一种N-Boc-L-焦谷氨酸乙酯对映异构体的分离方法及其应用与流程 专利技术说明

测量装置的制造及其应用技术一种n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体的分离方法及其应用技术领域1.本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及一种n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体的分离方法及其应用。背景技术：2.l-焦谷氨酸酯是一类重要且极具应用前景的手性诱导试剂，其具有五元含氮杂环和酯羰基、酰胺基双功能结构，且5个碳的反应活性各不相同，因此，l-焦谷氨酸酯可作为理想的手性原料合成大量天然或非天然的手性化合物，同时，由于其具有天然保温性能，作为原料/中间体广泛应用于日化和医药工业领域。由于制备条件较为温和，操作简便，n-boc-l-焦谷氨酸乙酯成为了最常用的l-焦谷氨酸酯之一，然而，由于其对映异构体n-boc-d-焦谷氨酸乙酯含量占比，会直接影响往后的工艺，进而直接影响该药物疗效。因此，分离n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体对加强n-boc-l-焦谷氨酸乙酯质量控制具有重要意义。3.然而现有技术中尚未有n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体分离方法的相关报道。技术实现要素：4.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体的分离方法。5.本发明还提出一种n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体的检测方法。6.本发明还提出上述分离或检测方法的应用。7.根据本发明的一个方面，提出了一种n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体的分离方法，包括如下步骤：取含n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体的供试品，通过液相色谱进行分离，所述液相色谱的色谱条件包括：以大赛璐色谱柱ad-h为固定相，以含有正己烷和无水乙醇的混合溶液作为流动相等度洗脱，其中，所述流动相中正己烷与无水乙醇的体积比为3～9：1，优选为5.67：1。8.根据本发明的一种优选的实施方式，至少具有以下有益效果：通过本发明方案的色谱条件可实现n-boc-l-焦谷氨酸乙酯与其对映异构体的有效分离，两者分离度可达9.77以上。同时，通过本发明方案中n-boc-l-焦谷氨酸乙酯的保留时间短，可实现快速有效分离，为控制n-boc-l-焦谷氨酸乙酯的品质提供了技术保障。9.在本发明的一些实施方式中，所述大赛璐色谱柱ad-h的规格参数包括：柱长250mm，内径4.6mm，料径为5μm。10.在本发明的一些实施方式中，所述液相色谱的色谱条件还包括：流速为0.5ml/min～1.5ml/min；优选为1ml/min。11.在本发明的一些实施方式中，所述液相色谱的色谱条件还包括：柱温为室温。12.在本发明的一些实施方式中，所述室温是20℃～35℃；优选为25℃～35℃。13.在本发明的一些实施方式中，所述液相色谱的色谱条件还包括：进样量为10μl～30μl，优选为20μl。14.在本发明的一些实施方式中，所述流动相和/或稀释液中添加有二乙胺。加入二乙胺使峰型更好。15.在本发明的一些实施方式中，所述流动相和/或稀释液中二乙胺的体积占比为0.1～2％。16.在本发明的一些实施方式中，所述供试品为采用稀释液处理后的供试品，所述稀释液为正己烷-无水乙醇-二乙胺。本发明方案可仅在稀释液中添加，节约成本。17.在本发明的一些实施方式中，所述供试品为采用稀释液处理后的供试品，所述稀释液为正己烷-无水乙醇-二乙胺，三者的体积比依次为85：15：(0.1～2)。18.在本发明的一些优选实施方式中，所述供试品为采用稀释液处理后的供试品，所述稀释液为正己烷-无水乙醇-二乙胺，三者的体积比依次为85：15：1。19.根据本发明的另一个方面，提出了一种n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：通过上述分离方法进行分离后，通过检测器对n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体进行检测。20.根据本发明的一种优选的实施方式的检测方法，至少具有以下有益效果：通过本发明方案对n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体进行分离后，通过检测器检测时，色谱峰峰型良好，基线稳定，能够准确定位n-boc-l-焦谷氨酸乙酯与其对映异构体的主峰位置，具有专属性强、精密度高、准确度高、耐用性好等优点。21.在本发明的一些实施方式中，所述检测器为紫外检测器。22.在本发明的一些实施方式中，所述紫外检测器的检测波长为210nm。23.在本发明的一些实施方式中，所述检测方法还包括通过保留时间对检测结果进行定性分析的步骤。24.在本发明的一些实施方式中，所述检测方法还包括通过面积归一法对检测结果进行定量分析的步骤。25.根据本发明的再一个方面，提出了上述分离或检测方法在n-boc-l-焦谷氨酸乙酯的质量控制中的应用。26.根据本发明的一种优选的实施方式的质量控制，至少具有以下有益效果：本发明方案的分离方法及检测方法在n-boc-l-焦谷氨酸乙酯的质量控制中具有良好的应用前景。27.本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。附图说明28.本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：29.图1是本发明实施例1检测空白溶液的色谱图；30.图2是本发明实施例1检测系统适用性溶液的色谱图；31.图3是本发明实施例1检测供试品g22070401-1的色谱图；32.图4是本发明实施例1检测供试品g22070401-2的色谱图；33.图5是本发明实施例1检测供试品g22090501-1的色谱图；34.图6是本发明实施例1检测供试品g22090501-2的色谱图；35.图7是本发明实施例1检测供试品g22100802-1的色谱图；36.图8是本发明实施例1检测供试品g22100802-2的色谱图；37.图9是本发明实施例1检测供试品g22100803-1的色谱图；38.图10是本发明实施例1检测供试品g22100803-2的色谱图；39.图11是本发明实施例2检测系统适用性溶液的色谱图；40.图12是本发明实施例3检测系统适用性溶液的色谱图。具体实施方式41.以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到的试剂和材料。如无特别说明，各实施例中同一参数取值相同。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。42.实施例143.本实施例提供了一种n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映异构体的分离方法，具体过程为：取供试品溶液(制备过程如下：称取约0.02g供试品，精密称定，置20ml量瓶中，用稀释液[正己烷：无水乙醇：二乙胺＝85：15：(0.1～2)]溶解)，通过高效液相色谱仪(thermo scientific ultimate3000)对其进行分离。高效液相色谱仪的色谱条件如下：[0044]色谱柱：ad-h，(4.6*250mm，5μm)[0045]流动相：正己烷：无水乙醇＝85：15(洗脱方式为等度洗脱)[0046]稀释液：正己烷：无水乙醇：二乙胺＝85：15：1[0047]柱温：室温[0048]流速：1.0ml/min[0049]进样量：20μl[0050]本实施例还提供一种检测方法，经上述条件分离后的供试品，经内置于高效液相色谱仪中的紫外检测器在210nm下进行检测，并对检测结果通过面积归一化法进行定量分析。[0051]具体地，定量分析过程如下：先取稀释液适量，精密量取20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中除空白试验色谱峰后，按记录色谱图，供试品溶液的色谱图中除空白试验色谱峰后，按计算n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映体的质量占比。[0052]上述检测方法在检测过程中还包括通过对照品对系统适应性进行验证的步骤：称取n-boc-l-焦谷氨酸乙酯、n-boc-d-焦谷氨酸乙酯工作对照品各0.02g，置20ml量瓶中，加入适量稀释液溶解，并用稀释液稀释至刻度，即得。(每1ml约含n-boc-l-焦谷氨酸乙酯、n-boc-d-焦谷氨酸乙酯各1mg)。[0053]空白试验结果如图1所示，系统适应性结果如图2所示。供试品检测过程中随机选取了某工厂生产(2s,5r)-5-[(苯基甲氧基)氨基]-2-哌啶羧酸乙酯草酸盐过程中产生的n-boc-l-焦谷氨酸乙酯四个批次样品g22070401、g22090501、g22100802和g22100803)，每个批次参照前文所述步骤制备两个供试品溶液进行检测，检测结果如图3～10所示。[0054]从图1中可以看出，空白溶液对检测过程无干扰。[0055]从图2中可以看出，n-boc-l-焦谷氨酸乙酯和n-boc-d-焦谷氨酸乙酯主峰之间的分离度为5.72，n-boc-l-焦谷氨酸乙酯主峰理论塔板数为11085，n-boc-d-焦谷氨酸乙酯主峰理论塔板数为4190。均大于3000以上。且峰型良好。满足行业内对n-boc-l-焦谷氨酸乙酯系统适用性试验的要求(理论板数按n-boc-l-焦谷氨酸乙酯峰计算应不低于1500。n-boc-l-焦谷氨酸乙酯和n-boc-d-焦谷氨酸乙酯分离度应大于1.5)。由此表明本发明方案满足行业相关要求，具有良好的应用前景。[0056]从图3～10可以看出，本发明方案实际应用于n-boc-l-焦谷氨酸乙酯对映体分离时，可有效将n-boc-l-焦谷氨酸乙酯与其对映体分开，且基线稳定，峰型良好。[0057]汇总图3-10中的检测结果如下表1所示：[0058]表1[0059][0060][0061]从上表中可以看出，本发明方案对随机抽取的各批次的n-boc-l-焦谷氨酸乙酯及其对映体分离度均达到了9.77以上，同一批次样品检测结果基本一致，表明本发明方案的检测结果准确可靠。以n-boc-l-焦谷氨酸乙酯计算，理论塔板数在10273以上且n-boc-l-焦谷氨酸乙酯的保留时间在9.5min以内，表明本发明方案分离方法快速高效。因此，本发明方案在n-boc-l-焦谷氨酸乙酯的质量控制中具有良好的应用前景。[0062]实施例2[0063]本发明实施例2与实施例1的区别在于：流动相：正己烷：无水乙醇体积比为75：25(洗脱方式为等度洗脱)；稀释液：正己烷：无水乙醇：二乙胺＝75：25：1。[0064]系统适用性溶液(配制过程同实施例1，某工厂生产(2s,5r)-5-[(苯基甲氧基)氨基]-2-哌啶羧酸乙酯草酸盐过程中产生的n-boc-l-焦谷氨酸乙酯批号：g22070401+n-boc-d-焦谷氨酸乙酯批号：20220607混合样品)的检测结果如图11所示。[0065]实施例3[0066]本发明实施例3与实施例1的区别在于：流动相：正己烷：无水乙醇体积比为90：10(洗脱方式为等度洗脱)；稀释液：正己烷：无水乙醇：二乙胺＝90：10：1。[0067]系统适用性溶液(配制过程同实施例1，某工厂生产(2s,5r)-5-[(苯基甲氧基)氨基]-2-哌啶羧酸乙酯草酸盐过程中产生的n-boc-l-焦谷氨酸乙酯批号：g22070401+n-boc-d-焦谷氨酸乙酯批号：20220607混合样品)的检测结果如图12所示。[0068]从图11和12可以看出，当正己烷的体积占比为75％时，n-boc-l-焦谷氨酸乙酯与其对映异构体保留时间变长，分离度为6.07；当正己烷的体积占比为90％时，n-boc-l-焦谷氨酸乙酯与其对映异构体保留时间变短，分离度为4.13。综上所述，当正己烷的体积占比为75％～90％时，其对n-boc-l-焦谷氨酸乙酯与其对映异构体均具有较好的分离效果。上述实施例所称室温为25摄氏度。[0069]上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。









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