述抗体或其抗原结合片段的氧化。对氧化作用的减少可防止或减少结合亲和力的降低，从而提高抗体稳定性并延长保质期。因此，在某些实施方式中，本发明提供的药物组合物中包含一种或多种本发明所述的抗体或其抗原结合片段以及一种或多种抗氧化剂例如甲硫氨酸。本发明进一步提供多种防止所述抗体或其抗原结合片段氧化、延长其保质期和/或提高其活性的方法，例如，通过将本发明中提供的抗体或其抗原结合片段与一种或多种抗氧剂(例如，甲硫氨酸)混合来实现。[0576]进一步的说，药学上可接受的运载体可包括，例如，水相介质如氯化钠注射液、林格氏液注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、或葡萄糖和乳酸林格注射液、非水介质例如：植物来源的不挥发性油、棉花子油、玉米油、芝麻油、或者花生油、细菌抑制或真菌抑制浓度下的抗菌物质、等渗剂如：氯化钠或葡萄糖、缓冲液如：磷酸盐或枸橼酸酸盐缓冲液，抗氧化剂如：硫酸氢钠，局部麻醉剂如：盐酸普鲁卡因，助悬剂和分散剂如：羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮，乳化剂如：聚山梨醇酯80(吐温-80)、螯合试剂如edta(乙二胺四乙酸)或egta(乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸)、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。作为运载体的抗菌剂可加入多剂量容器中的药物组合物中，其包括酚类或甲酚、汞制剂、苯甲醇、氯代丁醇、甲基和丙基对羟基苯甲酸酯、噻汞撒、氯苯甲烷铵和氯苯乙铵。适用的辅料可包括，例如，水、盐、葡萄糖、甘油或乙醇。适用的无毒辅助物质可包括，例如，润湿剂、乳化剂、ph缓冲剂、稳定剂、增溶剂，或者醋酸钠、去水山梨糖醇月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯或者环糊精之类的物质。[0577]所述药物组合物可以是液体溶液、悬浮液、乳剂、丸剂、胶囊、片剂、持续释放制剂或粉末。口服制剂可以包括标准运载体如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。[0578]在某些实施方式中，所述药物组合物被制剂成可注射的组合物。可注射的药物组合物可以任何常规的形式制备，例如，液体溶剂、悬浮剂、乳化剂或适用于产生液体溶剂、悬浮剂或乳化剂的固体形式。注射制剂可包括现用的无菌和/或无热原溶液、使用前现与溶剂结合的无菌干燥的可溶物，如冻干粉，包括皮下片、注射即用的无菌悬浮剂、使用前现与介质结合的无菌干燥不溶产品，和无菌和/或无热原的乳剂。溶剂可以为水相或非水相。[0579]在某些实施方式中，单位剂量的注射制剂包装在一个安瓿、一支管或一支带有针的针筒中。本领域习知，所有注射给药的制剂应为无菌无热原。[0580]在某些实施方式中，通过将本发明中公开的抗体或其抗原结合片段溶解于某适当的溶剂中可制备无菌冻干的粉末。所述溶剂可含有一种可提高粉末或由粉末制得的重组溶液的稳定性，或改善粉末或重组溶液的其他药理组分。适用的辅料包括，但不限于，水、葡萄糖、三梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他适用的物质。溶剂可含有缓冲液，如枸橼酸缓冲液、磷酸钠或磷酸钾缓冲液或其他本技术人员公知的缓冲液，在一种实施方式中，缓冲液的ph为中性。在本领域公知的标准条件下进行对所述溶解进行随后的过滤除菌，然后冻干制得理想的制剂。在一种实施方式中，将所得的溶剂分装至小管中冻干。每支小管可容纳单次剂量或多次剂量的所述抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段或其组合物。每支小管中的装入量可略微高于每次剂量所需或多次剂量所需(例如10％过量)，从而保证取样精确和给药精确。冻干粉可在适当的条件下储存，如在约4℃到室温范围。[0581]用注射用水将冻干粉重溶得到用于注射给药的制剂。在一种实施方式中，可将冻干粉加至无菌无热原水或其他适用的液体载剂中重溶。精确的量由选择的疗法决定，可根据经验值决定。[0582]嵌合抗原受体[0583]在某些实施方式中，本发明提供了一种嵌合抗原受体，其包括本发明提供的抗体或其抗原结合片段，跨膜区和细胞内信号区。[0584]本发明中使用的术语“嵌合抗原受体”或“car”或“cars”是指将抗原特异性移植到细胞(例如，t细胞，如初始t细胞、中枢记忆t细胞、效应记忆t细胞、调节性t细胞或其组合)上的工程受体。car也称为人工t细胞受体、嵌合t细胞受体或嵌合免疫受体。在一些实施方式中，car包含抗原特异性靶向区(例如，如本文所提供的抗cldn18抗体的抗原结合片段)、细胞外区、跨膜区、一个或多个共刺激区和细胞内信号区。[0585]在一些实施方式中，抗原特异性靶向区域为scfv。在一些实施方式中，跨膜区域包括cd3、cd4、cd8或cd28的跨膜区域。在一些实施方式中，共刺激区包括cd28、icos、cd27、4-1bb、ox40和cd40l的共刺激结构域。在一些实施方式中，细胞内信号区选自下组：cd3、cd27、cd28、cd137、cd134、myd88、cd40、cd278、tlrs的细胞内信号区序列或其组合。[0586]试剂盒[0587]在某些实施方式中，本发明提供了一种试剂盒，其包含本发明提供的抗体或其抗原结合片段和/或本发明提供的药物组合物和/或本发明提供的嵌合抗原受体。在某些实施方式中，本发明提供了一种试剂盒，其包含本发明提供的抗体或其抗原结合片段和第二治疗剂。在某些实施方式中，第二治疗剂选自化疗剂、抗癌药物、放疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、靶向治疗剂、细胞治疗剂、基因治疗剂、激素治疗剂、抗病毒剂、抗生素、镇痛药、抗氧化剂、金属螯合剂和细胞因子。[0588]如果需要，这样的试剂盒可以进一步包括各种常规药物试剂盒组分中的一种或多种，例如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、另外的容器等，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。试剂盒中还可以包括指示要施用的组分的量的说明书(作为插入物或标签)、施用指南和/或混合组分的指南。[0589]使用方法[0590]本发明还提供了治疗、预防或缓解受试者中cldn18相关疾病、病症或状况的方法，包括向受试者投与治疗有效量的本文提供的抗体或其抗原结合片段，和/或本文提供的药物组合物，和/或本文提供的嵌合抗原受体。在某些实施方式中，cldn18相关疾病、病症或状况是cldn18.2相关疾病、病症或状况。在某些实施方式中，对象是人。[0591]在一些实施方式中，与cldn18相关的疾病、病症或状况的特征在于表达或过表达cldn18(特别是，cldn18.2)。[0592]在一些实施方式中，与cldn18相关的疾病、病症或状况是癌症。在一些实施方式中，所述癌症是表达cldn18的癌症。本发明中所用的“表达cldn18的”癌症是指特征在于在癌细胞或浸润肿瘤的免疫细胞或免疫抑制细胞中表达cldn18(具体地，cldn18.2)，并且在癌细胞或浸润肿瘤的免疫细胞或免疫抑制细胞表达cldn18(具体地，cldn18.2)的水平显着高于正常细胞所预期的水平的癌症。可以使用多种方法来确定来自受试者的测试生物样品中cldn18的存在或含量。例如，测试生物样品可以暴露于抗cldn18(特别是，抗cldn18.2)抗体或其抗原结合片段，其结合至并检测表达的cldn18(特别是，cldn18.2)蛋白。或者，也可以使用诸如qpcr、逆转录酶pcr、微阵列、sage、fish等方法在核酸表达水平上检测cldn18(特别是，cldn18.2)。在一些实施方式中，所述测试样品来自癌细胞或组织或浸润肿瘤的免疫细胞。参考样品可以是从健康或未患病的个体获得的对照样品，或者是从从其获得测试样品的同一个人获得的健康或未患病的样品。例如，参考样品可以是与测试样品(例如肿瘤)相邻或附近的未患病样品。[0593]在某些实施方式中，癌症是上皮细胞源性癌症。上皮细胞源性癌症是指来源于上皮细胞的癌症，如肺泡上皮细胞、胃粘膜上皮细胞、皮肤上皮细胞、血管上皮细胞、尿路上皮细胞等。[0594]在某些实施方式中，所述癌症选自下组：肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆囊癌、胃癌、肺癌、支气管癌、骨癌、肝胆管癌、胰腺癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、肾癌、肾盂和输尿管癌、唾液腺癌、小肠癌、尿道癌、膀胱癌、头颈癌、脊柱癌、脑癌、宫颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、结肠癌、结直肠癌、直肠癌、食道癌、胃肠道癌、皮肤癌、前列腺癌、垂体癌、阴道癌、甲状腺癌、喉癌、胶质母细胞瘤、黑素瘤、骨髓增生异常综合征、肉瘤、畸胎瘤、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓性白血病(aml)、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、t或b细胞淋巴瘤、胃肠道间质瘤、软组织肿瘤、肝细胞癌和腺癌。在某些实施方式中，所述癌症是白血病、淋巴瘤、膀胱癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、甲状腺癌、食道癌或乳腺癌或者其转移。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌、胰腺癌、食管癌、卵巢癌或其转移。[0595]在一些实施方式中，已确定受试者具有表达cldn18(特别是，cldn18.2)的癌细胞或肿瘤浸润性免疫细胞，其选择性水平显著高于非癌细胞上通常发现的水平。[0596]在另一个方面，提供在会从cldn18(特别是，cldn18.2)活性的调节中受益的个体中治疗疾病、病症或状况的方法，所述方法包含向有需要的个体施用如本发明所述的治疗有效量的抗体或其抗原结合片段和/或药物组合物。在某些实施方式中，所述疾病、病症或状况是以上定义的与cldn18(特别是，cldn18.2)相关的疾病、病症或状况。[0597]本发明所述的抗体或其抗原结合片段的治疗有效剂量依赖于本领域公知的多种因素，例如体重、年龄、过往病史、现用治疗、对象的健康状况和交叉感染的可能性、过敏、超敏和副作用，以及给药途径和肿瘤发展的程度。本领域技术人员(例如医生或兽医)可根据这些或其它条件或要求按比例降低或升高剂量。[0598]在某些实施方式中，如本发明所述的抗体或抗原结合片段可以在治疗有效剂量约0.01mg/kg到约100mg/kg之间给药。在某些实施方式中，给药剂量可随治疗进程变化。例如，在某些实施方式中，初始给药剂量可比后续给药剂量高。在某些实施方式中，给药剂量在治疗进程中根据给药对象的反应进行调整。[0599]给药方案可通过调整达到最优应答(例如，治疗应答)。例如，可进行单剂量给药或在一段时间分多个分隔的剂量给药。[0600]本发明中公开的抗体或其抗原结合片段可通过本领域公知的给药方式给药，例如肠胃外给药(如，皮下注射、腹腔注射、静脉注射，包括静脉滴注，肌肉注射或皮内注射)或非肠胃外给药途径(如，口服给药、鼻腔给药、舌下给药、直肠给药或外用给药)。[0601]在一些实施方式中，本发明中公开的抗体或其抗原结合片段可以单独给药或与治疗有效量的第二治疗剂联合给药。例如，本发明公开的抗体或其抗原结合片段可以与第二治疗剂(例如，化疗剂、抗癌药、放疗剂、免疫治疗剂、抗血管生成剂、靶向治疗剂、细胞治疗剂、基因治疗剂、激素治疗剂、抗病毒剂、抗生素、镇痛药、抗氧化剂、金属螯合剂或细胞因子)联合给药。[0602]本发明使用的术语“免疫疗法”是指刺激免疫系统对抗疾病(例如癌症)或以一般方式增强免疫系统的一种疗法。免疫疗法的实例包括但不限于检查点调节剂、过继性细胞转移、细胞因子、溶瘤病毒和治疗性疫苗。[0603]“靶向疗法”是一种作用于与癌症有关的特定分子的疗法，例如存在于癌细胞中但不存在于正常细胞中或在癌细胞中更为丰富的特定蛋白质，或癌症微环境中有助于癌症生长和生存的靶分子。靶向疗法将治疗剂瞄准肿瘤，从而使正常组织免受治疗剂的影响。[0604]在某些这样的实施方式中，本发明公开的抗体或其抗原结合片段与一种或多种另外的治疗剂联用时，可与所述的一种或多种另外的治疗剂同时给药，在某些这样的实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段和所述另外的治疗剂可作为同一个药物组合物的一部分同时给药。但是，与其他治疗剂“联用”的抗体或其抗原结合片段不需要同时给药或与该治疗剂在同一组合物中给药。本发明中“联用”的含义还包括，在另一个治疗剂之前或之后给药的抗体或其抗原结合片段也被认为是与该治疗剂“联用”，即使所述抗体或其抗原结合片段与第二种物质通过不同给药方式给药。在可能的情况下，与本发明中公开的抗体或其抗原结合片段联用的其他治疗剂可参照该其他治疗剂的产品说明书的方法用药，或参照外科医生的案头参考书2003(physicians’desk reference，57th ed；medical economics company；isbn：1563634457；57th edition(november 2002))，或参照其他本领域公知的方法。[0605]在另一方面，本发明进一步提供了调节cldn18(特别是，cldn18.2)阳性细胞中cldn18活性的方法，包括将cldn18阳性细胞暴露于本发明提供的抗体或其抗原结合片段和/或本发明提供的药物组合物和/或本发明提供的嵌合抗原受体。在一些实施方式中，cldn18阳性细胞是上皮细胞。[0606]在另一方面，本发明提供了检测样品中cldn18(特别是，cldn18.2)的存在或含量的方法，其包括将所述样品与所述抗体或其抗原结合片段和/或本发明提供的药物组合物接触，以及确定样品中cldn18(特别是，cldn18.2)的存在或含量。[0607]在另一方面，本发明提供了一种在个体中诊断与cldn18(特别是，cldn18.2)相关的疾病、病症或状况的方法，其包括：a)将获取自所述个体的样品与本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明提供的药物组合物接触；b)确定在所述样品中cldn18(特别是，cldn18.2)的存在或含量；以及c)将cldn18(特别是，cldn18.2)的存在或含量与所述与cldn18(特别是，cldn18.2)相关的疾病、病症或状况在个体中的存在情况或状况相关联。[0608]在另一方面，本发明提供试剂盒，所述试剂盒包含本发明所述的抗体或其抗原结合片段和/或本发明提供的药物组合物，其任选地与可检测部分缀合，可以用于检测与cldn18(特别是，cldn18.2)相关的疾病、病症或状况。所述试剂盒可以进一步包括使用说明。[0609]在另一方面，本发明还提供了本文提供的抗体或抗原结合片段和/或本文提供的药物组合物和/或本文提供的嵌合抗原受体在制备用于治疗、预防或缓解受试者中的cldn18(特别是，cldn18.2)相关疾病、症状或状况的药物中的用途，在制备用于诊断cldn18(特别是，cldn18.2)相关疾病、症状或状况的诊断试剂中的用途。[0610]以下实施例旨在更好地说明本发明，且不应理解为限制本发明的范围。所有下述的特定组合物、材料和方法，其整体或部分，都在本发明的范围内。这些特定的组合物、材料和方法不是为了限制本发明，而只是为说明特定的实施方式在本发明的范围内。本领域熟练技术人员可不经过创造性劳动以及不偏离本发明范围而开发出等同的组合物、材料和方法。应理解，在对本发明的方法作出的多种改动可以仍然包括在本发明范围内。发明人意在将这样的变动包括在本发明的范围内。[0611]实施例[0612]实施例1.制备抗体[0613]1.1.免疫[0614]为了产生针对cldn18.2的抗体，使用了三种不同的策略：使用人cldn18.2(hcldn18.2)稳定蛋白的蛋白质免疫、使用hcldn18.2表达质粒的基因免疫和使用cho-k1-hcldn18.2稳定细胞系的细胞免疫。实施例中使用的免疫原，即hcldn18.2表达质粒、cho-k1-hcldn18.2稳定细胞系、hcldn18.2稳定蛋白均是商购的，是从genscript购买的。imab362(zolbetuximab)是一种人源化抗cldn18.2抗体，在实施例中用作参考抗体，并从genscript购买。每种免疫原的描述见下表17。[0615]表17：每种免疫原的信息[0616]免疫原数量目的hcldn18.2表达质粒1mg，转染等级免疫cho-k1-hcldn18.2稳定细胞系》1x106/瓶，每份两瓶免疫hcldn18.2稳定蛋白2mg,纯度》70％免疫imab362100μg(》85％纯度，》1mg/ml)参考抗体[0617]具体而言，用hcldn18.2稳定蛋白免疫五只sjl小鼠，并用hcldn18.2表达质粒和cho-k1-hcldn18.2稳定细胞系分别免疫五只balb/c小鼠、五只c57小鼠和五只sjl小鼠。下文表18、19、20和21总结了免疫方案。初次免疫后进行多次增强，直到动物产生适合杂交瘤发育的满意血清滴度。使用参考抗体imab362的hcldn18.2稳定蛋白的elisa试验(见图1)、hcldn18.2稳定蛋白的elisa试验(见图2)和cho-k1-hcldn18.2稳定细胞系的facs试验(见图3)检测免疫小鼠的血清滴度。使用具有足够滴度的抗cldn18.2抗体的小鼠进行细胞融合。[0618]表18：蛋白免疫方案[0619][0620]表19：基因免疫方案[0621][0622][0623]表20：细胞免疫方案[0624][0625]表21：动物分组[0626][0627][0628]1.2.杂交瘤的产生与筛选[0629]在每次免疫的最后一次增强后的4天进行细胞融合。分离免疫小鼠的脾细胞和/或淋巴结细胞并与小鼠骨髓瘤细胞系(sp2/0)融合。针对hek293-hcldn18.2细胞的facs分析用于初步筛选(见图3)。选择特异性针对hcldn18.2的杂交瘤克隆，使用hek293-hcldn18.2细胞进行反筛选。将所述特异性针对hcldn18.2的克隆转移到24孔中，收集上清液并通过facs进行确认，并将针对hcldn18.2的杂交瘤克隆亚克隆以获得稳定的杂交瘤克隆。在1-2轮亚克隆后，扩增杂交瘤单克隆以产生抗体，并冷冻作为储备。[0630]培养约10天后，收集杂交瘤细胞培养基并通过蛋白a亲和层析柱(ge)纯化。共有76种纯化抗体显示以约1nm的ec50值与hek293-hcldn18.2细胞有效结合。其中，60种抗体显示独特的序列，4种抗体(即克隆35b4、33g12、15e10、40c1)显示hek293-hcldn18.2细胞死亡诱导；2种抗体(即克隆22e12和35a10)通过octet检测法鉴定出在pm以下的有效kd值；超过12种抗体显示出有效的kd值和良好的nk细胞adcc活性。杂交瘤筛选的代表图如图4所示。如图4所示，除33g12外，所有左侧测试抗体(即，克隆15e10、22e12、35a10、35b4、38b9)均显示出与hek-hcldn18.2细胞的特异性结合。[0631]实施例2.抗体表征[0632]2.1.抗体[0633]在以下详述的一系列结合和功能分析中，对杂交瘤克隆抗体15e10、22e12、33g12、35a10、35b4、38b9、60f11、97a9和99h8进行表征分析。[0634]2.2.杂交瘤测序[0635]按照试剂的技术手册从杂交瘤细胞中分离总rna。按照primescripttm第一链cdna合成试剂盒(1st strand cdnasynthesis kit)的技术手册，使用同种型特异性反义引物或通用引物将总rna反转录成cdna。根据genscript的cdna末端快速扩增(race)标准操作程序(sop)扩增抗体片段vh和vl。将扩增的抗体片段分别克隆到标准克隆载体中。进行菌落pcr以筛选具有正确大小插入物的克隆。对每个片段测序的插入物大小正确的菌落不少于5个。对不同克隆的序列进行比对，并提供这些克隆的一致序列。[0636]杂交瘤抗体的可变区序列如本发明提供的下表3所示。[0637]2.3.抗体结合亲和性、交叉反应性和选择性研究[0638]使用facs检测法来确定抗体对hek293-hcldn18.2细胞和表达原始cldn18.2的snu620细胞的结合亲和性、对hek293-hcldn18.1细胞的选择性以及对hek293-小鼠cldn18.2细胞的交叉反应性。根据atcc程序，将hek293-hcldn18.2细胞、hek293-hcldn18.1细胞和hek293-小鼠cldn18.2(hek293-mcldn18.2)细胞维持在含有嘌呤霉素的培养基中。如kclb程序所描述的，将snu620细胞维持在培养基中。收集细胞并在密度为1x 106个细胞/ml的封闭缓冲液中重新悬浮。将细胞转移至100μl/孔(1x105个细胞/孔)的96孔facs板，将所述facs板离心并用facs缓冲液(pbs，1％ fbs，0.05％吐温-20)洗涤两次。从15μg/ml开始，在facs缓冲液中制备3倍系列稀释的抗cldn18.2抗体。参考抗体imab362和小鼠/人对照igg分别用作阳性和阴性对照。将细胞重新悬浮在100μl/孔的稀释抗体中，并将培养板在4℃下培养60分钟。使用facs缓冲液清洗培养板，将alexa488标记的二级抗体(facs缓冲液中1:1000)添加到每个培养孔中，并在4℃下培养30分钟。使用facs缓冲液清洗培养板，并将细胞重新悬浮在100μl/孔的pbs中。然后用facscalibertm分析细胞并测定平均荧光强度。通过测试一系列抗体浓度，在表达hcldn18.2的细胞上生成完全结合曲线。使用prism软件测定每个抗体的表观亲和力。[0639]纯化的杂交瘤抗体与hek293-hcldn18.2细胞、hek293-hcldn18.1细胞、hek293-mcldn18.2细胞和snu620细胞的结合亲和性分别如图5a、图5b、图5c和图5d所示。如图5a～5d所示，所有受试杂交瘤抗体均以剂量依赖性方式与人和小鼠cldn18.2结合，仅克隆33g12与人cldn18.1结合。[0640]使用稳定表达cldn18.1或cldn18.2蛋白的hek293-hcldn18.2细胞、hek293-mcldn18.2细胞和hek293-hcldn18.1细胞，通过facs检测法测定纯化杂交瘤抗体针对hcldn18.2、mcldn18.2和hcldn18.1的交叉反应性和选择性。简单地说，抗体与靶细胞在4℃下培养1小时。洗涤后，添加荧光标记的抗小鼠或抗人igg第二抗体(life technologies)，并在4℃下培养1小时。检测几何中值荧光强度并计算ec50。下表22总结了6种功能性抗体的交叉反应性。特别值得注意的是，与同一实验中测试的其他抗体相比，33g12已识别hcldn18.1和hcldn18.2。[0641]2.4.表位分组[0642]竞争elisa法用于参考抗体的表位分组。简单地说，将过量竞争抗体和生物素标记的hcldn18.2与elisa微孔板包被的参考抗体共同培养。洗涤后，添加hrp-sa并在37℃下培养1小时。然后，添加100μl/孔tmb溶液(biotechnology)。在室温下培养15分钟后，通过添加50μl 1n hcl来终止反应。读取od 450nm。计算竞争比。可与参考抗体竞争结合hcldn18.2的抗体具有相似的结合表位。[0643]如下表22所示，共有6种抗体属于三个不同的表位组。克隆97a9、35b4和33g12与参考抗体imab362属于同一表位组。60f11和22e12属于同一表位组，与参考抗体imab362不同。[0644]具体而言，抗体97a9、35b4和33g12以及参考抗体imab362相互竞争结合hcldn18.2，表明它们可能结合到相同或密切相关的表位，如表22所示，该表位被分组为i组。抗体60f11和22e12不能与参考抗体imab362完全竞争，表明它们可能结合到不同的表位，如表22所示，该表位被分组为ii组。[0645]表22：抗cldn18.2抗体表征总结[0646][0647]-：无反应[0648]+：弱反应[0649]++：中反应[0650]+++：强反应[0651]n.d.：未检测[0652]实施例3：嵌合抗体的产生和表征[0653]3.1.嵌合抗体的产生与表征[0654]合成编码6种选择的杂交瘤抗体(即，克隆99h8、97a9、60f11、35b4、22e12、33g12)可变区的dna，并将其亚克隆到预先包含人igg1恒定基因的表达载体中。将载体转染到哺乳动物细胞中用于重组蛋白表达，并使用蛋白a亲和色谱柱纯化表达的抗体。所得的嵌合抗体在本发明中被称为ch99h8、ch97a9、ch60f11、ch35b4、ch22e12、ch33g12，其中前缀“ch”表示“嵌合”，后缀表示杂交瘤抗体克隆，例如“99h8”表示它来自杂交瘤抗体99h8。[0655]3.2.嵌合抗体的表征：抗体依赖性细胞毒性(adcc)研究[0656]测试纯化的6种嵌合抗体的抗体依赖性细胞毒性(adcc)活性。简单地说，如上文所述培养靶细胞，即hek293/hcldn18.2细胞，并在研究前收集并用预热pbs洗涤两次。将分离的细胞用pbs再悬浮，并用celltracetm violet标记，将细胞密度调整为4x105个细胞/ml，并将每孔25μl添加到96孔板中。将抗体浓度稀释至40μg/ml，并每孔添加25μl，以达到10μg/ml的最终浓度。然后将细胞在37℃下避光培养15分钟。效应细胞，即人pbmc，制备为5x106/ml，每孔添加50μl，e/t＝25:1。将细胞混合物在37℃下培养2h，然后用pi染色，并用facs分析活/死细胞。[0657]adcc研究结果如上文表22和图6所示。如图6所示，所有测试的嵌合抗体均显示出良好的adcc效应。[0658]以nugc-4细胞为靶细胞的adcc中6种嵌合抗体(即ch99h8、ch97a9、ch60f11、ch35b4、ch22e12、ch33g12)的剂量反应按照与上述程序类似的程序进行，结果如图7所示。如图7所示，所有6种测试的嵌合抗体均表现出诱导nugc-4细胞死亡的活性。[0659]以hek293-hcldn18.1细胞为靶细胞的adcc中6种嵌合抗体(即ch99h8、ch97a9、ch60f11、ch35b4、ch22e12、ch33g12)的剂量反应按照与上述程序类似的程序进行(除了靶细胞为hek293-hcldn18.1细胞，e/t＝12.5:1，培养时间为3h之外)，结果如图8所示。如图8所示，与参考抗体imab362相比，除了ch33g12之外，所有其他测试的嵌合抗体均未导致hek293细胞死亡显著增加。[0660]3.3.嵌合抗体表征：补体依赖性细胞毒性(cdc)研究[0661]使用过表达hcldn18.2的hek293细胞评估6种嵌合抗体(即ch99h8、ch97a9、ch60f11、ch35b4、ch22e12、ch33g12)诱导cdc活性的能力。将靶细胞，即hek293-hcldn18.2细胞与正常人血清(25％)共培养2h(含或不含抗体)，然后收集细胞，使用pi染色活/死细胞，并通过facs分析。[0662]cdc研究结果如上面的表22和图9所示。如图9所示，所有测试的嵌合抗体均显示出良好的cdc效应，与参考抗体imab362相当。[0663]实施例4.抗体的人源化与亲和力成熟[0664]4.1.人源化[0665]选择22e12抗体和35b4抗体作为人源化克隆。使用序列比对对抗体序列进行分析，以确定最匹配的种系，然后使用最佳拟合模型确定这些反向突变位点。合成优化的突变体并制备重组抗体，用流式细胞仪测定结合亲和力。在嫁接和反向突变后，一些35b4和22e12人源化抗体的亲和力被保留。这些最佳性能通过adcc和/或cdc试验进行功能评估。[0666]共获得克隆35b4的15个人源化抗体克隆，混合并匹配人源化35b4重链可变区的3个变体(即hu35b4.h1、hu35b4.h2和hu35b4.h3)和人源化35b4轻链可变区的5个变体(即hu35b4.l1、hu35b4.l2、hu35b4.l3、hu35b4.l4和hu35b4.l1s92a)。15个人源化抗体克隆被命名为hu35b4.h1l1、hu35b4.h1l2等，如下表23所示，其中前缀“hu”表示“人源化”，例如，后缀“h1l1”表示人源化35b4抗体克隆的序列号，其具有hu35b4.h1变体和hu35b4.l1变体的可变区。[0667]表23：35b4的人源化抗体的重链可变区和轻链可变区[0668][0669]同样，共获得了克隆22e12的12种人源化抗体，混合并匹配人源化22e12重链可变区的4种变体(即hu22e12.h1、hu22e12.h2、hu22e12.h3、hu22e12.h4)和人源化22e12轻链可变区的3种变体(即hu22e12.l1、hu22e12.l2、hu22e12.l3)。12种人源化抗体克隆以相同的方式被命名为hu22e12.h1l1、hu22e12.h1l2等，如下表24所示。[0670]表24：22e12的人源化抗体的重链可变区和轻链可变区[0671][0672]4.2.人源化抗体表征：结合亲和力[0673]表23和表24中的人源化抗体是重组产生的，随后进行了结合亲和力测试，结果表明能够保留hcldn18.2结合特异性。通过使用过表达hcldn18.2的mfc细胞进行facs分析，对22e12的人源化抗体和参考抗体imab362与hcldn18.2的结合亲和力进行了表征。通过使用过表达hcldn18.2的snu620细胞进行facs分析，对35b4的人源化抗体和参考抗体imab362与hcldn18.2的结合亲和力进行了表征。简单地说，每个人源化抗体和参考抗体在2％fbs中稀释至最高浓度(200nm)，然后使用2％fbs进行3倍系列稀释。以400g离心5分钟收集细胞。然后将细胞重新悬浮在2％fbs中，并在96孔板中进行铺板，在100μl/孔中进行1x105个细胞/ml的铺板。加入200μl 2％fbs，以400g离心5分钟，然后再次洗涤。将细胞重新悬浮在含有100μl/孔的测试抗体的2％fbs中。用2％fbs洗涤细胞2次，在400g下离心5min，然后丢弃上清液。将细胞重新悬浮在含有100μl/孔的第二抗体的2％fbs中，在4℃下培养60分钟。用2％fbs洗涤细胞2次，并在1000rpm下离心5分钟，然后丢弃上清液。最后，将细胞重新悬浮在100μl 2％fbs中，并通过facs进行分析。[0674]显示较强亲和力的人源化抗体如下表25-26以及图10a、10b、11a、11b所示。ec50值是指达到本检测信号50％的指示抗体浓度。[0675]表25：hu22e12抗体对mfc细胞的结合亲和力[0676][0677]表26：hu35b4抗体对snu620细胞的结合亲和力[0678][0679]5 4.3.人源化抗体的表征：adcc研究[0680]具有相对较高亲和力的人源化抗体(例如hu22e12.h1l2、hu35b4.h1l2)在功能分析(包括adcc研究)中进行了进一步评估。采用上述实施例3.2中所述的类似方法在hek293/hcldn18.2细胞或nugc4细胞中进行adcc研究(不同之处在于效应细胞为nk-cd16a细胞)。[0681]10adcc研究结果分别如图12a(hek293/hcldn18.2细胞)和图12b(nugc4细胞)所示。如图12a和图12b所示，两种测试的人源化抗体(即hu22e12.h1l2、hu35b4.h1l2)显示出与亲代嵌合抗体相似的良好adcc效应，并且与参考抗体imab362相比具有更好的效果。[0682]实施例5：通过fc改造增强adcc[0683]15 5.1.fc改造[0684]人igg1(higg1)fc区域被设置为进行点突变的模板，以调节其与fcγ受体和/或补体的结合。总共开发了6个经改造的fc区域，如下表27所示。如上所述，制备具有这些经改造的fc区的ch99h8、ch22e12、人源化22e12和人源化35b4的重组抗体。并对其进行adcc诱导活性评价。[0685]表27：higg1 fc区的修饰[0686]突变名称突变位置adeg236a,s239d,i332edles239d,a330l,i332edes239d,i332edftes239d,h268f,s324t,i332elplilf243l,r292p,y300l,v305i,p396lvlplll235v,f243l,r292p,y300l,p396l[0687]5.2.fc改造的抗体的adcc活性[0688]使用过表达hcldn18.2的hek293细胞评估fc改造抗体诱导adcc活性的能力。fc改造抗体的adcc研究采用上述实施例3.2中所述的类似方法进行(不同之处在于效应细胞为nk-cd16a细胞)。adcc研究结果如图13a和图13b所示，ec50值如表28和表29所示。如表28、表29、图13a和图13b所示，与未经fc改造的抗体相比，所有经测试的fc改造抗体显示出增强的adcc效应。[0689]表28：fc改造的人源化35b4抗体的ec50值[0690][0691][0692]表29：fc改造的人源化22e12抗体的ec50值[0693]抗体idec50(nm)hu22e12.h1l2-ade0.007649hu22e12.h1l2-dle0.005027hu22e12.h1l2-de0.006373hu22e12.h1l2-vlpll0.009973ch22e120.1255hu22e12.h1l20.1444higg1 isotypen/aimab3620.228[0694]实施例6：免疫组织化学(ihc)染色[0695]对几种示例性的抗体进行ihc染色。ga006是胃癌的患者源性异种移植瘤(pdx)模型(cldn18.2高表达)，pa6262是胰腺癌的pdx模型(cldn18.2低表达)，ly6933是淋巴瘤的pdx模型(无claudin18.2表达)。采集pdx肿瘤标本，制备石蜡包埋切片。然后对抗cldn18.2抗体60f11、40c1、35b4、35a10、22e12、33g12、15e10、97a9、84f2、38b9、73e4和99h8进行染色，并使用hrp标记的抗小鼠igg抗体检测其结合。用dab底物显影后，在显微镜下观察组织切片中抗体染色的颜色。ihc的代表性图像如图14所示。如图14所示，抗体15e10与ga0006结合的得分最高，与ly6933结合的得分最低，这表明抗体15e10有助于诊断cldn18(特别是cldn18.2)相关疾病。其他测试的抗体的结果相似，此处未显示。[0696]实施例7：使用表面等离子共振(spr)进行的动力学研究[0697]发明人对几种示例性抗体进行了动力学研究。具体地，使用biacore(ge)表征了人源化抗体hu35b4.h1l2和hu22e12.h1l2、嵌合抗体ch99h8和ch97a9、以及参考抗体imab362与cldn18.2的结合亲和力。简而言之，使用胺偶联试剂盒(ge)将重组cldn18.2蛋白固定在cm5芯片(ge)上。将6xhis标记的人cldn18.2抗原稀释至10μg/ml用于固定化(固定时间：120秒)。将待测试的抗体系列稀释成多个剂量，最大浓度分别为200nm(hu35b4.h1l2)、25nm(hu22e12.h1l2)、100nm(ch99h8)、50nm(ch97a9)和100nm(imab362)。所有测试的抗体的结合时间均为120秒。解离时间为600秒(对于hu22e12.h1l2)或180秒(对于其他测试的抗体)。使用1:1global fitting用biacore t200 analysis v10进行动力学分析。计算每种抗体的ka/kd/kd值。测试的抗体的亲和力数据总结于下表30和图15a至15e中。如表30和图15a至15e所示，与参考抗体imab362相比，测试的人源化抗体和嵌合抗体显示出较好的亲和力，顺序为hu22e12.h1l2》hu35b4.h1l2,ch99h8,ch97a9》imab362。[0698]表30.使用spr测定的抗体与cldn18.2的结合亲和力[0699][0700]实施例8：抗体在snu620细胞中引起靶内化[0701]测试了几种示例性抗体的内化率来评估它们在抗体-药物缀合物领域的潜力。简而言之，将测试的抗体稀释至200nm，等分成两板，50μl/ab/孔，一式两份。培养并收集snu620细胞作为单核细胞，然后将50μl facs缓冲液中的2x105个细胞加入抗体板中。将细胞板在4℃下培养半小时进行抗体结合，然后通过使用facs缓冲液进行几次旋降和重悬浮循环来去除未结合的抗体。加入100μl细部培养媒介来悬浮细胞，一个板在4℃下培养2小时，另一个板在37℃下培养2小时。几轮洗涤之后，重复3次洗涤步骤，将所有的细胞在4℃下使用荧光标记的抗higg抗体染色1小时，然后用facs读数。使用如下公式计算内化率，结果如图16所示。[0702]内化(％)＝(mfi(4℃)-mfi(37℃))/mfi(4℃)[0703]如图16所示，一些测试的抗cldn18.2抗体(例如，ch319f2、ch317a7、ch315f10、ch256c10-1、ch226d5等)均能够在结合cldn18.2之后有效地被内化，表明它们适合用于抗体-药物缀合物做进一步研究。[0704]实施例9：抗cldn18.2抗体与抗sirpα抗体的组合治疗[0705]本实施例评估了本发明的抗cldn18.2抗体与抗sirpα抗体联合治疗的体内效果。简而言之，将过表达hcd47/hcldn18.2的mc38细胞接种至hcd47/hsirpα双敲入的c57bl/6小鼠，在d0(即，第0天)时，肿瘤体积约为100mm3。将小鼠分为五组(每组7只小鼠)，分别使用媒介、人igg1同种型、hu22e12.h1l2抗体单独、抗sirpα抗体(本实验室自制)单独以及hu22e12.h1l2抗体+抗sirpα抗体处理每组的小鼠，腹腔注射，每周两次。测量每只小鼠的肿瘤体积和体重，每周两次。图17a和图17b显示了每只小鼠肿瘤体积和体重随着处理后的天数的变化。如图17a和图17b所示，人源化抗体hu22e12.h1l2显著地抑制了表达cldn18.2的肿瘤细胞，并且抗sirpα抗体显著地改善了hu22e12.h1l2的体内效果。









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